含单萜酚结构酰胺类杂合分子的设计与合成及抑菌活性

为寻找具有良好抑菌活性的酰胺类化合物，本研究将天然单萜酚类化合物香芹酚和百里香酚与琥珀酸脱氢酶抑制剂(SDHI)药效团拼合，设计并合成了30个酰胺类杂合分子，其结构经核磁共振氢谱(1H NMR)、碳谱(13C NMR)及高分辨质谱(HRMS)等确认。采用菌丝生长速率法测定了目标化合物对5种植物病原真菌的抑菌活性。结果表明，目标化合物对茄链格孢菌Alternaria solani和灰葡萄孢Botrytis cinerea的抑菌活性较好，其中 7e (N-(4-羟基-5-异丙基-2-甲基苯)-3-甲基噻吩-2-酰胺)的活性最高，对茄链格孢菌和灰葡萄孢的EC₅₀值分别为3.28和15.06 μg/mL，且 7e 与啶酰菌胺之间没有交互抗性。琥珀酸脱氢酶(SDH)活性测定表明， 7e 对灰葡萄孢敏感、抗性和B-P225F突变菌株的SDH均具有较强的抑制活性。分子对接研究表明， 7e 与野生型和突变型灰葡萄孢琥珀酸脱氢酶(BcSDH)之间具有较强的亲和力；推测 7e 是潜在的新型SDHI，其与啶酰菌胺之间对菌株SDH抑制活性的差异和与野生型和突变型BcSDH之间结合模式的差异，可能是二者之间没有交互抗性的原因。     

草地贪夜蛾鱼尼丁受体与双酰胺类杀虫剂的结合模式及抗性风险分析

为研究草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda (以下简称FAW) 对双酰胺类杀虫剂的抗性机制，根据FAW鱼尼丁受体 (ranodine receptor，RyR) 跨膜区域的氨基酸序列，通过同源建模的方法构建其三维结构；通过对比FAW与小菜蛾Plutella xylostella (以下简称DBM)RyR跨膜区域的氨基酸序列，发现两者具有较高的同源度，进而根据已报道的FAWRyR的突变位点I4734M及DBMRyR的突变位点G4946E (对应FAWRyR的G4891)，在FAWRyR中引入突变，采用分子对接的方法分别分析其突变前后与5种双酰胺类杀虫剂的结合模式。结果表明:FAWRyR的I4734M突变模型与5种双酰胺类杀虫剂的亲和力与野生型的无明显差别，均存在氢键、卤键、疏水作用、π-π相互作用及π-阳离子作用等非共价相互作用；但G4891E突变模型与5种双酰胺类杀虫剂的亲和力下降、形成的作用力方式减少，从而影响RyR与双酰胺类杀虫剂的结合稳定性。本研究分析发现，FAWRyR的G4891E突变可能导致其对双酰胺类杀虫剂产生抗性，需在今后的研究中关注该突变。该研究结果还可会为基于鱼尼丁受体设计杀虫剂提供参考。     

入侵杂草虉草在云南的发生、危害和防除状况调查

采用倒置"W"九点取样法和5级目测法,调查了云南冬季作物田杂草虉草的发生和危害状况。结果表明,截至2017年在云南有7个地州33个区县发现有虉草危害,其中保山地区危害最为严重,占全省受害面积的92%,其次是大理白族自治州。虉草在冬季作物田大麦、小麦、油菜和蚕豆田均有发生。危害的虉草有两个种,分别是小籽虉草Phalaris minor和奇异虉草P.paradoxa。其中小籽虉草的发生较为普遍,奇异虉草为零星发生。虉草造成的危害指数在6%~50%之间,对农作物造成的产量损失在40~110kg/667m2之间。虉草的防除以化学防除为主,人工防除为辅,但目前尚缺乏经济有效的防除农田虉草的除草剂。     

番茄潜叶蛾与马铃薯块茎蛾形态特征及为害症状的比较

番茄潜叶蛾Phthorimaea absoluta Meyrick是一种重要的世界性检疫性害虫。2017年8月入侵我国，现已扩散蔓延至我国多个省市，对露地和保护地鲜食番茄生产构成了严重威胁。在田间种植的番茄和马铃薯上，番茄潜叶蛾与同科的马铃薯块茎蛾常混合发生，且形态与取食为害特征相似，较容易混淆，给田间识别带来困难。本文详细描述和比较了番茄潜叶蛾和马铃薯块茎蛾成虫、卵、幼虫和蛹的外部形态及幼虫为害症状。本文将为番茄潜叶蛾和马铃薯块茎蛾的准确识别及田间调查提供指导，还可为这两种害虫的精准测报奠定基础。     

