我国犬瘟热病毒的生态学调查研究

本研究应用电子显微镜技术检查了１７个毛皮动物和野生动物的６７６份材料，从犬，貂，貉，狐熊，小熊猫，大熊猫，狼，狮，虎，猞狮、金猫等１２种动物病料中，检出含有ＣＤＶ材料４８７份。应用间接ＥＬＩＳＡ、免疫荧光和中和试验等技术检测了８种动物１５８份血清，其中从犬，狐，小熊猫、虎、金猫，狼等６种动物的１０６份血清中检出了抗ＣＤＶ抗体。应用ＲＴ－ＰＣＲ和基因探针检查了４种动物的３７份材料，其中有２９份阳性。  

犬瘟热病毒抗体检测方法的比较研究

用犬瘟热（ＣＤ）弱毒和自制的高免犬血清，建立了检测犬瘟热病毒（ＣＤＶ）抗体的中和（ＳＮ）试验、间接荧光抗体技术（ＩＦＡＴ）和间接免疫酶染色法。这３种方法对３８份ＣＤ弱毒疫苗免疫犬血清抗体效价的测定结果表明，当被检血清稀释度为１∶１００时，ＳＮ试验、ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法测定时的阳性血清数分别为２９，７和３１份，ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法测定结果相对于ＳＮ试验结果的符合率分别为４２．１％和９４．７％。同时发现，当ＳＮ试验测定的血清效价在１∶１００以上时，ＩＦＡＴ测定结果总是在１∶２５以上，间接免疫酶染色法测定结果总是在１∶１００以上。３种方法以各自初步确定的ＣＤＶ血清抗体效价完全保护值指标计算所测血清的完全保护率，ＳＮ试验为７６．３％，ＩＦＡＴ为７８．９％，间接免疫酶染色法为８１．６％。据此认为，ＩＦＡＴ和间接免疫酶染色法均可部分代替ＳＮ试验用于ＣＤ疫苗免疫效果的评价、免疫犬抗体水平的监测以及ＣＤ的流行病学调查  

犬瘟热病毒南京分离株的生物学特性鉴定

从南京地区临床诊断疑似为犬瘟热的病犬脑组织分离到 1株病毒 ,经鉴定为犬瘟热病毒 ( CDV) ,命名为 CDV-NJ1 5,对其培养特性、细胞毒力、血凝活性、抗原性、结构多肽和对犬的致病性进行了研究。结果表明 ,除 Vero外 ,CDV-NJ1 5还能在 MDCK、BHK-2 1、FE、DJRK、HEp-2等细胞系有限增殖 ,产生的 CPE特征与 Vero细胞类似 ,但不能在 PK1 5细胞系增殖。在 Vero细胞的 TCID5 0 和空斑形成单位分别为 1 0 - 5 .0 /m L和2 .4× 1 0 5 PFU/m L。参考株 CDV-Onderspoort的培养特性和细胞毒力基本与之相似 ;交叉中和试验表明 ,二者之间具有交叉反应和相同的抗原性 ;二者的结构多肽 NP蛋白和 F蛋白用特异性单克隆抗体免疫转印技术分析 ,未显示差异。动物回归试验表明 ,CDV-NJ1 5对犬表现出弱致病力。以上结果提示 ,该分离株是一持续性感染的弱毒株 ,其抗原性与疫苗株未显示差异  

犬瘟热病毒当前研究进展

犬瘟热（Canine Distemper）是由犬瘟热病毒（Canine Distemper Virus，CDV）引起的多种动物共患的传染病。在自然条件下，CDv能够感染犬科、鼬科、浣熊科、大熊猫科、猫科等多种动物，对我国养犬业、经济动物养殖业、动物园观赏业、野生动物保护业以及实验动物等危害极大。近几年来，在患Paget’s疾病的病人组织中检出了CDV核酸，因此其潜在的公共卫生学意义也已受到广大国内外学者的关注，开展的研究涉及病毒的病理学、免疫学、分子流行病学、检测等方面。  

