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1.
直接ELISA检测沙门氏菌方法的建立及其应用研究   总被引:34,自引:0,他引:34  
从已获得的4株沙门氏菌属特异杂交瘤单克隆抗体中,筛选出CB8和De7两株单抗相合成酶标检测试剂,并建立了检测沙门氏菌的直接ELISA方法,它能检出沙门氏菌属99%的菌株,而不与其他肠道杆菌反应(包括大肠杆菌,阴沟杆菌,产气杆菌,志贺氏菌,枸椽酸杆菌,克雷伯氏菌,变形杆菌和沙雷氏菌)。应用本方法检测粪样,鱼粉,奶样,其敏感性和特异性分别高达100%和97.6%,仅出现2.4%的假阳性率,该法不受各要  相似文献
2.
动物组织中磺胺二甲嘧啶残留检测ELISA试剂盒的研制   总被引:25,自引:4,他引:21  
在建立竞争ELISA方法的基础上,首次研制出检测磺胺二甲嘧啶的单克隆抗体快速检测试剂盒,并对其检测限、精密度、检测范围以及鸡肌肉组织中的添加回收实验做了详细研究。本试剂盒的检测限为1.0ng/m1,检测范围为1.0-81.0ng/m1,批内变异系数<8.9%,批间变异系数<9.5%,在10、60和200ng/m1水平鸡肌肉组织中添加,回收率为64.5%-85.5%,变异系数为6.0%-18.6%。与同类相关德国产试剂盒相比较,阳性符合率为100%。  相似文献
3.
应用大肠杆菌表达的猪瘟病毒主要保护性 E2抗原决定簇蛋白和全长 E2基因构建的 DNA疫苗免疫 BAL B/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与 SP2 /0骨髓瘤细胞进行融合 ,经克隆和间接 EL ISA筛选 ,获得了 A11、B2、E3、H6、D5、D86株稳定分泌抗猪瘟病毒 E2蛋白单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞株。它们的腹水效价在 1∶ 80 0~ 1∶ 2 10 0 0 0之间。抗体类型鉴定结果表明 ,A11、E3、H6、D5和 D8为 Ig M类型 ,B2为 Ig G类型。随后用蛋白 A凝胶层析法和 PEG沉淀法分别纯化了 Ig G和 Ig M单抗。对纯化单抗进行的抗原识别表位研究结果初步表明 ,6株单抗可能识别 3种不同的E2抗原表位。  相似文献
4.
磺胺二甲嘧啶单克隆抗体的研制   总被引:20,自引:2,他引:18  
本研究将磺胺二甲嘧啶与人血清白蛋白、卵清白蛋白联接 ,分别作为免疫原、包被原 ,建立 EL ISA筛选方法 ,并利用杂交瘤技术 ,制备了分泌抗磺胺二甲嘧啶单克隆抗体的细胞株。经鉴定的单克隆抗体的蛋白亚型为 Ig G1 ;染色体数为 88~94条 ;分子量为 170 .2 KDa;亲和常数为 2 .5× 10 1 0 M- 1 ;与其他 6种磺胺药 (SDM、SDEP、SMM、SMZ、SD、SQ)无交叉反应  相似文献
5.
抗氯霉素单克隆抗体的制备及鉴定   总被引:16,自引:3,他引:13  
用人工合成的氯霉素-人血清白蛋白(CAP-HSA)作抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术建立了1株分泌抗CAP单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞1F9.经检测,其分泌的抗体亚类为IgG1,杂交瘤染色体数目84~96条,间接ELISA检测细胞培养上清效价为1256,诱生小鼠腹水的抗体效价可达16×105.该细胞连续培养生物学性状稳定,竞争间接酶联免疫吸附试验(ciELISA)显示,其与供试抗生素交叉反应小,表明该单抗具有较大的应用价值.  相似文献
6.
Eleven monoclonal antibodies (mAbs) which are specific for chicken interleukin-2 (chIL-2) were produced and characterized by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), Western blotting and neutralizing assays. These mAbs were used to develop a mAb-based antigen capture ELISA specific for chicken IL-2 detection. Anti-IL-2 mAbs bound specifically to E. coli-derived rchIL-2 in ELISA and identified a 16 kDa IL-2 polypeptide band in Western blot. Several mAbs were shown to neutralize the biological activities of both rchIL-2 and native chicken IL-2 as measured by concanavalin A (ConA)-induced lymphocyte proliferation assay, IL-2 bioassay, and natural killer cell assay. Among the neutralizing mAbs, the mAb chIL-2/11 was most potent in neutralizing IL-2 activity. To develop a sensitive ELISA for the detection of chicken IL-2, an antigen capture ELISA was developed using the mAb chIL-2/16 as the antigen capture antibody and rabbit anti-IL-2 peptide antibody as the detection antibody. Using the mAb-based antigen capture ELISA, significant correlation between the level of IL-2 detected in bioassays and in ELISA was observed. These results showed that the mAb-based antigen capture ELISA is less time-consuming and more reliable compared to a conventional IL-2 bioassay for chicken IL-2. These neutralizing mAbs will facilitate basic immunobiological studies of the role of IL-2 in normal and disease states in chickens.  相似文献
7.
