禽安卡拉病毒Hexon蛋白多克隆抗体的制备

为进一步建立Ⅰ群血清4型禽腺病毒(FADV-4)的特异性检测方法,根据本实验室分离鉴定的安卡拉病毒的基因组序列,设计针对六邻体蛋白(Hexon)基因的特异性引物,经PCR扩增,连接至p ET-28a中,构建原核表达载体p ET-28a-Hexon。将其转化感受态BL21中,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS-PAGE分析,获得重组蛋白大小为49 ku。Western blot分析纯化后重组蛋白能与FAd V-4阳性血清发生特异性反应。将纯化后的重组蛋白免BALB/c小鼠,制备了六邻体蛋白多克隆抗体,采用间接ELISA方法测定效价表明制备的血清效价大于1∶64 000。     

禽腺病毒4型XZ株增殖与纯化方法的建立

2015年7月以来,禽腺病毒4型在中国的大部分地区暴发流行,并造成重大损失。为进一步对该病毒进行研究,采用两种方法对所分离的XZ株进行体外增殖培养,并利用透射电镜观察到完整的病毒粒子,同时采用超滤浓缩和凝胶层析的方法对病毒进行纯化。结果显示,成功建立了稳定的禽腺病毒4型XZ株增殖体系,以及温和、高效的病毒纯化工艺,且纯化病毒感染性强,具有很好的免疫原性。     

鸡源抗血清4型Ⅰ群禽腺病毒单链抗体文库构建及筛选

为构建鸡源抗血清4型Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-4)单链抗体(scFv)文库并筛选出具有高亲和力的单链抗体。本研究从FAdV-4免疫鸡的外周血淋巴细胞中提取总RNA,采用RT-PCR的方法分别扩增出鸡抗体的VH和VL基因,通过Linker接头将VH和VL基因连接成scFv,将scFv基因连接至噬菌粒载体pComb3XSS中,构建单链抗体文库,通过噬菌体展示技术筛选抗FAdV-4单链抗体,并采用Phage ELISA方法检测抗体的亲和力。结果成功构建鸡源抗FAdV-4单链抗体文库,库容量为9.5×10~(10) PFU/mL,通过4轮"吸附-洗脱-富集"筛选,最终鉴定出1株与FAdV-4具有较高的亲和活性的单链抗体。该研究结果为进一步研究FAdV-4抗体奠定了基础。     

育雏早期应用氟苯尼考对禽腺病毒感染雏鸡病情的影响

为了评价氟苯尼考的应用对禽腺病毒感染雏鸡病情的影响,本试验通过对血清4型禽腺病毒感染SPF雏鸡并应用氟苯尼考饮水给药,监测雏鸡的发病及排毒情况,并对免疫器官指数、干扰素相关基因及细胞因子基因表达情况进行检测。结果显示,病毒感染雏鸡后应用氟苯尼考能显著增加雏鸡的病死率及排毒量,加重雏鸡的病理学变化,并降低雏鸡免疫器官指数,还可降低干扰素相关基因IRF-7、2′-5′OAS、MX1和细胞因子基因IL-6、IFN-γ、TNF-α的转录水平。本试验进一步认识了氟苯尼考的毒副作用,对临床氟苯尼考的合理用药提供了相关数据支持,为进一步研究氟苯尼考的毒副作用奠定了基础。     

鸡包涵体肝炎及其诊治

鸡包涵体肝炎是由禽腺病毒引起的鸡的一种急性传染病，以病鸡死亡突然增多，严重贫血、黄疸、肝脏重大出血和坏死灶，可见肝细胞核内有包涵体。1984年以后，我国通过血清学检查确定东北、华北、华南各地均有该病存在，山东省也不例外。有人从内蒙古某地分离到一株IBH病毒，经鉴定为禽腺病毒8型。     

