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1.
旨在过表达Bud C进而上调2,3-丁二醇(2,3-Butanediol,2,3-BD)的合成,通过基因工程手段构建整合载体p R1SW-Bud C,经PCR和酶切双重验证后将其电转化至产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)HD79。结果经卡那霉素筛选,获得一株菌株K.oxytoca HD79-01。以原始菌株为对照,摇瓶发酵检测2,3-BD含量和相关酶活,q RT-PCR检测Bud C表达差异,最终Bud C在HD79-01中转录水平的表达量为HD79的45.25倍(P0.01)。摇瓶发酵显示2,3-BD的最高产量、转化率和生产强度分别提高了24.54%、10.97%、45.08%[分别为30.818±0.003 g/L、0.253±0.013 g/g、0.43±0.01 g/(L·h)],酶活提高了3.61倍(0.563±0.003 U/mg)。因此,2,3-丁二醇脱氢酶基因(Bud C)过表达菌株构建不仅成功的提高了2,3-BD的产量也为实现2,3-BD的工业化生产奠定基础。  相似文献   
2.
3.
有机磷农药是目前环境中残留量最多的农药之一,对其残留量的检测及降解机制的研究对于环境污染及生态修复具有重要意义。微生物传感器由生物学元件与换能器构成,因具有成本低廉、易于微型化及选择性高等特点而被广泛应用于各种生化物质的分析和检测。本文从长期受农药污染的土壤中分离出4株能以甲基对硫磷为碳源生长的菌株,根据形态特征和16S r RNA基因序列同源性分析,对4株降解菌进行鉴定,利用高效液相色谱测定降解率,选取降解率最高的1株菌进行降解机制研究,以期将其应用于测定环境中甲基对硫磷残留的电位型微生物传感器的构建。结果表明,在甲基对硫磷初始浓度50 mg·L-1、30℃、p H 7.0的培养条件下培养7 d,4株菌对甲基对硫磷的降解率均在78%以上,其中1株菌的降解效率可达100%。16S r RNA基因序列测定表明,该菌株属于克雷伯氏菌属,命名为Klebsiella sp.MP-6。利用液相色谱-质谱联用对其降解产物的研究表明,菌株MP-6水解甲基对硫磷主要产生二甲基硫代磷酸(dimethyl thiophosphoric acid,DMTP)和对硝基苯酚(p-nitrophenol,PNP),极少部分PNP通过产生4-硝基邻苯二酚(4-nitrocatechol,4-NC)和1,2,4-苯三酚(1,2,4-BT)进一步代谢。结果表明,基于测定中间产物对硝基苯酚(p-nitrophenol,PNP)的电位响应信号,该菌株适用于构建测定海水及土壤等环境中有机磷农药的微生物传感器。  相似文献   
4.
This study was designed to investigate the antimicrobial activity of two synthetic antimicrobial peptides from an aquatic organism, tilapia piscidin 3 (TP3) and tilapia piscidin 4 (TP4), in vitro and in a murine sepsis model, as compared with ampicillin, tigecycline, and imipenem. Mice were infected with (NDM-1)-producing K. pneumonia and multi-drug resistant Acinetobacter baumannii, and subsequently treated with TP3, TP4, or antibiotics for different periods of time (up to 168 h). Mouse survival and bacterial colony forming units (CFU) in various organs were measured after each treatment. Toxicity was determined based on observation of behavior and measurement of biochemical parameters. TP3 and TP4 exhibited strong activity against K. pneumonia and A. baumannii in vitro. Administration of TP3 (150 μg/mouse) or TP4 (50 μg/mouse) 30 min after infection with K. pneumonia or A. baumannii significantly increased survival in mice. TP4 was more effective than tigecycline at reducing CFU counts in several organs. TP3 and TP4 were shown to be non-toxic, and did not affect mouse behavior. TP3 and TP4 are able at potentiate anti-Acinetobacter baumannii or anti-Klebsiella pneumonia drug activity, reduce bacterial load, and prevent drug resistance, indicating their potential for use in combating multidrug-resistant bacteria.  相似文献   
5.
