黄柏苷对黄檗种子休眠程度影响的初步研究

为研究黄柏苷与环境温度、种子休眠程度的相关性,探讨黄柏苷在温度信号介导中可能存在的作用。以高效液相法检测不同生长地及年度黄檗叶片中的黄柏苷含量,滤纸培养法检测黄檗种子发芽率确定其休眠程度。持续监测生长地气温。通过在黄檗繁殖器官上喷施黄柏苷,考察黄柏苷对种子休眠程度的直接影响。结果表明,生长地花期均温相差5℃,黄檗叶片中黄柏苷含量均值相差54.46 mg/g,层积30天种子发芽率相差40.45%;不同年度间花期均温相差1.16℃,黄柏苷含量均值相差4.83 mg/g,层积30天种子发芽率相差23.07%;喷施黄柏苷,可使种子休眠程度显著加深,种子发芽率降低57.34%。研究结果提示三者之间存在环境温度越低,黄檗叶片中黄柏苷含量越高,黄檗种子休眠程度越深的关联,温度对黄檗种子休眠程度的调控可能是通过调节黄柏苷含量,经过某种体内途径实现的。     

北柴胡转录因子BcAP2-13的原核表达 和多克隆抗体制备

利用带有促溶标签SUMO和纯化标签6×His的原核表达载体,构建了调控北柴胡皂苷生物合成的转录因子基因BcAP2-13的原核表达载体p13-SUMO-His6。载体热激转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)后,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导培养,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明,28℃和37℃不同温度诱导条件下均得到了融合蛋白13-SUMO-His 6。以Ni-NTA柱纯化的融合蛋白为抗原,免疫成年兔4次以制备多克隆抗体。间接酶联免疫法检测结果表明,所得抗体效价较高。提取北柴胡毛状根及BcAP2-13超表达毛状根的总蛋白,免疫印迹检测结果表明,在2种毛状根蛋白样品中均能检测到与预计13-SUMO-His6蛋白分子量大小一致的条带,BcAP2-13过表达毛状根总蛋白样品的条带强于普通毛状根总蛋白样品的条带,与预期一致。成功制备了北柴胡BcAP2-13的多克隆抗体,为进一步研究北柴胡转录因子BcAP2-13的确切作用位点和调控机制奠定了基础。     

海南黎药海巴戟药材质量标准研究

为建立黎药海巴戟药材质量标准，为其质量控制及资源开发利用提供科学依据。依据《中国药典》2015 年版中药质量标准研制的要求，对药材性状、鉴别、检查、浸出物、含量测定等进行研究。明确了海巴戟药材性状和显微结构特征，并建立了其专属性薄层色谱鉴别方法；规定海巴戟药材多糖含量不得少于 6.0%、东莨菪内酯含量不得低于 0.017%、水分不得超过 10.0%、总灰分不得超过 6.0%以及醇溶性浸出物不得少于 20.0%。本研究制定的黎药海巴戟药材质量标准，可为该药材的质量控制提供依据。     

药食两用植物富硒研究进展

硒元素作为人体必需的微量元素之一,具有抗氧化、抗衰老、提高人体免疫力等预防保健作用,富硒产品越来越受到人们的欢迎。培育富硒药食两用植物,对深入开发富硒功能性食品,对人们的营养和保健具有重要意义。系统介绍了药食两用植物富硒研究的现状,指出其存在的问题与不足,并做出了展望。     

一种高质量天门冬基因组DNA提取方法

针对天门冬[Asparagus cochinchinensis(Lour.)Merr.]成熟叶片富含多糖、多酚、蛋白质及其他次生代谢物质的特点,采用改良CTAB法对其基因组总DNA进行提取,并对DNA进行质量检测。结果表明,改良CTAB法可从天门冬成熟叶片中获得纯度高、完整性好的总DNA,其OD260 nm/OD280 nm为1.86,OD260 nm/OD230 nm为2.36,浓度为390μg/mL,产率达11.7μg/g,多糖、多酚和RNA杂质被去除干净,无降解现象,说明该方法提取的天门冬基因组总DNA质量较高。     

6种草本药用植物种子超低温保存技术研究

以草本药用植物杜若、过江藤、夏枯草、皱果苋、罗勒和山香的成熟种子为材料,探讨了含水量和冷冻方法对种子超低温保存的影响。结果表明,经液氮超低温冷冻后,6种草本药用植物种子发芽率较对照组均有显著差异(p0.05);适宜的含水量下,种子经过超低温冷冻后其发芽率甚至高于对照组。3种冷冻方法中,玻璃化冷冻法更适合过江藤和山香种子的超低温保存,缓慢冷冻法更适合皱果苋、杜若和夏枯草种子的超低温保存,直接冷冻法适合于杜若和罗勒种子的超低温保存。所以,液氮超低温冷冻法保存杜若等6种草本药用植物种子是可行的;含水量对超低温保存前后夏枯草、山香和罗勒种子的发芽率影响显著。     

