浙江省铁皮石斛根腐病病原真菌的鉴定

为明确铁皮石斛根腐病病原真菌,于其主产地浙江省金华市武义县收集铁皮石斛根腐病病株,采用平板分离方法对病原真菌进行分离,使用镰刀菌种特异性引物并结合ITS和TEF序列分析及形态学鉴定确定该镰刀菌的分类地位。结果表明,共分离纯获得真菌117株,其中有105株镰刀菌;经分子生物学分析及形态学鉴定结果显示,分离出的镰刀菌为层出镰刀菌Fusarium prolife‐mum、茄病镰刀菌F. solani、尖孢镰刀菌F. oxysporum和厚垣镰刀菌F. chlamydosporum四个种,其中层出镰刀菌在数量上具有优势地位,占总镰刀菌数的44.8%;茄病镰刀菌、尖孢镰刀菌、厚垣镰刀菌分别占总镰刀菌数的21.0%、15.2%和19.0%。在致病性测定中发现层出镰刀菌和茄病镰刀菌并不具备致病性,尖孢镰刀菌的致病性明显弱于厚垣镰刀菌,表明厚垣镰刀菌为浙江省金华市武义县铁皮石斛根腐病的主要致病菌。     

麦冬主要病害病原菌巢式多重PCR检测方法的建立

为准确快速地诊断浙江省慈溪市麦冬常见真菌病害——炭疽病和黑斑病,基于巢式多重PCR技术,针对核糖体内转录间隔区（ITS）序列分别设计特异性引物,并优化巢式多重PCR反应条件,建立可同时快速准确检测炭疽病病原菌山麦冬炭疽菌Colletotrichum liriopes和黑斑病病原菌互隔交链孢菌Alternaria alternata的方法。结果表明,建立的巢式多重PCR检测体系特异性好,同时检测2种病原菌的灵敏度高达100 pg DNA/μL,对10个田间病样进行检测,有5个病样检测到2种病原菌,3个病样检测到其中1种病原菌,2个样品未检测到目标病原菌,验证了该体系的可行性与准确性。表明所建立的巢氏多重PCR技术可用于快速准确检测麦冬2种主要病害的病原菌。     

铁皮石斛镰刀菌根腐病病原菌的鉴定及其对链霉菌发酵液的敏感性分析

根腐病是危害浙江省铁皮石斛的重要病害之一,鉴定根腐病的病原菌是有效防治该病害的前提条件。为进一步明确前期经柯赫法则验证为病原菌的镰刀菌（编号为GF-14）分类地位,本研究通过形态学鉴定,并结合内源转录间隔区（rDNA-ITS）、翻译延伸因子（TEF-1α）和RNA聚合酶基因（RPB1和RPB2）等序列的同源性比对及系统发育分析,确认该致病菌属于变红-木贼镰刀菌复合种群Fusarium incarnatum-equiseti species complex。进一步采用菌丝生长速率法,测定了该病原菌对多种杀菌剂的敏感性,并选取对菌丝生长抑制效果最佳的杀菌剂进行田间防效的测定。结果表明：本实验室分离获得的生防菌淀粉酶产色链霉菌Streptomyces diastatochramogenes 1628发酵液对该致病菌的抑制效果最佳,发酵液稀释10倍后抑制率高达98.22%;而宁南霉素、井冈霉素则对该致病菌无显著抑制作用。菌株对峙试验发现淀粉酶产色链霉菌1628对菌株GF-14的菌丝生长抑制率为32.65%。田间防效试验表明其发酵液对铁皮石斛根腐病病株具有防治效果,为34.90%。本研究明确了铁皮石斛镰刀菌根腐病病原菌的分类地位,并筛选到能有效抑制该病原菌的微生物杀菌剂,为后续铁皮石斛根腐病的防治提供依据。