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1.
A competitive ELISA, using a specific monoclonal antibody, was designed to detect antibodies to Mycoplasma mycoides subsp. mycoides SC, the agent of contagious bovine pleuropneumonia. One monoclonal antibody was found suitable for such a test, ‘117/5', it does not cross-react with any of the other mycoplasma species tested, furthermore, its binding is inhibited by positive sera. The cutoff, 50% of inhibition, was determined using a set of negative sera from CBPP-free areas. The sensitivity was controlled with sera from artificially infected animals as well as from sera from areas where CBPP is enzootic. In both cases, cELISA compared favorably with CFT. The precocity of detection was similar but cELISA detected more positives and the positive titers seemed to persist longer than in the case of CFT. Lysis of the antigen used to coat the ELISA plates reduced the variability of fixation and improved the repeatability of the test. A field evaluation is now in progress which will determine the true sensitivity and specificity of the test and also check if antibodies are detected after vaccination.  相似文献
2.
单抗竞争ELISA检测猪沙门氏菌感染方法的建立与应用   总被引:5,自引:0,他引:5  
以猪霍乱沙门氏菌作为包被抗原 ,利用沙门氏菌O7单克隆抗体酶结合物建立了竞争ELISA方法检测猪霍乱沙门氏菌抗体。经过研究确定抗原包被浓度为 2×1 0 8CFU/ml,血清检测稀释度为 1∶1 6,酶标抗体浓度为 1∶70 0 ,包被液为碳酸盐缓冲液 ( 0 .0 5MpH9.6)。应用单抗竞争ELISA和平板凝集试验 (PAT)同时对 5 0 6份血清进行猪霍乱抗体检测 ,PAT的检出率为 3 .60 % ,ELISA检出率为 5 .75 % ,两者符合率达 96.4%。试验结果表明 ,ELISA方法敏感性高 ,特异性强 ,稳定性和重复性好 ,操作简便。本方法的建立在猪群沙门氏菌感染的检疫、实验室诊断的标准化及流行病学调查方面具有应用价值。  相似文献
3.
猪金属硫蛋白抗体的制备及应用   总被引:4,自引:0,他引:4  
以自猪肝提取的Zn—MT与BSA的偶联物为抗原,免疫昆明小鼠制备了多克隆抗体。获得的抗体经鉴定后用于建立检测猪MT的间接竞争EI。ISA。结果表明:制备的IgG达到电泳纯,是猪MT的特异性抗体。所建立的间接竞争ELISA的灵敏度为4.1ng/mL,批内变异系数是9.976%,批间变异系数为14.3858%,可用于猪体MT的定性、定量测定。  相似文献
4.
孔雀石绿间接竞争ELISA检测方法的建立   总被引:1,自引:1,他引:0  
采用无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)单克隆抗体建立了水产品中孔雀石绿(Malachite green,MG)残留的间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法。结果表明,LMG-McAb最佳稀释倍数为1∶80 000,包被抗原最佳质量浓度为0.80μg/mL;竞争反应时的LMG理想稀释液为40%乙腈水溶液;标准曲线呈线性相关,相关系数R2=0.9823,最适检测范围1 ng/mL~256 ng/mL,最低检测限为1.29 ng/mL,批内和批间变异系数分别为4.307%和4.566%;鳗鱼肉样的平均添加回收率为90%~110%;该检测方法与隐性结晶紫、孔雀石绿、结晶紫的交叉反应(CR%)分别为40.67%、13.50%和5.89%,与其他抗生素无交叉反应。  相似文献
5.
To prepare monoclonal antibodies against phenylethanolamine A (PA) and establish a fast,simple and sensitive method for the detection of PA,a derivative of PA was coupled with bovine serum albumin (BSA) and ovalbumin (OVA) as immunogen and coating antigen by diazotization.The immunogen that emulsified by Freund’s adjuvant was used for immunization of 6 to 8 weeks’ BALB/c mice in accordance with conventional procedures.The immune spleen cells of mice with high serum antibody titer were fused with SP2/0 myeloma cells by PEG method.After three subclonal screening,a hybridoma cell strain D6H8 of secreting anti-PA monoclonal antibody was screened out and the inducing ascites in vivo method was employed to produce monoclonal antibodies.The McAb was identified to be IgG1 subtype and kappa light chain.The purified antibody showed no cross-reactions with salbutamol amine,clenbuterol hydrochloride,isoprenaline hydrochloride and deoxyepinephrine hydrochloride (CR<0.18%),indicating that the antibody had good specificity.An indirect competitive ELISA method for PA drug residues was established using this antibody.The results showed that the titer of ascites antibody was 1∶12 800 and the linear relationship was good when the concentration of PA in pork was 5 to 1 000 ng/mL.The linear equation was y=0.3861x-0.1845 (R2=0.990).The concentration of IC50and LOD were 58.88 and 3.83 ng/mL,respectively.The recovery rates were between 85.96% and 104.32%,indicating that the ELISA method was reproducible and stable.In summary,an indirect competitive ELISA method for the determination of PA residues had been successfully established with high sensitivity and good stability.  相似文献
6.
