顶空-气相色谱-质谱联用法结合化学计量学 分析赣州烤烟样品中的挥发性化合物

【目的】挥发性香气成分作为烟气组分的前体物质，影响着烟草感官评吸质量，通过对赣州烤 烟样品中的挥发性化合物含量进行分析，挖掘不同产地烟叶中挥发性化合物的含量规律并进行产地预报分类， 从而实现对烟草的质量控制。【方法】通过静态顶空 - 气相色谱 - 质谱联用测定赣州 6 个产烟区县（石城、 瑞金、安远、会昌、兴国、信丰）共 62 个烤烟样品中的 54 种挥发性化合物含量，采用主成分分析（Principal component analysis, PCA）对样品产地进行分类，用遗传算法（Genetic algorithm, GA）进行变量筛选，用线性判 别分析（Linear discriminant analysis, LDA）、反传 - 人工神经网络（Back propagation-artificial neural network, BPANN）、最小二乘 - 支持向量机（Least squares-support vector machines, LS-SVM）3 种有监督模式识别方法进行 产地预报。【结果】直接对样品进行 PCA，分类效果并不理想；采用 GA 对挥发性化合物含量进行变量筛选后 得到 11 个变量，分类效果得到显著改善，结合分类结果分析了来自不同区县的样品中挥发性化合物的含量规律。 BP-ANN 和 LS-SVM 的预报正确率分别达到 96.8% 和 98.4%，展现了较好的实际使用价值，据此建立了赣州烤 烟样品的产地鉴别模型。【结论】该方法可以较为准确地判定赣州烤烟样品的来源，同时可以找到不同产地烤 烟挥发性化合物的含量规律，亦可用于全国各地烤烟的香型风格监测和质量控制。     

微波消解——动态反应池电感耦合等离子体质谱测定农产品中的痕量硒

建立用微波消解-动态反应池电感耦合等离子体质谱测定农产品中痕量硒的方法:HNO3经密闭微波消解系统处理农产品样品,以CH4为反应气,采用动态反应池(DRC)技术消除m/z 80处40Ar40Ar+对硒测定的干扰。系统考查反应气种类、流速、抑制参数q(RPq)等对信噪比(S/B)的影响。实验结果表明,当以80Se为分析物、CH4为反应气、流速为0.9 m L·min-1、RPq=0.7时可以有效消除干扰,信噪比最佳。该方法的线性范围为0.01~200μg·L-1,检出限为0.001μg·g-1,定量限为0.004μg·g-1,7次平行测定值的相对标准偏差(RSD)为3.39%,加标回收率为97.32%~101.1%。采用该方法对国家标准柑橘叶参考物质GBW10020进行分析,测定结果和标准值吻合。     

印度梨形孢诱导烟草对黑胫病的抗性及其机理的初步研究

印度梨形孢(Piriformospora indica)是分离自印度塔尔沙漠的植物根系内生真菌,能够诱导多种植物对生物和非生物逆境产生抗性,目前已作为一种模式真菌用于内生真菌与植物互作关系的研究。为了研究印度梨形孢对烟草(Nicotiana tobacum)抗黑胫病的影响,本研究采用烟草疫霉菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)分别接种根部有印度梨形孢定殖与未定殖的烟草,观察接种后根部有印度梨形孢定殖与未定殖的烟草发病情况,测定抗病相关防御酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)的活性变化及抗病相关基因的表达量,并通过平皿对峙试验研究印度梨形孢对烟草疫霉菌生长的影响。结果表明,接种烟草疫霉菌后,根部有印度梨形孢定殖的烟草发病严重度要显著低于对照;接种烟草疫霉菌后第1~10 d,根部有印度梨形孢定殖的烟草叶片中防御酶PAL、POD和PPO活性高于对照,在第1 d,PAL活性是对照烟草的3.99倍,在第2 d,POD活性是对照烟草的1.5倍,在第4 d,PPO活性是对照烟草的2.66倍;实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,q RT-PCR)结果显示,接种烟草疫霉菌后第6~96 h,根部有印度梨形孢定殖的烟草叶片中抗病相关基因PR1b、P450-2、hrs203J、Nm IMSP和P450-1的表达量高于对照;在第12 h,PR1b、P450-2、hrs203J的表达量分别是对照烟草的3.8、15.7和3.1倍,在第48 h,Nm IMSP的表达量是对照烟草的2.6倍,在第72 h,P450-1的表达量是对照烟草的1.5倍;平皿对峙试验结果显示印度梨形孢对烟草疫霉菌的生长没有抑制、重寄生作用。研究结果表明,印度梨形孢可显著提高烟草对黑胫病的抗性,对黑胫病的抗性不是通过印度梨形孢分泌的抗菌物质实现的,是与烟草中抗病相关基因表达量的上升、防御酶活性的提高有关。本研究初步揭示了印度梨形孢诱导烟草抗黑胫病的相关机理,为进一步深入研究烟草黑胫病的生物防治及其机理提供基础资料。     

