猪流行性腹泻病毒野毒株及弱毒疫苗株RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用

为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)野毒株及弱毒疫苗株快速鉴别检测方法,根据Gen Bank中公布的PEDV野毒株及弱毒疫苗株的ORF3基因序列,在缺失区的两端设计合成1对特异性扩增引物,用以特异性的扩增PEDV ORF3基因片段,根据目的片段大小判断PEDV的毒株类型;通过退火温度等反应条件优化,建立了区分PEDV野毒株和弱毒疫苗株的RT-PCR鉴别检测方法。结果显示:所建立的RT-PCR鉴别检测方法能特异性区分PEDV野毒株和弱毒疫苗株;PEDV野毒株扩增出234 bp目的片段,PEDV弱毒疫苗株扩增出185 bp目的片段;与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、A群猪轮状病毒(PRo VA)、猪嵴病毒(PKV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪乙型脑炎病毒(JEV)及猪细小病毒(PPV)均无交叉反应;敏感性试验显示,该方法能检测到病毒滴度为1.3×10~3TCID_(50)/mL。利用该方法对采集自广西部分地区93份临床腹泻样品进行检测,临床腹泻样品中PEDV野毒株阳性率为61.29%(57/93),弱毒株阳性率为5.38%(5/93)。结果表明:该RT-PCR鉴别检测方法特异性强、灵敏度高、操作简便,能快速、准确地区分PEDV自然感染野毒株和弱毒疫苗毒株,为猪流行性腹泻的快速诊断及病原分子鉴别检测研究提供了可供借鉴的技术手段。     

辐照处理花椒腋芽初代表型研究

利用60Co-γ射线辐照处理休眠态花椒腋芽,调查分析成活率及初代表型效应,以探讨辐射处理进行花椒育种的合适剂量,为进一步培育新种质做基础工作。结果表明:休眠腋芽致死剂量为55GY,临界诱变剂量在35GY左右。辐照后初代表型效应表现为:枝型异形及叶型异形,并且2种表现效应有明显的剂量倾向性。     

帝益肥董事长刘新领当选为郑州市人大代表

<正>本报讯近日,郑州市十三届人大常委会第四十二次会议表决通过了市第十四届人民代表大会代表的代表资格审查报告。根据《中华人民共和国全国人民代表大会和地方各级人民代表大会选举法》的规定,各县(市)区和中国人民解放军、武装警察驻郑部队等选举单位,共选举产生出郑州市第十四届人民代表大会代表563名。郑州帝益生态农业科技工程有限责任公司董事长、中国功能肥料行业创始人刘新领顺利当选郑州市第十四届人大代表。刘新领,作为锐意改革、勇于开拓进取的企业家获得此项荣誉。他表示,将不负众     

一例猪繁殖与呼吸综合征高致病性毒株与链球菌混合感染的实验室诊断

某规模化自繁自养猪场产房母猪出现流产,保育猪关节肿胀、倒地不起、大量死亡,为研究发病原因,采集流产胎儿、死亡仔猪的肺脏、脾脏、淋巴结和关节液,进行分子生物学检测,病毒和细菌分离鉴定,并检测不同胎龄母猪猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体,结果显示猪繁殖与呼吸综合征病毒检测为阳性,使用PAM分离到一株猪繁殖与呼吸综合征病毒,经序列鉴定为高致病性毒株;抗体结果表明四胎及以上母猪猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性率异常升高;病料分离的细菌经鉴定为猪链球菌,经实验室诊断确定猪场发病的原因为猪繁殖与呼吸综合征高致病性毒株与猪链球菌混合感染。     

猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性/经典毒株多重RT-PCR方法的建立及应用

为了建立鉴别猪瘟病毒(Classical swine virus,CSFV)、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)及经典猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)的快速检测方法,根据GenBank中公布的已知序列,设计合成了针对CSFV、HP-PRRSV和C-PRRSV特异性引物。经过引物筛选及对退火温度、引物比例等扩增条件的优化,建立了用2对引物同时检测CSFV、HP-PRRSV和C-PRRSV的多重RT-PCR方法。该方法可同时扩增出287bp的CSFV、374bp的HP-PRRSV和464bp的C-PRRSV目的核苷酸片段,与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和传染性胃肠炎病毒(TGEV)等无交叉反应,最低可以检测到11.3pg的CSFV、4.7pg的HP-PRRSV和2.8pg的C-PRRSV总RNA。分别用多重和单项RT-PCR检测了从河北省采集的31份血清或组织样品,其中CSFV、HP-PRRSV、C-PRRSV以及CSFV与HP-PRRSV混合感染的检出率分别为19.4%、22.6%、0%与9.7%,多重与单项RT-PCR的符合率为100%。本试验建立的多重RT-PCR方法可同时鉴别CSFV、HP-PRRSV与C-PRRSV,适于猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的快速检测与流行病学调查。     

猪瘟病毒野毒株与疫苗株E2基因双重TaqMan real-time PCR鉴别检测方法的建立

为建立猪瘟病毒(CSFV)野毒株和疫苗株快速定量鉴别检测方法,根据CSFV野毒株和疫苗株E2基因序列差异,设计了2对特异性引物及1条Taq Man探针,以含CSFV HB株和C-株E2基因的重组质粒p BS-E2C和p BS-E2作为标准品,建立了能同时检测CSFV野毒株和疫苗株的双重Taq Man real-time PCR鉴别检测方法。结果表明,建立的CSFV双重Taq Man real-time PCR标准曲线Ct值与1×101~1×106copies/μL之间的E2基因拷贝数呈良好的线性关系,灵敏度达10 copies/μL,且特异性和重复性很好。综上,本试验建立的Taq Man real-time PCR检测方法可用于CSFV野毒株和疫苗株的鉴别诊断及病原定量分析。     

科技动态

提前感染温和型PEDv可以给猪提供保护力抵抗严重型PEDv根据猪健康监视计划数据,从2013年7月份到2014年7月份,PEDV感染了美国50%左右的猪群。由于目前没有有效疫苗,因此急需一些有交叉保护性的对策。本报实验中我们研究感染温和性PEDV 7个月的母猪所产3日龄仔猪对强毒株的反应。感染温和株与不感染相比仔猪一周存活率分别为100%和67%,发病率分别为43%和100%。7日龄剖检时感染母猪后代肠道PEDV Ct的量为23.6(16.6-30.6),     

2014年全球全价饲料产量增长2.4%

【本刊辑】据国际畜牧网报道,动物健康和营养公司奥特奇于2015年1月23日公布了其2015年度《全球饲料调查》,其中的分析数据来自由600个国际销售代表组成的销售网络以及众多的行业协会,囊括了130个国家,31000个饲料加工厂的数据。据奥特奇公司的估计,与2013年的9.63亿吨相比,2014年全球复合饲料的产量增长了2.4%——接近9.80亿吨。在地区性分析中,印度首次出现在世界饲料生产国前5