肺炎克雷伯氏菌强毒株的分离鉴定及16-23SrRNAITS序列分析   总被引:1,自引:1,他引:0  
为确诊疑似仔猪肺炎克雷伯氏菌(K.pneumonia)感染,并研究其病原的致病性、耐药性、16-23SrRNA ITS系统进化特征,本研究从云南因肺炎、腹泻而大量死亡的仔猪中分离到1株革兰氏阴性短粗杆菌,命名为KP14013,对其进行生化鉴定、16SrRNA鉴定,研究其对小白鼠和仔猪的致病性,并对其16-23SrRNA ITS基因进行测序和遗传进化分析。结果显示,KP14013分离株生化特征与肺炎克雷伯氏菌相符,其16SrRNA与GenBank中23株肺炎克雷伯氏菌代表株之间的同源性均为99%,将KP14013鉴定为肺炎克雷伯氏菌。KP14013对小白鼠半数致死量(LD50)为3×101.8 CFU,腹腔注射3×108 CFU可使仔猪100%致死。16-23SrRNA ITS系统进化关系结果表明,KP14013与GenBank中收录的15株肺炎克雷伯氏菌形成进化树的一个分支,属于同一个亚群,它们之间的核苷酸同源性为98.4%~99.2%。本研究证实了肺炎克雷伯氏菌是该起仔猪腹泻大量死亡的病原;KP14013分离株为毒力极强菌株,具有多重耐药性,其16-23SrRNA ITS与GenBank中收录的肺炎克雷伯氏菌代表株之间核苷酸存在差异,可用于肺炎克雷伯氏菌菌株间的鉴别。  相似文献   
6.
苄嘧磺隆是一种磺酰脲类除草剂,被广泛应用于稻田土壤中防除一年生和多年生阔叶杂草。在土壤中的持效期较长,大量施用后易对后茬敏感作物产生药害,微生物降解是土壤中苄嘧磺隆转化的主要方式。本研究从长期施用该除草剂的稻田土壤中分离筛选到1株苄嘧磺隆降解菌株75B,经形态学及生理生化特征、16S rRNA基因扩增测序构建系统发育树分析,鉴定为Klebsiella pneumoniae(肺炎克雷伯氏菌)。75B菌株对环境的适应能力较强,在p H 5.0!9.0、0.5!5.0%Na Cl浓度下、培养温度为26!38℃的范围内生长良好。将该菌株按5%接种量置于p H 7.0、以苄嘧磺隆为唯一碳源的无机盐培养基(2.0%Na Cl浓度)中、34℃条件下培养,对50 mg/L苄嘧磺隆的5 d降解率为74.11%,培养至10 d时的降解率为97.65%。结果表明75B菌株可以有效地降解苄嘧磺隆,具有应用于该除草剂污染环境修复的潜力。  相似文献   
7.
为了阐明引起石河子地区某规模化奶牛场犊牛呼吸道症状的主要细菌性病原体及其生物学特性,本研究采集2~6月龄犊牛鼻拭子与肛拭子各39份,通过细菌分离培养、形态学观察、生化分析、PCR扩增16S rRNA基因和溶血酵素(khe)基因、药敏试验和小鼠致病性试验等方法对分离菌株的生物学特性进行分析。结果显示,分离菌株中有3株在MIAC平板上形成紫红色带有沉淀环的菌落(鼻拭子1株,肛拭子2株),且镜检为革兰氏阴性短杆菌,疑为肺炎克雷伯菌。全自动微生物分析系统显示,分离株与肺炎克雷伯菌相似性均为96%;PCR扩增16S rRNA基因测序结果显示,分离株与GenBank数据库中肺炎克雷伯菌核苷酸相似性在96.5%~99.8%之间,肺炎克雷伯菌特异性基因khe阳性且相似性达99%以上;药敏结果显示,分离菌株对青霉素类、头孢菌素类、一代和二代氨基糖苷类、四环素类、一代大环内酯类、磺胺类、多烯类、林可酰胺类抗菌药呈现出不同程度的耐药;对三代氨基糖苷类、二代大环内酯类、氯霉素类、多肽类、喹诺酮类抗菌药敏感,且呈现不同程度的多重耐药性;致病性试验结果表明,分离菌株均可不同程度导致小鼠死亡且以鼻拭子分离株致病性较强。本研究成功分离鉴定石河子地区规模化奶牛场引起犊牛呼吸道症状的肺炎克雷伯菌3株,并阐明分离菌的部分生物学特性,为新疆地区牛源肺炎克雷伯菌病的检测、诊断及临床治疗提供技术支撑。  相似文献   
8.