印度梨形孢对水稻的促生作用及其机理的初探

印度梨形孢(Piriformospora indica)是一种能与植物建立互惠共生关系的根部内生真菌,能促进植物生长,增加作物产量。为了研究印度梨形孢对水稻生长发育的影响,将印度梨形孢与籼稻苗共培养后,分析印度梨形孢对水稻植株高度、生物量、分蘖数、抽穗期、穗粒性状、叶绿素含量、硝酸还原酶活性、根系活力以及生长相关调控基因表达水平的影响。结果显示,接种印度梨形孢的水稻株高、地上部干鲜质量、分蘖数、硝酸还原酶活性和根系活力显著高于对照;与对照相比,印度梨形孢定殖的水稻植株抽穗期提前4~6d;印度梨形孢处理第3、4周后,叶片叶绿素含量比对照分别增加了19.77%和17.89%。RT-PCR分析表明,印度梨形孢定殖的水稻植株叶片中生长素相关调控基因OsIAA13和YUCCA的上调表达,表达量分别为对照的1.49倍和1.30倍;负调控水稻生长的NRR基因表达量为对照的58%。印度梨形孢促进水稻地上部的生长与叶绿素含量、硝酸还原酶活性、根系活力和生长相关调控基因的表达有关,印度梨形孢可能通过提高光合速率、增强水稻对矿质营养的吸收与利用和诱导生长素的分泌,促进水稻地上部的生长。     

茶叶酰基化黄酮类化合物研究进展

黄酮的酰基化结构可增强产物的稳定性和功效性,已成为当前研究的热点。近年来,茶树中酰基化黄酮苷成分不断被分离、纯化和鉴定,其生物活性也受到越来越多的关注。本文对茶树体中的酰基化黄酮种类、化学结构、提取分离纯化方法及其生物学活性进行了总结和归纳,并对其发展趋势作了展望。     

高效液相色谱法检测黄瓜中的胶霉毒素

建立1种测定黄瓜中胶霉毒素残留的高效液相色谱法。以乙腈-水体积比84∶16为提取溶剂,提取黄瓜中的胶霉毒素,以269 nm为检测波长,甲醇、水梯度流脱,流速1.0 mL·min~(-1),进样体积20μL。该方法对黄瓜样品中胶霉毒素残留量检测的线性范围为0.101～10.1μg·mL~(-1),对黄瓜样品测定的回收率为99.5%～108.6%,对黄瓜样品测定的相对标准偏差为1.4%～5.0%。     

番茄斑萎病毒运动蛋白NSm的原核表达及抗体制备

将番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)运动蛋白NSm基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,利用大肠杆菌系统表达NSm蛋白,以Ni~(2+)-NTA agarose亲和柱纯化该蛋白与His组氨酸的融合蛋白,免疫家兔制备融合蛋白多克隆抗体。Western blot检测显示,该抗体与NSm重组蛋白以及普通烟病叶中的NSm蛋白具有特异性反应。采用该抗体对TSWV感染的普通烟叶片低温超薄切片进行免疫胶体金标记,透射电镜观察发现特异性金颗粒主要定位在病叶细胞的胞间连丝中,而健康烟草叶片组织中没有金颗粒特异性标记。结果表明,该抗体可用于研究NSm在细胞中的定位。     

