季也蒙毕赤酵母ypy17产脂肪酶条件的优化

从海南洋浦近海岸分离到1株产脂肪酶的酵母菌株,经鉴定为季也蒙毕赤酵母(Pichia guillier-mondii),利用Plackett-Burman设计对发酵条件进行了筛选。结果表明,橄榄油、初始pH值和K2HPO4浓度对脂肪酶生产具有显著的影响;利用响应面法对3个因子进行了优化,获得了最佳发酵条件为橄榄油31.57 g/L,硫酸铵10.00 g/L,NaCl 30.00 g/L,K2HPO4 1.16 g/L,初始pH值7.30,28℃培养72 h,脂肪酶活力达到18.20 U/mL。     

胶孢炭疽菌G蛋白α亚基CgGα2的生物学功能

G蛋白(G protein/GTP binding protein)是能与鸟嘌呤核苷酸结合,具有水解GTP生成GDP,即具有GTP酶(GTPase)活性的蛋白。G蛋白在植物病原菌生长发育及致病过程中发挥着重要的作用,然而目前还未有关于胶孢炭疽菌G蛋白生物学功能的研究。本研究从胶孢炭疽菌中克隆了一个G蛋白α亚基中的基因CgGα2,该基因编码一个354个氨基酸的蛋白,含有一个G_alpha的功能域。利用同源重组的方法获得了该基因的敲除突变体,并且在此基础上得到了突变株的互补株,将两者与野生型相比,突变体表现为营养生长缓慢,产孢量减少,对NaCl和H2O2更加敏感,对SDS的耐受性增加,对致病力无明显影响。以上结果表明,CgGα2参与调控胶孢炭疽菌的营养生长及分生孢子产生,并可能与该病菌的渗透压响应及氧化应激反应有关。     

胶孢炭疽菌CgSho1基因的克隆与功能分析

HOG-MAPK(high osmolarity glycerol mitogen-activated protein kinase)信号途径是真菌MAPK途径中参与渗透压响应的一条重要通路,在植物病原菌生长发育及致病过程中发挥着重要的作用。Sho1(synthetic high osmolarity-sensitive protein1)是HOG-M APK信号途径上游的一个重要感受器,在不同真菌中常具有不同的功能。本研究从胶孢炭疽菌中克隆了Sho1的同源基因,命名为Cg Sho1,该基因编码一个291个氨基酸的蛋白,含有4个跨膜结构域和一个SH3功能域。利用同源重组的方法获得了该基因的敲除突变体,与野生型相比,敲除突变体表现为营养生长缓慢,菌丝稀疏且疏水性增强,产孢量下降,对氧化压力和渗透压更加敏感,致病力明显减弱。上述结果表明,Cg Sho1参与调控胶胞炭疽菌的营养生长、分生孢子产量、氧化应激反应、渗透压响应及致病性。     

响应面法优化热带假丝酵母ypy06植酸酶发酵条件的研究

从海南洋浦近海分离到1株产植酸酶的酵母菌株，经鉴定为热带假丝酵母(Candida tropicalis)，利用Plackett-Burman设计对其发酵条件进行了筛选。结果表明，豌豆粉浓度、硫酸铵浓度和初始pH对酶产量具有显著的影响；利用响应面法对3个因子进行了优化，获得了最佳发酵条件：豌豆粉1.0%，葡萄糖2.0%，硫酸铵1.7%，氯化钠1.0%，初始pH 5.2，培养72 h，植酸酶产量达到727.5 U/mL。     

蛋氨酸羟基类似物的生产工艺及其在动物营养中的应用

蛋氨酸羟基类似物(MHA)作为蛋氨酸(Met)替代物被广泛应用于饲料添加剂中.MHA因其特殊的结构性质,不仅具备Met的营养功能,而且可以发挥Met不具备的酸化剂、抗生素等功能.随着我国畜牧和饲料添加剂行业的发展,MHA合成方法的研究及应用必将得到进一步的关注,因此,本文概述了MHA的生产工艺及其在动物营养中的应用.     

南极假丝酵母脂肪酶B的修饰与改造

南极假丝酵母脂肪酶B是用途最为广泛的脂肪酶之一,可用于许多有机化合物、医药中间体等的合成。为了改善南极假丝酵母脂肪酶B的催化性能,提高其环境适应性,同时提高蛋白的表达量,降低生产成本,从而使其更适于工业化应用,许多针对酶蛋白分子的修饰及改造方法已在南极假丝酵母脂肪酶B中得到大量应用。本文从化学修饰、理性设计和非理性设计3个方面详细综述了南极假丝酵母脂肪酶B的修饰与改造的关键技术,包括定点突变、蛋白质融合、易错PCR和DNA改组等,同时也介绍了以上技术在改良南极假丝酵母脂肪酶B特性方面的诸多成功实例。     

响应面法优化解脂耶罗维亚酵母ypy01淀粉酶发酵条件研究

利用Plackett–Burman（PB）设计和响应面法对解脂耶罗维亚酵母ypy01淀粉酶生产条件进行了优化。PB设计筛选到3个显著因子，分别为可溶性淀粉浓度、蛋白胨浓度和初始pH。采用响应面法对3个显著因子进一步优化，获得了最佳培养基组成：0.84%可溶性淀粉，2.25%蛋白胨，1%酵母粉，3%NaCl，0.05% MgSO4，0.05% CaCl2，初始pH为6.8，在最优条件下，淀粉酶产量达到2012.50 U/mL。     

酶的分子定向进化及其应用

酶的分子定向进化是20世纪90年代初兴起的一种蛋白质工程的新策略,是一种在生物体外模拟自然进化过程的、具有一定目的性的快速改造蛋白质的方法。该方法引起了生物催化技术领域的又一次革命。目前分子定向进化技术已被广泛应用于工业、农业及制药业等的相关领域。本文详细综述了酶的分子定向进化的概念、过程、基本策略及其核心技术,并着重介绍了酶的分子定向进化技术在提高酶的活力、稳定性、底物特异性和对映体选择性等几方面的应用及取得的相关成果。     

中成药肾宁胶囊的制备与质量标准控制研究

目的：探讨中成药肾宁胶囊的研制和配备方法,以及如何对其质量进行有效的控制。方法：掌握制药的流程,对某些药品要进行薄层色谱鉴别。结果;制药流程科学合理,安全可靠。建立了对黄芪、丹参、熟地、山茱萸的薄层色谱鉴别方法。结论：鉴别能够生动地重现药品成分,性状稳定,方法容易操作,能够为该药品的质量控制提供相应的标准。     

胶孢炭疽菌生防放线菌gz-8的鉴定及生物活性初步评价

从山东省临沂地区土壤中分离到一株放线菌gz-8，发现其对胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides具有较强的抑制作用，皿内抑菌活性达72.5%。通过形态特征和生理生化测定，结合16S rDNA序列分析，鉴定该菌株为栗褐链霉菌Streptomyces badius。抗菌谱测定结果表明，菌株gz-8对6种植物病原真菌均具有较强的抑菌活性，抗菌谱较广。进一步对菌株gz-8的粗提物进行了生物活性评价，发现其发酵液粗提物可以明显抑制胶孢炭疽菌的菌丝生长（EC50=3.18 μg/mL）和分生孢子萌发（IC50=1.92 μg/mL），且活性明显高于菌体粗提物；同时发酵液粗提物具有良好的热稳定性及pH稳定性；1 000 mg/L的发酵液粗提物对感染胶孢炭疽病芒果果实的防效达到35.94%，与同浓度下百菌清的防效（34.11%）无显著差异。