不同培养条件对苏棉12号茎尖组织培养的影响

将苏棉12号无菌种子放于不同的培养基上培养5～7 d成苗,然后制备茎尖分别放在不同的激素和不同添加物的培养基上培养,探索出适合茎尖生长成苗的一套比较完整的体系.结果表明:0.1 mg/LIBA对植株再生的效果最佳;在使用的糖源中,葡萄糖明显好于蔗糖;80 mg/L卡那霉素的筛选效果最好.     

转基因棉花纯合系的获得和遗传分析研究

 研究表明，携带有外源卡那霉素抗性（Npt-Ⅱ）基因的棉花子代幼苗在含卡那霉素（1000mg/L）的培养基上能够较为正常地生长，在外观上与对照有着明显的差异。据此建立了一种鉴定转基因棉花后代种子纯度的简易方法。利用该方法对转基因植株后代卡那霉素抗性和棉铃虫抗性之间的关系进行了研究。同时，还对转基因棉花纯合系的获得和外源基因的遗传稳定性进行了探讨。     

利用卡那霉素筛选烟草转基因植株的技术研究

待供试材料转基因和非转基因云烟87烟株长至5~7片叶时,在第3片叶上连续5 d喷施400 mg/L的卡那霉素溶液,喷后2 d观察,结果非转基因云烟87烟株叶片全部产生黄色斑点,而带有卡那霉素抗性标记基因的转基因云烟87烟草叶片表现正常。利用此方法对转基因烟草T2代3个株系进行筛选,筛选出22株转基因烟草植株,并用PCR方法对此方法的准确性进行了验证,结果表明,此方法对转基因烟草是一种简单快速的筛选方法。     

油菜遗传转化体系中卡那霉素浓度的筛选及抑菌剂的选择

利用根癌农杆菌(Agribacteriumtumefaciens)介导的下胚轴转化方法,将一抗病基因转化甘蓝型油菜.在遗传转化体系的建立过程中进行了卡那霉素(Km)浓度的筛选及抑菌剂的选择,以确定合适的选择压力及适宜的杀菌剂.试验结果表明:选择培养基中附加25 mg/L Km较适宜;抗性苗筛选过程中羧苄青霉素(Cb)对芽苗分化影响较小,且在500 mg/L时能够很好的抑制农杆菌的过度生长.生根培养基中添加头孢霉素(Cef)和Cb对根分化的影响没有明显差异.     

地高辛标记质粒探针监测卡那霉素耐药性的研究

 用 Eco R 单酶切卡那霉素抗性质粒 ,经 DNA纯化回收 4.34 1kb的目的基因片段。以随机引物法 ,用地高辛进行标记 ,制备成探针 ,成功建立了斑点杂交法和菌落原位杂交法用于检测猪源大肠杆菌对卡那霉素的耐药性 ,结果表明与药敏试验阳性的符合率为 10 0 % ,说明建立的探针技术可以用于猪源大肠杆菌对卡那霉素的耐药性监测。     

番茄基因转化中抗生素筛选压力的确定方法

在以抗生素为筛选标记的基因转化中。确定适宜的筛选压力是提高基因转化率的前提。本研究以卡那霉素为例，通过在10mg／L，20mg／L，30mg／L，50mg／L，100mg／L的筛选压力下，转化和非转化番茄子叶外植体的生长表现、愈伤组织和芽的分化率．来确定适宜的筛选浓度。本实验以该方法找到的适宜的卡那霉素筛选浓度为50mg／L。以此浓度为筛选压力进行遗传转化所获得的部分再生苗经southern blot鉴定．均为转化株。     

转基因抗2，4-D棉花室内快速鉴定方法初探

 通过在培养基中添加卡那霉素和2,4-D,研究其对抗2,4-D转基因（tfdA）棉花品系508和常规棉花品系中9409种子萌发和生长发育的影响,初步建立了一种不受时间限制的简便快速的室内鉴别转基因材料的方法。结果表明,卡那霉素最明显的特点是使非转基因材料子叶失绿,而转基因材料则呈正常绿色;2,4-D显著抑制非转基因材料的种子萌发和幼苗发育,但对转tfdA材料的影响则不大,其用量在2mg/L的情况下就能将转基因材料和非转基因材料区分开来。用该方法鉴别转tfdA基因杂交一代材料,其结果与大田鉴定相一致。     

卡那霉素和潮霉素对芦竹不定芽诱导与生长的影响

[目的]研究组培条件下芦竹（Arundo donax Linn.）对植物基因工程常用抗生素卡那霉素和潮霉素的敏感性,为芦竹基因工程载体构建及转基因植株筛选奠定基础。[方法]芦竹外植体预培养3 d后接种于添加不同浓度卡那霉素或潮霉素的不定芽诱导培养基中培养,研究2种抗生素对芦竹外植体不定芽诱导及生长的影响。[结果]2种抗生素在一定浓度下对芦竹外植体不定芽诱导和生长都有影响。潮霉素浓度在5～50 mg/L时,随着浓度增大,对芦竹不定芽诱导及生长的抑制作用均增强;浓度达到50～100 mg/L时,外植体生长、分化逐渐停止直至死亡。卡那霉素浓度在5～100 mg/L时,对不定芽诱导产生促进作用。[结论]潮霉素在较低浓度下对芦竹外植体不定芽诱导和生长产生抑制作用,适合作为芦竹转基因选择标记。     

苎麻遗传转化再生体系的建立

苎麻(BoehmerianiveaL.Guad)是荨麻科苎麻属宿根型草本植物,主要分布在热带和亚热带地区,为我国特产,是重要的纺织纤维和饲料作物。由于苎麻为杂合体,其遗传背景十分复杂,有性杂交等常规方法难以取得育种上的突破,因此,探讨利用基因工程技术改良苎麻品种具有重要意义。本研究以苎麻品种圆叶青叶盘为外植体,选用MS培养基为基本培养基,附加激素BA、IAA、GA3和NAA,通过研究不同激素浓度组合对外植体愈伤诱导及不定芽分化的影响以及不同激素配比对生根的作用,建立了较好的遗传转化再生体系。试验结果表明圆叶青叶盘最适诱导愈伤培养基为MS 6-BA2.0mg/L GA30.4mg/L IAA0.2mg/L 蔗糖30g/L 琼脂7.5g/L;分化培养基为MS 6-BA2.0mg/L GA30.4mg/L 蔗糖30g/L 琼脂7.5g/L;小苗的最佳生根培养基为MS NAA0.2mg/L IAA0.1mg/L 蔗糖30g/L 琼脂7.5g/L。在抗生素浓度梯度筛选实验中获得50mg/L卡那霉素可以抑制叶盘的分化;40mg/L卡那霉素可以抑制再生植株的生根。筛选出的遗传转化再生体系,为进一步利用基因工程技术对苎麻进行遗传改良打下基础。     

卡那霉素对白三叶种子发芽及无菌苗生长的影响

通过室内发芽试验研究了卡那霉素(Kan)对白三叶Trifolium repens种子萌发及幼苗生长的影响,结果表明,Kan对白三叶种子发芽势和发芽率没有影响,但对根系和地上部分的生长作用显著.表现为须根受到抑制、主根变短增粗、株高降低、叶片数减少及单株平均生长量减少,出现白化现象,且随着Kan浓度增加,抑制作用增强.由此设定Kan对白三叶无菌苗根系生长的有效浓度为10～20 mg/L;对地上部分生长的有效作用浓度为30 mg/L;对白化苗的有效浓度为40 mg/L.