双水相体系分离纯化黑糯玉米色素的研究

[目的]建立一种萃取分离纯化食用色素的新方法.[方法]研究在聚乙二醇(PEG)/硫酸铵双水相体系中,PEG浓度、(NH4)2SO4用量、溶液酸碱度等因素对黑糯玉米色素萃取分离纯化的影响,并利用响应面分析法确定了最佳分离纯化条件.[结果]研究表明,PEG浓度20％、(NH4)2SO4用量为6 g、溶液pH为3.5时,黑糯玉米色素萃取率最高,分离纯化的效果最好.[结论]双水相体系可用于分离纯化黑糯玉米色素.     

印度梨形孢诱导油菜抗旱性机理的初步研究

印度梨形孢(Piriformospora indica)是一种根部内生真菌,能够促进许多植物的生长,提高作物的产量,而且还能诱导植物产生对生物或非生物胁迫的抗性.为了研究印度梨形孢对油菜(Brassica napus L.)抗旱性的影响,本研究用20％的聚乙二醇6000(PEG)对有印度梨形孢定殖和无印度梨形孢定殖的油菜植株进行模拟干旱胁迫处理,分析两者在受干旱胁迫后丙二醛(MDA)含量、相对电导率大小、脯氨酸(Pro)含量、抗氧化酶(超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT))活性以及干旱相关基因表达水平的差异.结果表明,接种印度梨形孢的油菜植株叶片中MDA含量和相对电导率均显著低于未接种印度梨形孢的油菜植株;Pro含量显著高于未接种印度梨形孢的油菜植株,在PEG处理后的第72小时,接种印度梨形孢的油菜叶片中Pro含量是未接种印度梨形孢的油菜的1.3倍;SOD、POD和CAT活性明显高于未接种印度梨形孢的油菜植株,PEG处理后的第24小时SOD、POD和CAT活性分别是对照油菜的1.17、1.38和1.27倍.RT-PCR分析表明,干旱胁迫下有印度梨形孢定殖的油菜叶片中编码合成脂质转运蛋白的基因575表达上调,PEG处理后的第9小时其表达量是对照的3.2倍.本研究研究结果表明印度梨形孢提高油菜对干旱胁迫的抗性与MDA含量、质膜透性、Pro含量、抗氧化酶活性和干旱相关基因的表达相关,印度梨形孢可能是通过提高油菜整体抗氧化能力、维持细胞生物膜完整性和细胞内渗透压以及降低膜脂的过氧化水平,从而增强了油菜对干旱胁迫的抗性.本研究初步明确了印度梨形孢提高油菜抗旱性的作用与部分机理,为深入研究印度梨形孢提高油菜的抗逆性作用及其机理提供基础资料.     

荧光蛋白mNeonGreen、mKOk作为FRET传能对在研究植物蛋白质互作中的应用分析

蛋白质相互作用是蛋白质组学研究的重要方向之一,对解析植物病原微生物与寄主植物之间的博弈具有十分重要的意义。荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)作为一种新技术,能够在活细胞的正常生理条件下进行检测,并具有灵敏度高,假阳性较低,实验周期短的优势,在研究蛋白质相互作用过程中得到了广泛的应用。本研究选取了2种新型的荧光蛋白mNeonGreen/mKOk作为FRET传能对,并与传统的传能对CFP/YFP相比较,证实mNeonGreen/mKOk背景干扰较低。通过构建并表达荧光蛋白与目标蛋白的融合蛋白,利用FRET技术成功地在植物细胞中验证了蛋白质间的相互作用。本研究为FRET技术在植物细胞中的应用提供了更多的技术支持和借鉴。