双抗夹心测蛋白实验的分析与改进

[目的]探索ELISA双抗夹心法的最优实验条件,充分发挥其高灵敏、强特异的优点。[方法]从操作的主要步骤出发,在标准品和溶液的配制以及温育等方面进行对比分析。[结果]合格标准品标准曲线的斜率在1.70～2.00,R2在0.99以上;样品稀释浓度的最佳临界值为60ng/ml。[结论]ELISA是个很敏感的试验,在操作过程中,标准品应在-80℃冷冻保存,配制时应避免偏高、偏低或没有梯度,加样量要仔细,应控制为100μl每孔。谨慎选择酶标板,确保吸附性能好、空白值低、孔底透明度高,各板之间和同一板各孔之间性能相近。洗涤浸泡时间确保为3min。