布鲁菌17KD膜蛋白的原核表达与初步鉴定

以马耳他布鲁菌基因组为模板,设计引物,扩增17KD膜蛋白基因全长,获得422bp长的片段。将该片段直接克隆于原核表达载体PGEX-4T-2,成功构建阳性重组表达载体。IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot检测,在大肠杆菌中成功表达大小为43KD的蛋白,并且该蛋白与布鲁菌病临床阳性动物血清产生特异性结合反应。通过17KD蛋白的成功表达,试图评价该蛋白在布鲁菌病诊断用抗原及基因工程疫苗研制过程中应用的可行性。     

布鲁氏菌鉴定和检测方法研究进展

布鲁氏菌是重要的人畜共患病病原菌，其鉴定和检测方法受到国内外的普遍重视。本文对近年来布鲁菌DNA同源性及其内切酶图谱分析、血清学检测、PCR扩增、核酸探针杂交等鉴定、检测方法进行了综述，并展望了分子生物学技术在布鲁氏菌快速、准确鉴定、检测中的良好前景。     

Economic and health burden of brucellosis in Kazakhstan

Brucellosis is a widespread zoonotic disease considered as an emerging and re‐emerging disease with a resulting threat of public health and animal health. Official reports document an animal incidence in Kazakhstan of about 0.6% per year, and the country still registers high number of human cases annually . The main objective of this paper was to evaluate the distribution and economic impact of brucellosis in Kazakhstan. We analysed human disease incidence data obtained from the Government Sanitary & Epidemiological Service with the aim to estimate the burden of disease in terms of disability‐adjusted life years (DALYs). We also estimated the economic impact in terms of monetary losses. Additionally, we mapped the geographical distribution of the disease throughout Kazakhstan. In total, 1,334 human cases of brucellosis were registered in 2015 in Kazakhstan that resulted in 713 DALYs. Around $21 million was spent on compensation for animals that had to be slaughtered due to brucellosis, and an additional $24 million was spent on testing animals. Animal brucellosis and human brucellosis occur throughout the whole country, some trends of which are reviewed in this paper. We estimated the burden of the disease and explored possible explanation for high human incidence rates. This paper is the first to estimate the human burden of disease and the economic costs in Kazakhstan. Both of these are substantial.     

以改进的布氏菌全血平板凝集抗原检测自然感染布病阳性绵羊的凝集素滴度

报道了以改进的布氏菌全血平板凝集抗原与标准布氏菌试管凝集试验和玻板凝集试验对照,对10只自然感染布病阳性绵羊在集中舍饲的条件下,经17个月凝集素滴度的检测,证明全血抗原的特异性、敏感性及阳性检出率均优于对照方法。     

猪种布氏杆菌WboA基因缺失株对绵羊的免疫剂量及免疫程序研究

为优化猪种布氏杆菌WboA基因缺失株(B.suisΔWboA)对绵羊的免疫条件,本研究采用1岁左右的成年雌性绵羊对B.suisΔWboA的免疫剂量及免程序进行了比较研究。实验分5个组进行,其中A、B、C 3个试验组分别以2倍剂量重复接种、4倍剂量重复接种和单剂量1次接种B.suisΔWboA,D组单剂量1次接种猪种布氏杆菌S2疫苗株(B.suis S2),E组为空白对照组。各组羊首免后7 d、21 d和35 d分别采血,测定血清抗体水平;在首免后35 d,分别采用布氏杆菌强毒菌M28株(B.melitensis M28),经腹股沟皮下注射攻毒。攻毒后28 d,分别取试验羊的脾脏分离攻毒菌株。所有试验羊,在实施攻毒前,其精神、食欲均正常。血清抗体测定结果表明,在二免7 d、21 d后,A组和B组试验羊的抗体水平明显高于C组,而且均超过D组试验羊的抗体水平。攻毒后的细菌分离结果表明,攻毒后28 d,A组和B组试验羊的脾脏细菌分离数量明显低于C组试验羊,并且均低于D组试验羊的细菌分离水平。实验结果表明,B.suisΔWboA的免疫剂量由单倍改为2倍或4倍,免疫程序由单剂量1次改为2倍或4倍剂量2次,可以明显提高免疫效果,并达到与亲本疫苗菌株B.suis S2的免疫水平。     

