气肿疽梭菌C54-1株的制备与检定

为研究气肿疽梭菌C54-1株(CVCC60001)的菌种特性,制备了1批气肿疽梭菌C54-1株,并对菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性、16S rDNA等进行检定,以及对于该菌的适宜培养基促生长能力等方面进行了比较。实验结果表明,该冻干菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》二〇〇〇版质量标准的规定。16S rDNA鉴定为气肿疽梭菌,相似度为99.93%。在免疫原性检定中,使用致死剂量攻毒时,免疫组能够4/4被保护,证明该菌明矾苗免疫效果良好。使用商品化梭菌培养基对于该菌培养进行了比对,证实商品化培养基替代厌气肉肝汤的可能性。本研究为气肿疽梭菌的制备和检定提供参考依据,并使用不同培养基进行比对研究,为该菌的稳定培养和疫苗工艺改进提供了研究基础。     

羊链球菌CVCC55001、CVCC55002株对昆明小鼠的致病性研究

为研究羊链球菌CVCC55001、CVCC55002株对昆明系(KM)小鼠的致病性,使用羊链球菌CVCC55001、CVCC55002株分别对昆明小鼠进行毒力测定,观察临床和剖检症状,对死亡小鼠进行细菌分离培养,并对典型菌落进行形态、生化特性以及PCR鉴定。毒力测定结果显示CVCC55001对于昆明小鼠的最小致死剂量为9 CFU,CVCC55002对于昆明小鼠的最小致死剂量为11 CFU。感染羊链球菌死亡小鼠主要剖检症状为肝脏出血、肠道液化性坏死、脾脏肿大,病理变化为肝细胞出现大量坏死、肠道黏膜层广泛自溶、脾脏组织广泛坏死出血。本研究建立了羊链球菌CVCC55001、CVCC55002株的昆明小鼠攻毒感染模型,确定了最小致死剂量,对羊链球菌感染和致病性研究展开初步探索,为疫苗研究及评价提供了平台支撑。     

猪丹毒丝菌生产用菌种CVCC43005株最高扩繁代次的确定及疫苗佐剂的筛选

为研究猪丹毒丝菌CVCC43005株作为生产用菌种的最高扩繁代次以及新型佐剂对该菌种免疫原性的影响,在对猪丹毒丝菌CVCC43005株形态、生化特性、培养特性、纯粹性、血清学特性、真空度、剩余水分含量、毒力及免疫原性等研究的基础上,建立了猪丹毒丝菌CVCC43005株种子批。将CVCC43005株(1986年冻干)用培养基进行了20次传代(F1~F20),并对其中的F5、F10、F15、F20代进行冻干并抽检测定。结果显示:抽检的各代次菌种均纯粹,形态、生化特性、培养特性均符合猪丹毒丝菌的特性,血清型为2型,真空度检查均呈现白色、粉色或紫色辉光,剩余水分含量均<3.0%,9~10CFU活菌皮下注射体重18~22g小白鼠,均于7日内5/5死亡。将抽检的各代次菌种制成铝胶佐剂灭活疫苗,免疫16~18g小白鼠后均能产生10/10保护。以F5代菌株制备菌液,甲醛灭活后,分别用铝胶佐剂、矿物质白油佐剂、洛阳赛威公司的水溶性佐剂、水性复合免疫佐剂以及法国赛比克公司的MONTANIDETMIMS1313VGNST、GEL01PR6种佐剂制备灭活疫苗,经无菌及安全检查合格后进行16~18g小白鼠免疫效果对比实验,最终确定猪丹毒丝菌CVCC43005株基础种子代数为F1~F10代,生产用菌种的最高扩繁代次宜控制在5代以内,法国赛比克公司的GEL01PR佐剂为猪丹毒灭活疫苗的最佳佐剂。该菌种作为生产用菌种最高扩繁代次的确定及疫苗佐剂的筛选,为修订菌种检定依据奠定了基础。