水稻育性调控相关基因RNAi载体的构建及其表型鉴定

利用RNAi干扰技术研究不同基因对花粉发育、卵细胞发育和合子胚发育的影响是一种重要的手段。本研究通过筛选水稻在生殖发育过程中的9个重要调控基因,构建基因的RNAi表达载体,分析转基因植株育性及相关性状表型,以期探明RNAi表达载体对靶标性状的干扰效应。其中,AT61~AT63、AT64~AT66、AT67~AT69表达载体分别靶标花粉育性、卵细胞发育以及合子胚发育的调控。结果表明,除RNAi表达载体AT64没有获得转基因植株外,其余8个RNAi表达载体均获得了转基因植株;对T0代转基因植株的花粉育性、结实率以及潮霉素筛选(40 mg/L)发芽率检测的统计结果显示,RNAi表达载体AT62(花粉发育调控)、AT65(卵细胞发育调控)和AT67(合子胚发育调控)的干扰效应较强。本研究结果将为创制新型水稻基因工程不育系提供策略和选择。     

德国鸢尾茎基腐病病原菌鉴定及生物学特性分析

为明确德国鸢尾Iris germanica茎基腐病病原菌及其生物学特性，利用组织分离法对采自云南省的感茎基腐病德国鸢尾样品进行分离和纯化，通过形态学特征和ITS、TUB2、EF-1α多基因序列分析对其进行鉴定，采用室内离体和活体接种法测定其致病性，并研究其生物学特性。结果表明，从25份发病德国鸢尾植株样本中分离得到15株菌株，依据形态学特征和显微观察，发现其中6株菌株形态特征一致，另外9株菌株形态特征一致，从中各选1株代表菌株YWMZ1、YWJB3进行接种后出现叶片萎蔫，茎基部腐烂，发病症状与田间一致。经形态学特征观察、多基因序列分析、致病性测定最终将代表菌株YWMZ1鉴定为木贼镰刀菌Fusarium equiseti，菌株YWJB3鉴定为尖孢镰刀菌F. oxysporum。2株菌株菌丝最适培养温度均为25℃；菌株YWMZ1和YWJB3最适pH分别为5和7;2株菌株在5种碳源和氮源上均可生长，其中菌株YWMZ1最适碳源为可溶性淀粉，YWJB3最适碳源为蔗糖，2株菌株均以硝酸钾为最适氮源；菌株YWMZ1和YWJB3最适光照条件分别为连续光照和12 h明暗交替。     

水稻子预44和江南香糯基因组比较鉴定稻瘟病抗性相关基因

【目的】子预44是一具有广谱持久稻瘟病抗性的云南地方粳稻品种。为了鉴定子预44中候选稻瘟病抗性相关基因，【方法】本研究利用高通量测序技术（High-throughput sequencing）对子预44和感病水稻江南香糯进行了全基因组测序。而后使用软件GATK(3.4-46)对高质量测序结果进行SNP和InDel的检测和统计，进一步筛选出子预44和江南香糯DNA水平存在SNPs/InDels多态性抗病相关基因。【结果】通过Hiseq X10 PE150平台分别获得了4 118 170 045 bp和2 995 054 509 bp子预44和江南香糯的基因组数据，比对到参考基因组（Ensembl release 31）的比对率分别为98.56％和98.30％。在抗病水稻子预44和感病水稻江南香糯之间鉴定了922个纯合突变的差异抗病相关基因。结合基因定位结果，在子预44中鉴定了一个新的抗稻瘟病候选基因。【结论】研究结果为子预44中抗稻瘟病新基因的克隆提供了参考，对子预44广谱持久抗瘟分子机制的研究奠定了基础。     