鹿布氏杆菌病流行病学调查

为确定我国鹿群的布氏杆菌病的流行情况 ,应用间接酶联免疫吸附试验 (ELISA)对采自国内某地区鹿场的 30 0份血清进行检测 ,结果表明 ,鹿群的布氏杆菌血清抗体阳性率为 14 0 % ,证明鹿群中仍然存在着布氏杆菌病     

一株犬种布鲁氏菌的分离与鉴定

对从一只流产贵宾犬全血中分离到的一株布鲁氏菌进行了形态结构、培养特性、生化特性研究以及凝集试验鉴定和多种属聚合酶链式反应(AMOS-PCR)鉴定.结果表明,分离菌为革兰氏阴性菌,在胰际琼脂培养基生长并呈典型的粗糙型布鲁氏菌菌落,菌落能被结晶紫溶液染成紫色.分离菌在琉瑾和复红培养基上生长,不产生H2S,与粗糙型布鲁氏菌阳性血清凝集,与光滑型布鲁氏菌阳性血清无凝集.用AMOS-PCR方法对分离菌进行鉴定,该分离菌具有犬种布鲁氏菌特有条带.鉴定结果表明分离菌符合犬种布鲁氏菌特性,将其命名为B.canis GB1.     

抗牛布鲁氏菌独特型抗体在牛体中的免疫应答

首次将新疆分离的布鲁氏菌牛Ⅲ型强毒菌株研制成单克隆抗体.选用ELISA效价高的单克隆抗体A₇免疫家兔,经提纯制成抗独特型抗体疫苗,对杂种牛和土种黄牛进行免疫试验.通过平板凝集、试验凝集和Coomb''s试验证明,凝集抗体消失很快,不完全抗体则可维持1年以上,这表明抗细菌性抗体在体内存在时间较长,为独立型疫苗的应用提供了很好的依据.     

细胞壁抗原用于布氏杆菌病诊断试验的研究

用培养的布氏杆菌菌体，通过超声波裂解、反复离心制备出布氏杆菌细胞壁抗原。将细胞壁抗原作1：128稀释，用作牛种布氏杆菌酶联免疫吸附试验（ELISA)的抗原；将布氏杆菌细胞壁抗原作1：32稀释，用作平板凝集试验抗原；把细胞壁抗原作1：16稀释用作试管凝集试验抗原，分别建立了牛布氏杆菌ELISA试验、平板凝集试验和试管凝集试验。用这3种方法，检测已知200份平板凝集试验阴性血清，5份平板凝集试验阳性血清。结果5份阳性血清在平板凝集试验、试管凝集试验和ELISA试验中均为阳性；200份阴性血清在平板凝集试验和试管凝集试验中均为阴性，在ELISA试验中有1份为阳性?试验证明，细胞壁抗原，既能用于传统的平板凝集试验和试管凝集试验，又能用于ELISA试验。     

三种布鲁氏菌病疫苗株的毒力比较

为系统比较我国现有布鲁氏菌病疫苗株A19、M5和S2的毒力,分别用上述3种疫苗株以1×105CFU/只免疫Balb/c小鼠,免疫后每隔2周采集小鼠脾脏,分离细菌,测定各疫苗株在小鼠脾脏中的存留时间。结果 A19、M5、S2在小鼠体内存活时间依次为14周、大于16周、6周。将以上3种疫苗株分别以1×109CFU/只免疫Hartley豚鼠,15日后测定豚鼠脾脏含菌量,结果 A19、M5、S2免疫后每克脾脏含菌量分别为2.8×104CFU、大于6.7×105CFU、3.8×103CFU。研究结果表明,我国目前使用的布鲁氏菌疫苗中,S2毒力最弱,A19其次,M5最强。