香蕉分化芽BBTV DAS-ELISA检测方法的建立和应用

为了解海南海口香蕉分化芽携带香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus, BBTV)的情况, 本研究建立了双抗夹心酶联免疫反应(DAS-ELISA)检测法, 对来自海南地区组培厂的香蕉分化芽进行检测。检测结果表明, 6个品种1 852个香蕉分化芽平均带毒率为2.1%, 其中‘皇帝蕉’为1.98%, ‘粤科1号’为2.07%, ‘广粉蕉’为1.98%, ‘大蕉’为6.25%, ‘218’为1.89%, ‘巴西蕉’为2.25%。为了进一步验证ELISA结果的可靠性, 随机选取12个阳性样品提取总DNA进行PCR鉴定。鉴定结果显示, 12个样品中11个检测出有BBTV, 表明DAS-ELISA方法的准确率较高, 与分子检测结果基本一致, 可以胜任日常香蕉组培苗BBTV的检测。     

甘肃省18种药用植物病毒病调查及2种病毒病的鉴定

2012年6月至2013年9月对甘肃省宕昌县、漳县、岷县、渭源县、陇西县、临洮县等地区种植的具有疑似病毒病症状的半夏等18种药用植物进行调查及采样。采用黄瓜花叶病毒(CMV)、苜蓿花叶病毒(AMV)、烟草花叶病毒(TMV)、番茄花叶病毒(ToMV)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯X病毒(PVX)、芜菁花叶病毒(TuMV)等7种双抗体夹心免疫酶联检测(DAS-ELISA)试剂盒初检, 并对CMV和ToMV采用反转录PCR(RT-PCR)方法复检, 结果表明, 半夏、掌叶大黄和红花3种药用植物受到黄瓜花叶病毒(CMV)侵染; 马兜铃、土贝母及当归3种植物受到番茄花叶病毒(ToMV)侵染; 样品中未检测到上述其他病毒种类, 其余12种病毒样品的病原尚未确定。本研究为国内首次报道CMV病毒侵染掌叶大黄、红花, ToMV病毒侵染马兜铃、当归和土贝母。此研究为防治上述病毒病提供了依据。     

番茄斑萎病毒4种检测方法比较

本研究根据番茄斑萎病毒(TSWV)S RNA上的核衣壳蛋白(N)基因保守序列设计特异性引物,比较了4种检测方法的灵敏度。结果表明,特异性引物可扩增出397bp的片段,序列和已发表的TSWV核苷酸序列同源性高达99%,可用于常规PCR和荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测。qRT-PCR的灵敏度比快速检测试纸条、双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)和常规PCR分别高出15 625倍、3 125倍和125倍,且能够准确定量;常规PCR灵敏度较高,但不能准确定量;DAS-ELISA方法适用于批量定性测定,但检测时间较长;试纸条法检测速度最快,但灵敏度最低,使用时可根据症状程度和试验条件选择适宜的检测方法。     

进境玫瑰鲜切花李属坏死环斑病毒的检测鉴定

近期上海口岸连续多次从进境的玫瑰鲜切花中检出我国检疫性有害生物李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV),通过DAS-ELISA、RT-PCR、SYBR Green I实时荧光RT-PCR和序列分析等4种方法分别检测和复验该病毒,结果均为阳性,由此确定从进境玫瑰鲜切花中检出了PNRSV。同时本文分别检测玫瑰叶片、花瓣、茎干和花萼,结果均带有PNRSV,确定该病毒系统侵染玫瑰。     