用口蹄疫O型固相竞争ELISA检测血清1 150份,口蹄疫O型免疫血清820份,敏感性为91.83%;试剂盒特异性评价检测血清180份,其特异性为89.4%;固相竞争ELISA和液相阻断ELISA共同检测血清100份,其相关性分析为0.964 1,R2为0.929 5,属于高度相关。3批试剂盒检测血清样品50份,检测结果差异不显著,口蹄疫O型固相竞争ELISA抗体检测试剂盒检测结果比较稳定,具有良好的批间可重复性和稳定性。  相似文献
7.
针对苏丹红I和对位红的芳香胺共同化学结构特点,采用琥珀酸酐法人工合成苏丹红I免疫原,建立了快速检测苏丹红I和对位红残留的酶联免疫方法。同时对其灵敏度、准确度、特异性、基质效应性等技术指标进行测定。结果表明:该试剂盒与其它系列苏丹红均无交叉反应;试剂盒检测相关系数R2=99.56%,试剂盒最低检出限为0.1μg/L,半数抑制率IC50=0.599μg/L;油基质和水基质的辣椒样品的平均添加回收准确率分别为79.9%和78.2%;不同基质对该试剂盒的检测结果影响不大。该试剂盒适合于苏丹红I和对位红残留的快速检测,具有较高的推广价值。  相似文献
8.
为建立同时检测多种氟喹诺酮药物的免疫学分析方法,本研究以碳二亚胺(EDC)二步法合成环丙沙星人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立氟喹诺酮类药物多残留检测方法.标准曲线在PBS中的线性检测范围为0.2 ng/mL~376 ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为8 ng/mL,检测限(LOD)为0.1 ng/mL;抗体对恩诺沙星、诺氟沙星和培氟沙星均能特异性识别,IC50值分别为7.3 ng/mL、10.6 ng/mL、和13.2 ng/mL;标准品稀释液中NaOH和甲醇的最高容忍度分别为10%和30%;牛奶基质中添加5 ng/mL、20 ng/mL和50 ng/mL的标准品,环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星和培氟沙星的回收率分别为93%~108%、96%~110%、92.5%~104%和93%~102%.  相似文献
9.
针对小反刍兽疫病毒核蛋白制备特异性的单克隆抗体,并对其进行生物学特性鉴定和初步应用。以纯化的Bacmid-PPRV-N重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的致敏脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG作用下融合,获得单克隆抗体,并通过染色体技术等方法研究其生物学特性,将其作为竞争单抗,Bacmid-PPRV-N重组蛋白作为检测抗原建立竞争ELISA检测方法。结果表明:经克隆和间接ELISA筛选,获得了2株能稳定分泌抗小反刍兽疫病毒N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5B11和3H10-3B8。生物学特性鉴定试验表明:5B11和3H10-3B8抗体类型和亚类均为IgG2b;5B11单抗腹水的效价达1∶819 200,3H10-3B8达1∶12 800;血清学试验证明2株单抗均能与Bacmid-PPRV-N重组蛋白抗原结合,具有高度的特异性;相加ELISA试验结果显示,5B11和3H10-3B8 2株单克隆抗体分别识别N蛋白上不同的抗原位点;2株杂交瘤细胞的染色体均为99~104。应用建立的c-ELISA检测方法对222份血清样品进行PPRV抗体的检测,与参考试剂盒比较得到98.20%的符合率。本研究获得了2株能稳定分泌抗PPRV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以单抗5B11作为竞争抗体建立了PPRV的c-ELISA检测方法。  相似文献
10.
利用基因工程技术制备的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因原核表达产物重组N蛋白作为抗原诊断试剂,抗重组N蛋白的单克隆抗体作为抗体诊断试剂建立了间接竞争性ELISA检测细胞培养物中的TGEV病原的方法,并确定了间接竞争性ELISA操作流程中的最佳反应条件。在间接竞争性ELISA中,最佳抗原包被量为0.25卢g/孔;竞争抗原与单克隆抗体作用的最适时间为1h,反应温度为37℃;选择1h作为酶标抗体作用的最佳时间;底物液最佳作用时间为10min;选择样品的抑制率50%为其临界值;所用封闭液0.5%的聚乙烯醇PBS溶液在4℃冰箱中可密封保存6个月,封闭时间为120min;特异性试验表明与猪轮状病毒、猪流行性腹泻病毒等肠道腹泻性病毒均无交叉反应。本试验建立的间接竞争性ELIsA诊断方法具有良好的敏感性和特异性,为TGEV的疫情监测、及时而准确的诊断奠定了基础。  相似文献
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