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1.
PRRSV抗体竞争ELISA检测方法的建立与标准化研究   总被引:6,自引:1,他引:5  
以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)基因的原核表达产物重组N蛋白为包被抗原,利用兔抗重组N蛋白血清和PRRS猪血清竞争该抗原,建立间接竞争ELISA方法检测PRRS抗体。经研究确定重组N蛋白的包被浓度为0·3μg/mL,检测血清不用稀释,兔抗重组N蛋白血清的工作浓度为1∶3000,酶标抗体的工作浓度为1∶10000,包被液为0·05mol/L、pH9·6的碳酸盐缓冲液。该方法特异性强,稳定性和重复性好,整个检测过程可在3h内完成。以IDEXX试剂盒的检测结果为参照标准,该方法的敏感性为79·76%,特异性为90·9%,符合率为83·59%。将该方法按试剂盒要求标准化,4℃放置5个月,检测效果不变。  相似文献
2.
竞争ELISA检测猪呼吸与繁殖综合征病毒抗体研究   总被引:5,自引:0,他引:5  
应用抗PRRSN蛋的单克隆抗体建立了竞争ELISA检测技术,与美国IDEXX公司的间接ELISA检测试剂盒对比检测了30份SPF猪血清,29头SPF猪人工接种呼吸与繁殖综合征病毒后于5d、12d、29d采集的猪血清共87份,临床血清95份,以及其他相关病毒的阳性血清。实验证明,竞争ELISA的检测阴阳性限值为30%,检测特异性为100%,在人工攻PRRSV病毒第五天的猪血清中,可检测到抗PRRSVN蛋白抗体,12dpi,阳性检出率为93%,29dpi,阳性检出率为100%,与IDEXXPRRSVELISA试剂盒进行比对,结果表明,二种检测方法检测美洲株PRRSV抗体的符合率为90%以上,但检测欧洲株抗体符合率较低。建立的竞争ELISA检测技术对于PRRSV美洲株抗体的早期诊断有非常重要的意义。  相似文献
3.
单抗竞争ELISA检测猪沙门氏菌感染方法的建立与应用   总被引:5,自引:0,他引:5  
以猪霍乱沙门氏菌作为包被抗原 ,利用沙门氏菌O7单克隆抗体酶结合物建立了竞争ELISA方法检测猪霍乱沙门氏菌抗体。经过研究确定抗原包被浓度为 2×1 0 8CFU/ml,血清检测稀释度为 1∶1 6,酶标抗体浓度为 1∶70 0 ,包被液为碳酸盐缓冲液 ( 0 .0 5MpH9.6)。应用单抗竞争ELISA和平板凝集试验 (PAT)同时对 5 0 6份血清进行猪霍乱抗体检测 ,PAT的检出率为 3 .60 % ,ELISA检出率为 5 .75 % ,两者符合率达 96.4%。试验结果表明 ,ELISA方法敏感性高 ,特异性强 ,稳定性和重复性好 ,操作简便。本方法的建立在猪群沙门氏菌感染的检疫、实验室诊断的标准化及流行病学调查方面具有应用价值。  相似文献
4.
猪金属硫蛋白抗体的制备及应用   总被引:4,自引:0,他引:4  
以自猪肝提取的Zn—MT与BSA的偶联物为抗原,免疫昆明小鼠制备了多克隆抗体。获得的抗体经鉴定后用于建立检测猪MT的间接竞争EI。ISA。结果表明:制备的IgG达到电泳纯,是猪MT的特异性抗体。所建立的间接竞争ELISA的灵敏度为4.1ng/mL,批内变异系数是9.976%,批间变异系数为14.3858%,可用于猪体MT的定性、定量测定。  相似文献
5.
氟喹诺酮类药物的多残留酶免疫分析研究   总被引:4,自引:2,他引:2       下载免费PDF全文
以制备的多抗血清为基础,建立了氧氟沙星(OFL)、二氟沙星(DIF)和诺氟沙星(NOR)的多残留间接竞争酶免疫吸附测定法(Ci ELISA法)。OFL、 DIF和NOR的标准曲线的线性回归方程分别为y=-0.1984x+0.9687 (r=0.9885)、y=-0.1738x+0.9150 (r=0.9985)、y=-0.2004x+0.9572(r=0.9954);中值(IC50)分别为231.57、245.32 、186.14 ng/ml ;最低检测限(LOD)分别为1.62、1.86、1.07 ng/ml;标准曲线在2~10000 ng/ml之间均有良好的线性关系(r≥0.9885)。方法的批内CV≤5.44%,批间CV≤12.45%。当OFL、DIF或NOR以浓度15~10000 ng/ml在牛奶中添加时,药物能较好地被回收,回收率均在71.70%~94.53%之间。  相似文献
6.