UPLC-MS/MS法测定鸡肉中盐酸吗啉胍残留量

建立了测定鸡肉中盐酸吗啉胍药物残留的新型超高效液相色谱-串联质谱方法。样品用三氯乙酸-乙腈提取并去除蛋白质,然后用Waters Acquity UPLC BEH HILIC色谱柱分离,以0.1%甲酸水溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱,质谱采用MRM扫描,外标法定量。结果显示:吗啉胍在(1.0~60.0)ng·m L-1范围内呈良好的线性关系,相关系数(r)大于0.990;检出限为0.5 ng·m L-1,定量限为1.0 ng·m L-1。本研究前处理方法简单快捷,质谱采用MRM扫描方法,灵敏度高,能够高效、灵敏地检测鸡肉中的盐酸吗啉胍药物。     

基于核糖体DNA第二内部转录间隔区(ITS2)序列鉴定四季青及其近缘种和混伪品

中药材四季青(Ilicis Chinensis Folium)的基原植物冬青(Ilex chinensis)是重要的园林观赏物种。利用DNA条形码技术可以快速、准确鉴定四季青及其近缘种和混伪品。本研究以冬青、铁冬青(Ilex rotunda)、秤星树(Ilex asprella)、枸骨(Ilex cornuta)和女贞(Ligustrum lucium)等37份植物样本为实验材料,提取全基因组DNA,扩增核糖体DNA第二内部转录间隔区(internal transcribed spacer 2,ITS2)序列并进行双向测序。测序结果利用Codon Code Aligner 4.2.7进行序列拼接,获得高质量ITS2序列。同时从Gen Bank中获得28条冬青的同属近缘种以及混伪品女贞、四川山矾(Symplocos setchuensis)的ITS2序列。基于隐马尔科夫模型(hidden Markov model,HMM)注释5.8S和28S,获得完整的ITS2区域,进而应用MEGA6.0(molecular evolutionary genetics analysis)进行冬青种间和种内序列分析,计算种内种间K2P(Kimura 2-parameter)遗传距离,构建邻接树(neighbor-joining tree,NJ tree)。结果表明,琼脂糖凝胶电泳得到清晰明亮的均一条带,说明利用通用的ITS2引物可以成功扩增到用于测序的PCR产物。通过PCR产物测序、数据处理和序列分析可知,冬青种内ITS2长度经过比对后为239 bp,全部样品的种间ITS2比对后长度为269 bp。冬青种内有4个变异位点以及6个单倍型,种间有143个变异位点,远远多于其种内变异位点。MEGA6.0分析结果表明,种间最小K2P遗传距离(0.094)大于种内最大K2P遗传距离(0.013)。邻接树显示,女贞和四川山矾分别以100%的自展支持率分别聚类,表现出良好的单系性,冬青属物种聚为一大支。冬青在冬青属下可以单独聚为一支,可以进行区分。冬青属其他物种以同一亚属聚为一支。研究结果表明,作为一种快速、准确、简便的分子生物学鉴定方法,ITS2可以应用于冬青及其近缘种和混伪品的鉴定,同时对于准确鉴定冬青属物种亦有巨大潜力,可为冬青属植物在临床上的用药安全和开发应用提供科学依据。     

林省几种野生民间 “桑黄” 的真伪鉴别

摘要：“桑黄”作为一种珍贵的药用真菌，无毒无副作用，在民间应用广泛，因真正的野生“桑黄”很少，而外表类似“桑黄”的其他种的真菌子实体很多，民间难以判别，许多被误以“桑黄”入药。作者从吉林省通化市采集了9种野生“桑黄”常见树种上的子实体共29个，进行了初步的真伪鉴别。目的 收集“桑黄”的野生资源，规范“桑黄”的民间使用，防止民间盲目用药带来的安全隐患；方法 采用直观描述等方法对子实体的外观形态和菌落的生长特性进行比较，并与中药材市场上的药用“桑黄”进行比较，鉴定其真伪；结论 子实体的外观形态,结合菌落生长特性和spass软件分析菌落生长速度的结果可以判断至少有10株菌不属于“桑黄”，有18个子实体外观和菌落形态特征都与药用“桑黄”类似，具体种类有待做进一步鉴定；暴马丁香树上的3个菌落特征明显，可做重点研究。     

引发剂对黄檗种子休眠解除作用的研究

黄檗种子具休眠特性，且休眠程度因种子产地和年份不同有较大差异，常规低温层积解除种子休眠的方法在实际生产中效果不甚理想，本文就引发剂解除黄檗种子休眠的作用进行研究，结果表明，NAA、6-BA、KNO3、PEG6000溶液浸种可部分解除种子的休眠，并显著提高种子发芽率；引发剂溶液浸种后4℃层积30d可有效解除种子休眠，其中GA3（1000mg/L）、 NAA（80mg/ L）、 6-BA（400mg/ L）、KNO3（1.0%）、PEG6000（20g/ L）溶液浸种后4℃层积30d可有效解除种子休眠，分别将黄檗种子发芽率分别从11.50%升高到91.00%、94.00%、97.00%、94.50%、83.00%。