为了研究氟磺胺草醚污染土壤的生物修复机理,利用富集培养技术从长期施用氟磺胺草醚的土壤中分离得到1株能够以氟磺胺草醚为唯一碳源生长的细菌,命名为F-12。通过菌落形态、生理生化特性和16S rDNA基因序列分析,初步鉴定菌株F-12为克雷伯氏菌属(Klebsiella sp.)。并分析了氟磺胺草醚的初始浓度、接种量、温度和pH对菌株F-12降解氟磺胺草醚效果的影响,确定了最佳降解条件。结果显示,该菌在氟磺胺草醚浓度为100 mg/L、接种量为15%、pH 6.0、温度35℃条件下,培养2天后对氟磺胺草醚的降解效率达到80%以上。具有应用到氟磺胺草醚污染土壤生物修复的能力。  相似文献   
9.
Colonization behaviour of two enterobacterial strains on cereals   总被引:4,自引:0,他引:4  
 Two diazotrophic enterobacterial strains, Pantoea agglomerans D5/23 and Klebsiella pneumoniae CC12/12, were observed in sterile and non-sterile hydroponic and soil experiments in order to determine, by means of an immunological detection method (double antibody sandwich enzyme linked immunosorbent assay), their colonization sites, their migration within individuals of different plant species, and their ability to compete with indigenous organisms. To investigate the interaction between bacteria and plants, root and shoot samples were analysed using electron microscopy. Field experiments were performed to determine the growth-promoting abilities of the bacterial strains. In field experiments, inoculation with P. agglomerans led to an increase in the grain yield of different wheat (Triticum aestivum) cultivars. The same strain was also able to colonize the rhizosphere and the phyllosphere of different cereals due to its ability to migrate within the plant. Roots and media were colonized 10–100 times more intensively than shoots, with about 106 cells g–1 root and 104 cells g–1 shoot. We found that P. agglomerans colonized the root and plant-growth medium of wheat to a greater extent than those of rye (Secale cereale) and barley (Hordeum vulgare), whereas the colonization of shoots was higher in rye and barley compared to wheat. Furthermore, while cell numbers of K. pneumoniae in media and roots were 10 times higher than cell numbers of P. agglomerans, only the latter markedly increased root growth. We were able to detect significant differences in colonization numbers between treatments even if the data were not normally or log-normally distributed or the variances were not homogenous. Received: 14 June 1999  相似文献   
10.
彩色獭兔肺炎克雷伯氏菌病诊治报告   总被引:2,自引:0,他引:2  
对以食欲不振、呼吸困难、打喷嚏为主要临床症状的青年獭兔进行剖检,肺部分实变,颜色变深,切面有白色脓汁样液体流出。采集病料进行病原菌培养、生化试验和动物接种试验表明,该菌为克雷伯氏菌。药敏试验结果表明,庆大霉素、左氧沙星、阿米卡星、环丙沙星和诺氟沙星都可以用作预防和治疗该病的药物。该诊治报告表明,克雷伯氏菌也是引起家兔呼吸道疾病的病原菌之一,应引起养兔生产者的重视。  相似文献   
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