共表达内溶素和人溶菌酶基因的重组腺病毒构建

为研究内溶素SAL-2和人溶菌酶h LYZ的联合抑菌作用,本研究通过PCR方法分别从携带SAL-2和h LYZ基因的质粒中扩增目的片段,连接至腺病毒穿梭载体的多克隆位点上,构建重组穿梭载体p Shuttle-SAL和p Shuttle-LYZ。成功构建的重组穿梭质粒与Ad-easy骨架质粒在BJ5183中发生同源重组,重组得到的阳性重组腺病毒载体在脂质体介导下转染HEK293细胞,包装产生重组腺病毒Ad-SAL、Ad-LYZ、Ad-SALLYZ和对照重组腺病毒Ad-GFP,通过RT-PCR和Western blot方法检测mR NA和蛋白表达后,将构建的重组腺病毒进行扩增纯化并测定病毒滴度。结果表明,成功构建的重组腺病毒感染细胞后,SAL-2和h LYZ基因的mR NA均有表达,Western blot分别检测到28.6 ku和14.7 ku目的蛋白条带。扩增纯化后经TCID50方法检测病毒滴度分别为108.17TCID50/mL、108.50TCID50/mL、108.63TCID50/mL和107.60TCID50/mL。表明成功构建包装的重组腺病毒对HEK293细胞具有较强的感染能力,可稳定介导SAL-2基因和h LYZ基因在HEK293细胞中的表达。     

中西药结合治疗犬传染性肝炎

<正>犬传染性肝炎是由犬腺病毒Ⅰ型引起的一种急性败血性接触性传染病,其主要发生于犬,表现为肝炎和眼部疾患。临床上以马鞍型热,严重血凝不全,肝区疼痛,角膜混浊等为特征的疾病。1发病情况黑龙江省铁力市某林业局张某的养犬场,饲养肉犬68只,有繁殖母犬24只,其中牧羊犬6只,公犬8只,其余是仔犬。于2012年2月初的一天,张某在市场上买了4只幼犬,当时感到价格很便宜,买回后在圈的一     

犬传染性肝炎

<正>犬传染性肝炎是由犬传染性肝炎腺病毒引起的犬科动物的一种急性,高度接触性败血性的传染病。1流行病学本病的主要传染源是患病犬和带毒犬,病犬的分泌物及排泄物都含有大量的病毒,易感犬通过直接或间接接触而感染,本病的发生不分品种和年龄,不满一年的幼犬易感性更高,死亡率也更高。康复犬通过尿液可长期向外带毒。2临床症状本病自然发病潜伏期为6~9d,病犬精神沉郁,食欲不振,喜欢喝水,心跳加快,呼吸加快,体温升高,呕吐,腹泻,还     

猪腺病毒3型Hexon蛋白多克隆抗体制备与免疫活性鉴定

本研究旨在制备猪腺病毒3型(PADV-3)Hexon蛋白多克隆抗体。试验构建重组原核表达载体pET28a-Hexon,IPTG诱导重组蛋白的表达并进行Western blotting鉴定,目的蛋白与佐剂混合、乳化制备免疫原,免疫家兔制备Hexon蛋白多克隆抗体。采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测抗体的免疫活性与抗体滴度。结果显示,Hexon蛋白原核表达以包涵体形式存在,分子质量约为105ku;真核细胞表达的Hexon蛋白均定位于HEK293细胞质内,细胞核内无分布;IPMA测定所制备的多克隆抗体滴度为1∶1 600,该抗体与体外培养的PADV-3及稳定表达Hexon蛋白的细胞均呈特异性反应。结果表明本试验制备的PADV-3型Hexon蛋白多克隆抗体免疫活性和特异性良好。     

传染性造血器官坏死症重组腺病毒载体的构建

【目的】克隆传染性造血器官坏死症病毒(IHNV)G基因,构建其重组腺病毒载体,为IHN预防及疫苗的研制提供参考。【方法】通过RT-PCR和PCR技术扩增IHNV G基因,将G基因插入到腺病毒穿梭载体中,再用带有目的基因的腺病毒载体与骨架载体在大肠杆菌BJ5183中同源重组,构建重组腺病毒质粒,通过PCR扩增及SalⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定,经PacⅠ酶切后转染HEK-293细胞进行包装,获得带有目的基因的重组腺病毒,通过观察绿色荧光蛋白表达情况来监控重组腺病毒,用Western-blot法检测糖蛋白的表达,并测定重组腺病毒的TCID_(50)。【结果】成功克隆出IHNVG基因,其长度为1 533bp。成功构建了IHNV G蛋白重组腺病毒载体。GFP监测显示,重组腺病毒转染成功。重组腺病毒能在HEK-293细胞中表达出分子质量约58ku的产物,与预期相符,其TCID_(50)达到1.0×10~(10.4)mL~(-1)。【结论】成功构建了带有IHNVG基因的重组腺病毒载体,重组腺病毒能高效表达,滴度较高。