人工蛹虫草核苷类成分超声提取工艺优化及HPLC定量分析

利用正交设计优化人工蛹虫草(Cordyceps militaris)中4种主要核苷成分(尿苷、鸟苷、腺苷和虫草素)的超声提取条件,并建立高效液相色谱定量分析方法.高效液相色谱法定量分析采用的色谱条件:Amethyst C18-H柱(4.6 mm×250 mm,5μm),V(甲醇)∶V(水)=15∶85,停止时间18 min,流速0.8 mL.min-1,柱温35℃,检测波长260 nm,进样量10μL.优化超声提取条件为料液比(m/V)1∶30,提取溶剂为纯水,25℃下超声45 min.本试验采用的高效液相色谱定量分析方法简便可靠,重复性、精密度及回收率良好,可以为人工蛹虫草质量控制和综合评价提供参考.     

龙眼肉中9种核苷类成分的高效液相色谱分析

利用高效液相色谱(HPLC)法同时分离测定了龙眼肉中的9种核苷类成分(尿嘧啶、胞苷、尿苷、胸腺嘧啶、次黄嘌呤核苷、鸟苷、胸苷、腺嘌呤相对标准偏差和腺苷)。分离柱为Nucleosil C18反相柱(250 mm×4 mm),流动相为0.01 mol/L的KH2PO4和甲醇,梯度洗脱,流速1 mL/min,检测波长260 nm,柱温40℃。用外标法测定龙眼肉中9种核苷成分的含量。在供试条件下,选取9种核苷标准品的线性范围为0.05~3.20μg/mL,相关系数r=0.9999~1.0000;标准品在0~48 h内经多次测定,保留时间和峰面积的相对标准偏差分别为0.133%~1.156%和1.153%~3.023%;回收率和回收率相对标准偏差分别为98.79%~107.34%和1.411%~4.544%;仪器最低检出限分别为0.0035~0.0136μg/mL。     

拟南芥核苷磷酸化酶基因的组织表达及其T-DNA插入突变体鉴定

为探明植物核苷磷酸化酶家族基因信息及生理功能,采用PCR扩增的方法,研究了模式植物拟南芥核苷磷酸化酶家族基因在不同组织中的表达,并对其核苷磷酸化酶基因T-DNA插入突变体进行鉴定。结果表明:At4g24340和At4g28940基因在根组织中大量转录表达,其他组织均微量检测到转录表达;At4g24350在各个组织中均有少量转录表达;经T-DNA插入结合转录表达鉴定,At4g28940和At4g24350基因为敲除突变体。     

Nucleoside by‐product dietary supplementation influences blood chemistry,immune response,oxidative stress resistance and intestinal morphology of juvenile amberjack,Seriola dumerili

We explored the influence of nucleoside by‐products (NBP) on blood chemistry, immune response, oxidative stress and intestinal morphology of Seriola dumerili. Four experimental diets were formulated where diets 1–3 are semipurified and supplemented with liquid NBP at concentration of 0 (D1, negative control), 30 (D2) and 90 (D3) g/kg. Diet 4 (D4) is a fishmeal‐based positive control diet. Each diet was randomly allocated to triplicate groups of fish for 50 days. The results revealed a significant influence of NBP supplementations on total cholesterol, blood urea nitrogen and triglyceride level. Lysozyme activity (LA), total serum protein (TSP) and peroxidase activity (PA) also increased with NBP supplementation as compared to the negative control. TSP, PA and LA were numerically higher in diet groups D2 and D4, respectively. Anterior enterocyte height (hE) was higher in diet group D4, while NBP‐supplemented groups showed intermediate values with D1 group and negative control group showed significantly lowest value. Supplementation of NBP also increased anterior fold height (hF) and microvillus height and posterior hF, hE and microvillus height compared with D1. Finally, we concluded that NBP can be used as a cheaper nucleotide/nucleoside source for amberjack. Supplementation of more than 30 g/kg in diets improved blood chemistry, non‐specific immunity, oxidative stress resistance and intestinal morphology of amberjack.     

嘌呤核苷磷酸化酶温敏型表达载体的构建、表达及应用于腺苷转化的研究

通过双酶切方法将重组质粒上大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase)基因克隆到pBV220表达载体上,构建了温敏型PNPase的表达载体pBV 220-PNP,转化大肠杆菌DH5α并使之表达.SDS-PAGE电泳结果显示出明显的特异表达条带,其分子量约为26 kDa.在此基础上研究了不同诱导条件对蛋白表达量的影响.分别以肌苷和尿苷为核糖供体研究重组菌转化腺苷的条件,发现肌苷最适合作为核糖供体,在30 mmol.L-1pH 7.5的Na2HPO4-KH2PO4缓冲液中,以30 mmol.L-1肌苷和10 mmol.L-1腺嘌呤作底物,加入0.5%基因工程湿菌体60℃反应3 h,腺苷的转化率为85.57%.     

犬恶丝虫核苷二磷酸激酶(NDPK)基因的原核表达及其免疫荧光定位

对犬恶丝虫核苷二磷酸激酶(NDPK)基因的基本特征进行探究,并评估其诊断价值,旨在为犬恶丝虫病的诊断提供依据。本研究原核表达了Di-NDPK,通过生物信息学、免疫印迹和免疫荧光组化分析了该蛋白的基本特征,通过检测犬恶丝虫阳性血清评估了rDi-NDPK的诊断价值。免疫印迹显示,Di-NDPK具有良好的反应原性,免疫荧光组化显示,Di-NDPK在犬恶丝虫的侧索及肠上皮细胞和肠腔中分布。间接ELISA显示,该方法的敏感性为66.7%(16/24),特异性为38.9%(14/36),其中与犬细粒棘球蚴病阳性血清、犬钩虫病阳性血清以及犬弓首蛔虫病阳性血清发生交叉反应。Di-NDPK是一个分泌蛋白,但不适合作为犬恶丝虫病的诊断候选抗原。     

生物农药协同化学农药使用对番茄早疫病防治效果及经济效益的影响

本文以日光温室番茄为试验对象,设置不施药(CK)、80%代森锰锌可湿性粉剂2 250 g/hm²(T1)、6%嘧啶核苷类抗菌素水剂1 875 mL/hm²(T2)、6%嘧啶核苷类抗菌素水剂1 200 mL/hm²+80%代森锰锌可湿性粉剂1 350 g/hm²(T3)4个处理,研究了生物农药嘧啶核苷类抗菌素协同化学农药代森锰锌减量施用对番茄早疫病防治效果、营养指标及种植效益的影响。结果表明,与CK相比,生物农药与化学农药协同使用(处理T3)农药用量减少,对番茄早疫病防治效果显著,番茄生长旺盛,营养指标有明显改善,产量提高,值得大面积推广。     

板蓝根指标成分分布分析及药材质量评价研究

为测定多产地板蓝根药材中精氨酸、靛蓝、靛玉红、(R,S)-告依春、核苷类含量,分析含量分布情况,并进行板蓝根药材质量评价研究。采用高效液相色谱法(HPLC)测定不同产地来源的11个板蓝根样品7个指标成分含量,通过因子分析和分层聚类分析方法进行成分分布分析和质量评价研究。结果表明靛蓝、靛玉红、鸟苷、尿苷、腺苷对不同产地板蓝根评价贡献最大,这5种指标成分可作为产区间区分和评价指标,以此评价体系板蓝根按产区分为河北省产区、甘肃-山东-安徽产区和东北三省产区,其中河北省产板蓝根品质最优异。