黄艾美球虫侵犯宿主组织的超微研究

利用透射电镜和扫描电镜相结合的技术对黄艾美球虫（E.flavescens）人工感染后的子孢子移动过程及被虫体寄生的宿主细胞形态学变化和粘膜形态学变化进行了观察。子孢子在进入小肠腺上皮过程中需白细胞介导，在白细胞内可发育成球形的滋养体，观察到有两个子孢子侵入同一白细胞的现象，但分别存在于各自的带虫空泡中，黄艾美球虫引起的肠粘膜损伤主要发生于感染177小时之后，其损伤主要表现在绒毛大片脱落，结缔组织裸露，表面可见到大量破损的孔洞及大量肠杆菌，被虫体寄生的腺上皮细胞基部膨胀，微绒毛脱落，细胞核膨大并部分包被虫体，有些细胞核裂解为二。     

Comparative analysis of evaluation parameters in E. acervulina,E. maxima and E. tenella-infected broilers

Three parameters, body weight gain (BWG), intestinal lesion score (LS) and fecal oocyst shedding, were compared in broilers infected with major parasitic species; Eimeria acervulina, E. maxima, and E. tenella. First, two- and three-week-old chickens with Eimeria infection showed LS of approximately 3, but two-week-old chickens were more correlated with BWG. Second, significant differences in BWG were observed between male and female broilers challenged with Eimeria. Finally, E. maxima-infected broilers among three Eimeria species showed a higher relationship between BWG and LS, suggesting three considerations such as genders, age and Eimeria species for Eimeria experiments.     

巨型艾美耳球虫偏菱形样蛋白EmRP免疫原性分析

在前期研究中,从巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)cDNA文库中筛选到了免疫保护性抗原偏菱形样蛋白EmRP,本研究为揭示该抗原的免疫保护机理,进一步检测了其免疫原性。以E.maxima卵囊cDNA为模板,用RT-PCR技术扩增EmRP,并构建真核表达质粒pVAX1-EmRP,将其经腿部肌肉注射2周龄的雏鸡,3周龄加强免疫。分别于首次免疫后和加强免疫后1周,采集血清,用ELISA方法检测血清特异性IgG水平,用荧光定量PCR方法(qPCR)检测细胞因子水平,用流式细胞术检测CD4^+T淋巴细胞和CD8^+T淋巴细胞的比例,分析EmRP诱导的免疫反应。序列分析表明,EmRP含有偏菱形样蛋白超家族成员保守区域,为非跨膜蛋白,分子量约为28.4 kD。真核表达质粒pVAX1-EmRP免疫鸡后,与对照组相比,鸡体IFN-γ、IL-2、IL-10和IL-17等细胞因子转录水平显著提升;CD8^+和CD4^+ T细胞比例显著提高,而血清特异性IgG水平与对照组差异不显著。结果表明,EmRP诱导的免疫保护作用主要是由其诱导的细胞免疫反应实现的,可以作为研制E.maxima新型疫苗的候选抗原。     

假蒟提取物对感染柔嫩艾美耳球虫鸡血液指标的影响

本试验旨在研究假蒟提取物对感染柔嫩艾美耳球虫鸡血液指标的影响。270只1日龄海南文昌公鸡,随机分为6个组,每组3个重复,每重复15只,T1、T2和T3组为对照组(依次分为不感染不给药组、感染不给药组、感染给药组);T4、T5和T6组为假蒟添加组,分别在基础日粮中添加200、400、600mg/kg假蒟提取物粉剂。15日龄时,每组随机抽取30只鸡,除T1组灌服生理盐水外,其他各组鸡均经口接种柔嫩艾美耳球虫卵囊悬液,分别于接种前1d,接种后3、6、9d清晨采血测定其血液指标。结果表明,与感染球虫不给药的T2组相比,假蒟组(T4、T5、T6)可以显著降低感染球虫鸡粪便中球虫卵囊值(P0.05)。假蒟组在感染球虫后第6天,与T1组比,RBC、HGB、HCT、Ca2+、Na+、Cl-、TP、ALB、GLB、TG、CHOL、T4等指标呈下降趋势;但在感染球虫后第9天,TP、GLB含量均显著高于T1组(P0.05);在感染球虫后第6天,假蒟组与对照组相比,ALT、AST浓度水平均显著降低(P0.05)。结果提示,假蒟提取物能提高感染球虫后鸡机体免疫机能,降低肝脏损伤,降低鸡感染球虫后粪便卵囊值,具有一定的抗球虫效果。     