J亚群禽白血病病毒的免疫荧光检测效果   总被引:14,自引:0,他引:14  
应用特异性抗J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的单克隆抗体JE9建立了免疫荧光检测ALV-J抗原和抗体的方法。结果表明,在ALV-JADOL-Hcl感染鸡胚成纤维细胞(CFF)24小时后,可以用1FA检测出阳性细胞,感染72小时后,可以检测出最小病毒感染量≥1.25TCID50/孔。对人工感染ALV-J鸡肾脏冰冻切片检测结果证明,免疫荧光法可以检测出组织中的ALV-J抗原,表现强阳性反应。用重组病毒rBac4817-env感染的Sf9细胞作抗原,可以检测出鸡血清中抗ALV-J的特异性抗体。该方法在ALV-J的控制中必将产生重要作用。  相似文献
8.
A competitive ELISA, using a specific monoclonal antibody, was designed to detect antibodies to Mycoplasma mycoides subsp. mycoides SC, the agent of contagious bovine pleuropneumonia. One monoclonal antibody was found suitable for such a test, ‘117/5', it does not cross-react with any of the other mycoplasma species tested, furthermore, its binding is inhibited by positive sera. The cutoff, 50% of inhibition, was determined using a set of negative sera from CBPP-free areas. The sensitivity was controlled with sera from artificially infected animals as well as from sera from areas where CBPP is enzootic. In both cases, cELISA compared favorably with CFT. The precocity of detection was similar but cELISA detected more positives and the positive titers seemed to persist longer than in the case of CFT. Lysis of the antigen used to coat the ELISA plates reduced the variability of fixation and improved the repeatability of the test. A field evaluation is now in progress which will determine the true sensitivity and specificity of the test and also check if antibodies are detected after vaccination.  相似文献
9.
J亚群禽白血病病毒(ALV-J)是一种主要感染肉用型鸡的反转录病毒。本研究用表达ALV-J囊膜蛋白基因产物的Sf9细胞免疫Balb/c小鼠,取其脾脏细胞与骨髓瘤细胞NS1进行融合,获得了4株特异性抗ALV-J的单克隆抗体。免疫荧光分析结果表明,3株单克隆抗体仅与所试验的ALV-J毒株反应,而不能与ALV的A、B、C、D和E亚群的毒株反应。有趣的是,有一株单克隆抗体可以与所有试验的外源性ALV毒株反应,但不与内源性的E亚群反应。Western Blot和免疫沉淀试验结果表明,单克隆抗体识别的ALV-J囊膜糖蛋白的分子量为90-94kD,识别未糖基化的囊膜蛋白分子量约为53kD。用这些单克隆抗体能检测出ALV-J病毒感染鸡胚成纤维细胞中的病毒抗原。这些结果提示这些单克隆抗体可用于ALV-J疾病的诊断和流行病学调查。  相似文献
10.
以纯化的猪脂肪细胞特异膜蛋白 (40 0 0 0 )为抗原免疫 BAL B/ c小鼠 ,制备了 2 A3、3 H7和 3 A6等 3株单克隆抗体 ,分别属于 Ig A、Ig M和 Ig G1亚类 ,其最佳稀释倍数分别为 1∶ 1 6 0 0、1∶ 3 2 0 0和 1∶ 6 4 0 0。经 Western blotting鉴定 ,3株单抗均能与 4 0 0 0 0的抗原结合 ,且具有较强的抗原亲和力 ,亲和常数分别为 4 .86× 1 0 8、1 .86× 1 0 9和 2 .4 6× 1 0 9;对皮下脂肪细胞具有很强的特异性 ,经 Western blotting鉴定仅与猪和人脂肪细胞的 4 0 0 0 0膜蛋白发生特异反应 ,而与牛、羊、兔、鸡、鼠等动物的脂肪细胞膜蛋白均无交叉反应 ;能与滇玉、滇昆、滇陆、长撒、长白、DL Y、约长撒和撒坝等品种猪皮下脂肪细胞的 4 0 0 0 0膜蛋白发生特异反应 ,而与皮下脂肪细胞的其他膜蛋白无交叉反应 ;仅与长撒猪皮下脂肪和腹部脂肪细胞的 4 0 0 0 0膜蛋白发生特异反应 ,与心、肝、脾、肺、肾、肌肉、肠系膜脂肪和肾周脂肪细胞膜蛋白均无交叉反应  相似文献
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