我国马铃薯主产区病毒病发生情况调查

为了解我国马铃薯病毒病发生情况,在马铃薯主产区黑龙江、内蒙古、甘肃、云南等马铃薯田采集了具有典型病毒病症状的样品、疑似样品和随机无症样品,试管苗和原原种为随机样品,共649份。应用DASELISA方法筛查6种马铃薯主要病毒:PVX、PVY、PVS、PLRV、PVM和PVA。结果表明:129份样品为阳性,PVY的检出率最高,为9.86%,PVS次之,为6.47%;试管苗PVS检出最多,为32份,原原种PVX检出最多,为10份,大田样品PVY病毒发生比例最高,为54份;有38份样品是由多种病毒复合侵染造成的,大田PVY+PVS复合侵染率最高,为2.93%,PVS+PVY+PLRV次之,为0.98%,试管苗PVS+PVM复合侵染率最高,为4.85%。通过历年的检测结果比较,试管苗中PVS病毒检出率最高,原原种中PVX和PLRV病毒成为危害最为严重的病害,大田样品中PVY检出率一直居高不下。     

人工接种CMV后辣椒植株中病毒含量的时序变化及症状表型

以5份不同类型的辣(甜)椒为供试材料,人工接种CMV重花叶型株系,通过DAS-ELISA方法,分别检测接种5、10、15、20、25、30d后辣椒植株中CMV含量的时序变化,同时对供试材料进行人工接种抗性鉴定,并对2种方法得到的数据进行相关性分析。结果显示:不同类型供试材料接种5~15d后的病毒含量逐渐增加,并于15d时达到最高水平,之后略有回落;通过DAS-ELISA检测得到的植株病毒含量与人工接种抗性鉴定得到的病情指数呈正相关,说明2种鉴定方法获得的结果一致。     

Development of a Double-antibody Sandwich ELISA for Detection of Subgroup J Avian Leukosis Virus

A double-antibody sandwich ELISA (DAS-ELISA) was developed for the detection of subgroup J avian leukosis virus (ALV-J). Antibodies of DAS-ELISA were purified from the ALV-J gp85 mono-specific serum prepared by our laboratory earlier. Results of statistics analyses showed that DAS-ELISA had good specificity, repeatability and stability. The limitation of viral antigens for detection was 0.165 μg/mL. The coincidence between PCR and DAS-ELISA established here was 85.2%.     

种鸡场鸡白血病的净化研究(Ⅰ)--ALV感染情况调查

应用双抗主酶联免疫吸附试验（ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ）对北京地区和河北部分种鸡场及１家ＳＰＦ鸡场进行了鸡白血病病毒感染情况的调查，结果发现：不同品系的鸡对ＡＬＶ的感染率有显著差异；分别采用蛋清与肛拭作为试验样品，得到的结果是不相同的，研究认为，选择蛋清作为试验样品是鸡场净化过程中较理想的材料之一。     

抗·感棉花品种体内棉花黄萎菌的动态分布研究

[目的]检测接种后不同时间抗、感棉花品种体内棉花黄萎菌的分布情况。[方法]应用双抗体夹心酶联免疫吸附测定（DAS-ELISA）方法监测棉花黄萎菌在较抗棉花黄萎病的海岛棉品种海7124和较感棉花黄萎病的陆地棉品种鄂荆1号体内的传导情况。[结果]棉花黄萎菌可以有效侵入抗、感棉花品种的根部,但病原菌很少再向抗病品种海7124的上部茎和叶部传导,而感病品种鄂荆1号向上传导的菌量很大。[结论]初步确定海7124的抗病特性表现为不抗侵入但可有效抑制病原菌在体内的传导,感病品种鄂荆1号既不抗侵入也不抗传导。     

马流感病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

为建立一种快速、有效的检测马流感病毒(Equine influenza virus,EIV)的方法,以EIV中国分离株A/马/新疆/07(H3N8)制备的多克隆抗体为捕获抗体,原核表达的核蛋白(NP)制备的单克隆抗体为检测抗体,在国内首次建立了检测EIV的双抗体夹心ELISA方法.用该检测方法分别检测EIV、马动脉炎病毒、马疱疹病毒1型、马疱疹病毒4型和马乙型脑炎病毒阳性样品.结果表明,该ELISA方法具有良好的特异性;与常规检测EIV的血凝试验相比,其敏感性是后者的2.5～10倍;同时与H7N7亚型EIV有交叉反应.攻毒试验结果表明该方法可有效检测鼻腔分泌物中的EIV.该方法的建立为EIV的检测及早期防控提供了有效工具.