鸡柔嫩艾美耳球虫单卵囊分离技术的构建及致病性研究

构建了一种新的鸡柔嫩艾美耳球虫单卵囊分离技术 ,并对杨陵柔嫩艾美耳球虫地理株进行了分离 ,对继代增殖的纯种卵囊进行了致病性试验。结果表明 ,该单卵囊分离技术简单易行 ,单卵囊感染成功率可达4 0 % ;该虫株对雏鸡有很强的致病性 ,经口接种 1× 10 5个孢子化卵囊 ,致死率高达 80 %。     

兔斯氏艾美耳球虫病的病理学诊断

[目的]对某养殖场送检患病幼兔进行病理学诊断。[方法]剖检后对患病幼兔的肝脏及粪便进行涂片检查,并利用常规石蜡切片对其进行病理变化观察。[结果]剖检可见幼兔肝脏肿大,表面和切面可见黄白色小结节,结节内充满黄绿色脓性分泌物或干酪样物质。肝脏涂片检查可见艾美耳球虫虫卵及大、小配子体,粪便检查未见球虫卵囊。组织病理学观察结果表明,肝脏组织结构破坏,胆管上皮增生,在增生的胆管上皮内可观察到不同发育阶段的斯氏艾美耳球虫卵囊、大配子体和小配子体。[结论]送检幼兔被诊断为斯氏艾美耳球虫病。     

Life cycle of Eimeria procera in experimentally infected grey partridges (Perdix perdix)

We examined exogenous and endogenous development of Eimeria procera in experimentally infected grey partridges (Perdix perdix). Our examination included data on morphology, localization, duration of schizogony and gametogony and morphology of sporulated oocysts. The endogenous stages of E. procera developed in large numbers within the epithelial cells of caecal crypts. The asexual development comprised three generations of schizonts. The first fully developed macrogametes and microgamonts were observed on Day 5 post-infection (p.i.) in histologic section. The patent period began on Day 6 p.i. and ended on Day 11 p.i. with peak production of oocysts on Days 7 and 8. Long oval oocysts of E. procera measured 25.78–28.13 μm in length and 14.06–15.24 μm in width, sporulation time ranged from 18 to 24 h at 25°C and from 36 to 48 h at 20°C.     

细胞钙超载与鸡柔嫩艾美耳球虫病损伤关系

为探讨鸡柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）宿主细胞损伤与钙超载的关系，采用组织定量检测、Von Kossa钙染色、焦锑酸钾电镜细胞化学技术对使用和未使用钙离子阻断剂的E．tenella感染鸡盲肠组织的细胞沉积钙、ATP酶、磷脂酶A2（PLA2）、游离脂肪酸和盲肠上皮细胞游离Ca^2＋的含量与分布进行了动态测定和分析。结果表明：（1）鸡患柔嫩艾美耳球虫病过程中，宿主细胞内钙和游离Ca^2＋明显增多（P〈0．01），并随盲肠损伤加重而增加；（2）在发病过程中盲肠组织Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶、总ATP酶活性均有不同程度的下降，在感染严重期显著低于不感染对照组（P〈0．01）；（3）钙超载盲肠组织的PLA2活性和游离脂肪酸含量明显升高（P〈0．01），表明钙超载是鸡柔嫩艾美耳球虫病的一个重要损伤机制；（4）硝苯地平可以阻止Ca^2＋内流，减少宿主细胞内游离Ca^2＋，减轻宿主细胞的损伤，在本病发生的早期盲肠损伤较轻时，对鸡有一定的保护力，但随着疾病的发展，其作用下降。