五种琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂与灰葡萄孢琥珀酸脱氢酶的结合模式及抗性机制分析

为探究琥珀酸脱氢酶抑制剂 (SDHI) 类杀菌剂与灰葡萄孢Botrytis cinerea琥珀酸脱氢酶 (SDH) (以下简称BcSDH) 的结合方式，阐明BcSDH对SDHI类杀菌剂产生抗性的结构生物学机制，通过同源建模构建了BcSDH的三维模型，通过分子对接预测了5种SDHI (异丙噻菌胺、氟吡菌酰胺、氟唑菌酰胺、吡噻菌胺和啶酰菌胺) 与野生型和突变型BcSDH的亲和力及结合模式之间的变化，分析其抗药性机制，对相关突变位点进行保守性预测，并分析突变类型。结果表明:5种SDHI与BcSDH 具有较强的亲和力，其中酸部分插入BcSDH活性腔底，胺部分在活性腔口，能够形成牢固的疏水作用、氢键、卤键、π-π堆积作用和π-阳离子等相互作用。B-P225F氨基酸残基突变 (以下简称突变) 会造成活性腔口变窄，使得SDHI酸部分不能进入活性腔；B-P225L突变会造成异丙噻菌胺、氟吡菌酰胺和吡噻菌胺与靶标蛋白的结合模式发生变化，亲和力降低；B-H272R突变后，活性腔底变窄，与SDHI的亲和力下降。另外，保守性分析结果表明，B-P225和B-H272均位于BcSDH的保守区域，B-P225F、B-H272R和B-H272L突变可能为随机突变。因此推测BcSDH的B-P225F和B-H272R突变可能是引起灰葡萄孢对5种杀菌剂产生抗性的主要原因，也可能是引起SDHI类杀菌剂之间交互抗性的主要原因之一；B-P225L突变可能降低灰葡萄孢对部分杀菌剂的敏感性，而不是引起BcSDH对SDHI类杀菌剂产生交互抗性的主要原因。在实际生产中，应采取合理有效的抗性监测治理策略来延缓灰葡萄孢对SDHI类杀菌剂抗性的产生，在SDHI分子设计时也应考虑该位点氨基酸残基突变，避免产生交互抗性。     

西双版纳自然保护区白僵菌属虫生真菌多样性

为掌握西双版纳自然保护区内白僵菌属虫生真菌资源，为害虫生防真菌资源及生防制剂开发提供依据，本研究于2016年11月-2018年1月，对云南西双版纳自然保护区白僵菌属虫生真菌资源进行了系统调查，采用形态和分子测序技术进行白僵菌种类鉴定，并用物种多度、Shannon-Wiener指数H和Pielou均匀度指数对白僵菌属虫生真菌物种多样性和生境及海拔分布特征进行了研究。结果表明，在西双版纳自然保护区设置的60个样方中共采集白僵菌属虫生真菌侵染罹病虫体207头，经过分离培养和鉴定获得白僵菌属虫生真菌5种，分别为球孢白僵菌、布氏白僵菌、多形白僵菌、B.loeiensis和猫棒白僵菌，其中球孢白僵菌为优势种，相对多度为91.3%，其次为布氏白僵菌，其相对多度为6.3%，B.loeiensis相对多度为1.44%，多形白僵菌和猫棒白僵菌相对多度相同均为0.48%。从白僵菌属虫生真菌种类的生境分布特征来看，热带石灰岩山季雨林和热带季风常绿阔叶林白僵菌的种类、数量及寄主昆虫的多样性均高于热带丛生竹林和热带季雨林保护区。从白僵菌属虫生真菌种类的海拔分布特征来看，低海拔区白僵菌物种数和菌株数均明显高于高海拔和中海拔区，且低海拔区Shannon-Wiener指数均较高于中海拔和高海拔区，而均匀度从高到低依次是低海拔、高海拔和中海拔。     

马铃薯块茎蛾幼虫致病黏质沙雷氏菌的分离鉴定及杀虫活性

从马铃薯田自然罹病马铃薯块茎蛾幼虫上，分离到1株对马铃薯块茎蛾幼虫具有较强致病作用的菌株ML-1，通过形态及16S rRNA序列测定分析，确定该菌株ML-1为黏质沙雷氏菌Serratia marcescens。采用饲喂法分别测定了该菌株ML-1菌悬液、发酵液及发酵上清液对马铃薯块茎蛾初孵3日龄幼虫的毒力。结果表明，用ML-1菌悬液、发酵液及发酵上清液饲喂后第7 d时，马铃薯块茎蛾3日龄幼虫的累积校正死亡率分别为63.16%、80.70%和49.12%，在3.0×10⁹ cfu/mL浓度下的LT₅₀分别为4.71、3.04和6.47 d，在发酵液处理后第3、5和7 d的LC₅₀分别为9.784×10¹⁰、1.855×10⁸和5.434×10⁵ cfu/mL。综上所述，黏质沙雷氏菌ML-1菌株对马铃薯块茎蛾幼虫有较强的毒力，在马铃薯块茎蛾绿色防控中具有一定的开发潜能。