犬瘟热病毒的检测技术

从免疫学和分子生物学两方面对犬瘟热病毒检测技术进行了综述 ,并探讨了今后的研究方向。  

Dot—ELISA检测犬瘟热病毒抗原的研究

用建立的三抗体夹心法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测犬瘟热病毒（ＣＤＶ）抗原，其抗原最低检出量为１．１５μｇ／ｍＬ（０．５７６２５ｎｇ／点），经与常规ＥＬＩＳＡ对１０４份自然感染犬的血液白细胞样本，６０份眼结膜分泌物样本，７３份脾、肝、淋巴结等脏器样本进行检出的阳性率分别为９２．３１％、６６．６７％、８３．５６％和９０．７２％、６３．２９％、８１．８６％；两种方法检出的总阳性率分别为８３．５４％（１９８／２  

犬瘟热病毒野毒株融合蛋白主要功能区基因的变异研究

根据犬瘟热病毒（ＣＤＶ）融合蛋白（Ｆ）基因的核苷酸序列，设计合成了１０条引物。用１对引物从延吉犬病料中扩增出了含Ｆ２区基因的３１４ｂｐ的片段。除两端引物序列外为２６５ｂｐ，编码８８个氨基酸。它与日本弱毒株（ＣＤＶ－Ｄ，Ｏｏｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ弱毒株（ＣＤＶ－ＯＮ）、海豹瘟热病毒２型（ＰＤＶ２）、１型（ＰＤＶ１）在核苷酸和氨基酸水平上的同源性，分别为９８．１％和９５．５％、９６．２％和９３．２％和  

犬瘟热病毒A株核衣壳蛋白基因的克隆、表达及特性分析

根据GenBank中A75／14株犬瘟热病毒（CDV）核衣壳蛋白（N）基因的核苷酸序列设计合成一对引物，经RT-PCRgA病毒总RNA中扩增出1600bp的N基因，将其克隆于pMD18-T载体对其进行序列分析。结果表明A株CDV与其它毒株N基因序列的同源性较高。将N基因定向克隆于原核表达栽体pPROEXX^TM HT，用重组质粒pPROEX^TM HT-N转化感受态E．coli DH5a细胞，用IPTG于37℃诱导表达了分子量约63Ku的重组N蛋白，占菌体总蛋白18％。经Western blot分析证实所表达的重组N蛋白具反应活性，将表达产物用ProBond^TM纯化试剂盒进行了纯化。用所获得的重组蛋白免疫家兔制备的多克隆抗体可与CDV全病毒发生特异性反应，经琼扩试验测定其效价为1：16。本实验为下一步用重组N蛋白作为诊断用抗原，建立特异的CDV抗体检测方法奠定了基础。  

犬瘟热脏器组织中的抗原定位及病理形态学观察

本文采用免疫组化间接ＢＡ法，对临诊疑似犬瘟热病犬脏器组织中的抗原，进行了定位检查并进行了系统病理学观察。结果表明：发病犬大脑、小脑、延髓、肺、心、脾、膀胱、肠、肝、胰、肾上腺等组织细胞及血管内皮、支气管上皮细胞胞浆内均可见抗原阳性反应。同时，抗原阳性反应组织、器官均可见不同程度的病理变化。  

细菌CpG—DNA对犬免疫增强效果的研究

以犬瘟热病毒为模式病毒，将CpG-DNA与铝胶、蜂胶2种对照佐剂分别与犬瘟热病毒灭活疫苗配合，给犬接种疫苗前后用微量中和试验抽查血清中和抗体效价，根据抗体效价高低判断佐剂的免疫增强效果。结果表明，3种佐剂疫苗均能诱导产生特异性抗体，但组间抗体效价有显著差异（P＜0．01），CpG-DNA的免疫增强作用明显高于其它2种佐剂，CpG-DNA所诱导的抗体效价较蜂胶佐剂高5倍，较铝胶佐剂高7倍。