犬细小病毒病免疫胶体金诊断技术的研究

建立一种简便、快速、准确检测犬细小病毒(CPV)的胶体金免疫层析法(GICA).采用柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒,标记纯化的CPV单克隆抗体,在玻璃纤维素膜上喷加纯化的CPV多克隆抗体,制成诊断CPV抗原的快速诊断试纸条.用本试验研制的CPV试纸条检测收集到的120份犬粪便样品,其结果与HA结果相比对,HA效价在1:40以上,试纸条均能检测到为阳性.CPV试纸条与犬瘟热病毒及犬传染性肝炎病毒无交叉反应.且试纸条保存6个月后,其检测结果重复性为100%.试验证明,本研究建立的GICA是一种快速、灵敏、特异的抗原检测方法,可在临床上广泛应用,也可用于CPV的流行病学调查.  

免疫胶体金技术的应用及研究进展

免疫胶体金标记技术与免疫荧光、免疫酶、免疫铁蛋白等标记技术相比具有独特的优越性和更广泛的用途.本文综述了免疫胶体金技术的原理、特点、应用及研究进展.  

银加强胶体金技术检测猪细小病毒的研究

本研究首次成功地建立了检测猪细小病毒（ＰＰＶ）抗原的银加强胶体金检测法（ＳＥＣＧＡ），并确定了操作流程中的最佳试验条件。应用该法对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为０．３１２５ｎｇ／点，其敏感性分别为间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＨＡ的８倍和１０００倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明ＳＥＣＧＡ具有较高的特异性。２０份样本ＳＥＣＧＡ的检测结果与病毒分离和鉴定结果完全相符。ＳＥＣＧＡ和间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对７７份样本检测的阳性率分别为８３．１％和８０．５％，其阳性符合率为９６．９％。研究结果表明本法具有经济、敏感性、特异性强等优点，可用于ＰＰＶ感染的特异诊断。为胶体金技术应用于畜禽传染病的诊断和研究奠定基础。  

应用胶体金免疫电镜技术检测鸭肝炎病毒

本研究应用胶体金免疫电镜技术和直接电镜（ＤＥＭ）、免疫电镜（ＩＥＭ）比较观察了鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）ＱＬ＿７９弱毒株和Ｒ＿８５９５２标准强毒株。ＱＬ＿７９株和Ｒ＿８５９５２株的形态结构是一致的，球形，大小为２０～４０ｎｍ。胶体金免疫电镜技术可作为检测ＤＨＶ的常规方法，具有简便、快速、灵敏、直观等特点。  

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜，然后用胶体金标记SPA，建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色，阳性者出现红色斑点，结果易于判断。整个试验过程仅需5min，操作简单，与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot—ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较，符合率达98．4％和98．9％。说明该法微量、特异、敏感可靠，检测时间短，效果直观，非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。  

猪繁殖与呼吸综合征胶体金抗体检测技术的建立和初步应用

用胶体金标记纯化后的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因工程表达抗原,建立一种以微孔滤膜为固相载体,以红色胶体金为标记物的检测PRRSV抗体的胶体金免疫层析法(GICA).特异性交叉试验证明GICA检测PRRSV抗体有较高的特异性.与其他方法对比检测证实了其敏感性.生产了一批免疫胶体金试纸条,检测36份临床样本,其中30份经免疫胶体金试纸条及ELISA、免疫荧光检测均为阳性.猪繁殖与呼吸综合征免疫胶体金抗体检测技术的建立为检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体提供了一种快速简便的方法.  

免疫胶体金法检测磺胺甲噁唑残留的研究

应用胶体金免疫层析技术（GICA）进行磺胺甲嗯唑（SMZ）的残留检测研究。制备抗磺胺甲嗯唑多克隆抗体，并采用柠檬酸三钠法制备20nm胶体金颗粒。胶体金标记多抗后喷涂到玻璃纤维膜上，特异性抗原（SMZ-OVA）以线状包被在硝酸纤维素膜上，制成快速检测试纸条。滴加检测溶液后，若呈现一条红色条带则为阴性，无红色条带则为阳性。该方法对SMZ标准溶液的灵敏度达到50ng／mL，试纸条显色结果清晰，反应灵敏，整个检测反应在5～10min内完成，稳定性及重复性良好。  

免疫胶体金技术影响因素分析

免疫胶体金技术以其快速、准确、简捷的特点，受到国内外科研工作者及基层工作人员的普遍关注。笔者从耗材的选择、胶体金的制备及标记、膜包被条件、缓冲液和产品保存及验证等方面分析免疫胶体金技术的影响因素，为制备胶体金检测产品提供理论依据和技术参考。  

应用金免疫层析技术检测猪瘟抗体的研究

用金标免疫层析技术测试30份标准阳性血清和18份标准阴性血清，结果阳性，阴性符合率100％。用该方法与ELISA试剂、dot-ELISA试剂及正向间接血凝进行比对试验检测血清样品205份，结果阳性率ELISA为86．8％，金标层析法为85.4％，dot-ELISAO 81．5％，正向间接血凝为58.5％，结果显示该方法特异性强，敏感性高，操作简单，使用方便。既可用血清，也可以用全血测猪瘟抗体，可广泛应用于猪场和个体养猪户现场检测。  

检测猪瘟病毒野毒株胶体金免疫层析方法的建立

为建立快速、简便检测猪瘟病毒(CSFV)野毒的胶体金免疫层析方法(GICA),本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗CSFV E2蛋白的单克隆抗体(MAb)6E10作为捕捉抗体.将纯化的抗CSFV E2蛋白的MAb HQ06和兔抗鼠IgG抗体包被在硝酸纤维素膜上,分别作为检测线和质控线,优化反应条件,组装成胶体金免疫层析试纸条.结果表明,所制备的试纸条用于检测CSFV野毒感染的PK-15细胞培养物,在检测线和质控线处均呈现红色条带,健康PK-15细胞培养物对照仅在质控线呈现红色条带;试纸条检出病毒培养物的最低限为103.4 TCID50;用不同批次的试纸条重复检测,结果无差异;该试纸条不与猪瘟兔化弱毒(HCLV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PRV)、伪狂犬病病毒(PrV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)反应.所制备的试纸条具有良好的特异性、敏感性和重复性,初步达到了区分检测CSFV野毒株和弱毒株的目的.