肠炎沙门氏菌快速检测方法的建立   总被引:4,自引:0,他引:4  
利用针对肠炎沙门氏菌主要O因子抗原O9的3-47-26单克隆抗体建立了快速检测肠炎沙门氏菌的竞争ELISA方法(C-ELISA)。将被检样品与McAb作用,竞争性抑制了McAb与包被肠炎沙门氏菌的结合,同时,也减弱了酶标二抗与McAb的结合,以降低底物反应的颜色,从而达到检测样品的目的。试验结果表明,本方法只选择性地与肠炎沙门氏菌反应,而与其它沙门氏菌均不反应。通过与国标法对210份样品检测结果比较表明,竞争ELISA方法的敏感性和特异性分别为94.4%和97.7%,从而为肠炎沙门氏菌的检测提供了一种快速、敏感、特异的检测方法。  相似文献
7.
犬细小病毒VP2抗体竞争ELISA检测方法的初步建立   总被引:3,自引:3,他引:0       下载免费PDF全文
本研究旨在制备犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)VP2抗体,并建立竞争ELISA检测方法,从而为CPV疫苗免疫效果的检测及血清学调查提供技术支持。参照GenBank中犬细小病毒VP2基因序列设计1对添加EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点的引物,PCR扩增VP2基因全长序列,将其克隆到pET28a(+)载体中,构建原核表达载体pET28a-VP2,转化大肠杆菌Rosetta,表达并纯化了重组蛋白。SDS-PAGE及Western blotting分析表明,目的蛋白分子质量大小为67 ku,可被CPV抗血清识别,证明其能与特异性抗体结合,有良好的抗原性。以纯化的重组蛋白免疫家兔制备VP2多抗,采用辣根过氧化物酶进行标记,初步建立了竞争ELISA方法。结果显示,VP2重组蛋白的最佳包被浓度为5 μg/mL,酶标多抗的最佳稀释度为1∶3200,封闭条件为4 ℃过夜,最适的封闭液为10%小牛血清,山羊抗兔IgG-HRP的最佳工作浓度为1∶5000,显色时间为25 min。竞争ELISA试验结果表明,该方法具有较强的稳定性,有望为CPV疫苗免疫效果的判定及血清学调查提供技术手段。  相似文献
8.
抗莫能菌素多克隆抗体检测鸡组织中莫能菌素残留的研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
瞿永前  袁忠 《中国家禽》2003,25(20):12-13
本文用自制的抗莫能菌素多克隆抗体检测肉鸡肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织中莫能菌素的残留。将莫能菌素以30.0、60.0、120.0μg/kg分别添加到经处理的各空白组织中,用竞争ELISA法测得莫能菌素在肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织中的回收率为78.7%~104.3%,变异系数为4.2%~18.0%,检测极限为5.0~8.51μg/kg。  相似文献
9.
孔雀石绿间接竞争ELISA检测方法的建立   总被引:1,自引:1,他引:0  
采用无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)单克隆抗体建立了水产品中孔雀石绿(Malachite green,MG)残留的间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法。结果表明,LMG-McAb最佳稀释倍数为1∶80 000,包被抗原最佳质量浓度为0.80μg/mL;竞争反应时的LMG理想稀释液为40%乙腈水溶液;标准曲线呈线性相关,相关系数R2=0.9823,最适检测范围1 ng/mL~256 ng/mL,最低检测限为1.29 ng/mL,批内和批间变异系数分别为4.307%和4.566%;鳗鱼肉样的平均添加回收率为90%~110%;该检测方法与隐性结晶紫、孔雀石绿、结晶紫的交叉反应(CR%)分别为40.67%、13.50%和5.89%,与其他抗生素无交叉反应。  相似文献
10.
To prepare monoclonal antibodies against phenylethanolamine A (PA) and establish a fast,simple and sensitive method for the detection of PA,a derivative of PA was coupled with bovine serum albumin (BSA) and ovalbumin (OVA) as immunogen and coating antigen by diazotization.The immunogen that emulsified by Freund’s adjuvant was used for immunization of 6 to 8 weeks’ BALB/c mice in accordance with conventional procedures.The immune spleen cells of mice with high serum antibody titer were fused with SP2/0 myeloma cells by PEG method.After three subclonal screening,a hybridoma cell strain D6H8 of secreting anti-PA monoclonal antibody was screened out and the inducing ascites in vivo method was employed to produce monoclonal antibodies.The McAb was identified to be IgG1 subtype and kappa light chain.The purified antibody showed no cross-reactions with salbutamol amine,clenbuterol hydrochloride,isoprenaline hydrochloride and deoxyepinephrine hydrochloride (CR<0.18%),indicating that the antibody had good specificity.An indirect competitive ELISA method for PA drug residues was established using this antibody.The results showed that the titer of ascites antibody was 1∶12 800 and the linear relationship was good when the concentration of PA in pork was 5 to 1 000 ng/mL.The linear equation was y=0.3861x-0.1845 (R2=0.990).The concentration of IC50and LOD were 58.88 and 3.83 ng/mL,respectively.The recovery rates were between 85.96% and 104.32%,indicating that the ELISA method was reproducible and stable.In summary,an indirect competitive ELISA method for the determination of PA residues had been successfully established with high sensitivity and good stability.  相似文献
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