安徽省部分散养鸡场球虫感染情况的调查

为了解安徽省散养鸡群球虫感染及虫种分布情况,从安徽省多地散养鸡场采集鸡新鲜粪便829份,分别采用基于7种鸡球虫内转录间隔区1(ITS-1)基因的套式PCR进行检测,并对获得的样本进行测序和分析,以验证球虫虫种。结果显示,调查的所有散养鸡场均有球虫感染,堆型艾美耳球虫(E.acervulina)、巨型艾美耳球虫(E.maxima)和和缓艾美耳球虫(E.mitis)是调查最常见的虫种。混合感染很普遍,以E.acervulina+E.maxima,E.acervulina+E.mitis,E.maxima+E.mitis及E.acervulina+E.maxima+E.mitis混合感染较为常见。调查结果显示,安徽省散养鸡群中球虫感染率较高,应加强对散养鸡场球虫病的综合防控。     

宁夏部分地区奶牛球虫感染情况调查与遗传进化分析

为了解宁夏地区奶牛球虫的感染现状与流行特征,以宁夏吴忠、石嘴山、贺兰地区5个不同规模化奶牛场采集的犊牛腹泻粪便样品为材料,利用饱和NaCl溶液飘浮法和麦克马斯特虫卵计数法观察统计球虫形态、种类与感染情况;并提取球虫卵囊基因组DNA,进行18S rRNA基因的扩增和测序,用DNAstar软件对奶牛球虫18S rRNA基因进行序列分析,并构建系统发育树。结果显示,在随机抽查的179份样品中,牛球虫病的平均感染率为56.98%,感染率的范围为40.00%~80.84%,平均每g粪便虫卵数(OPG)为1 358。孢子化卵囊呈圆形或椭圆形,初步确定该地区优势虫种为邱氏艾美尔球虫、牛艾美尔球虫,其大小为(25.7~36.0)μm×(21.4~27.1)μm。序列分析表明,宁夏地区所分离的虫株与其他虫株亲缘关系较远,但本地虫株之间有较近的亲缘关系。该研究丰富了奶牛球虫流行病学材料,也为该病的防治研究奠定了基础。     

鸦胆子对鸡球虫卵囊孢子化率及子孢子的直接杀伤作用

自苦木科植物鸦胆子中提取了鸦胆子油(BJ-PE)、鸦胆子乙醇萃取物(BJ-EE)和鸦胆子水提物(BJ-WE),通过气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)检测了鸦胆子油的化学成分,并探讨了鸦胆子提取物对鸡球虫卵囊孢子化的影响及对子孢子的直接杀伤作用。结果显示,通过GC-MS法鉴定出鸦胆子油中含有32种化合物,主要为脂肪酸、脂肪醇类化合物及少量芳香族化合物。鸡球虫卵囊经BJ-EE、BJ-WE和Bruceine-D处理后,未孢子化率升高,其中8g/L BJ-WE处理组中未孢子化卵囊的数量显著高于对照组(P0.05)。子孢子经BJ-EE和Bruceine-D处理后,数量显著减少,形态发生明显变化,表现出变短、变圆的趋势。透射电镜观察发现,子孢子或萎缩成小球,外膜轮廓模糊,淀粉粒减少;或细胞膜破裂,胞内细胞器排列混乱;或呈现哑铃型,结构扭曲。综上所述,鸦胆子提取物对鸡球虫卵囊的孢子化具有一定的抑制作用,对子孢子具有较强的直接杀伤作用,为抗球虫药物的研发提供了新选择。     

E.tenella河北株重组IL-2-EtMIC-2 DNA疫苗的构建及保护力分析

为了构建E.tenella河北株重组IL-2-EtMIC-2DNA疫苗,并确定其抗球虫效力。采用RT-PCR方法分别克隆出鸡IL-2和E.tenella河北株EtMIC-2基因,并连接到pMD18-T载体上进行测序;将目的基因克隆到pcDNA3.0载体,构建重组质粒pcDNA3.0-IL-2-EtMIC-2,并转染293T细胞,用Western blot方法验证表达。将构建的重组IL-2-EtMIC-2DNA疫苗以50,100,150μg/只的剂量分别在14,21日龄胸肌注射免疫试验鸡,除阴性对照组外,28日龄时经口灌服孢子化E.tenella卵囊4×10~4个,研究其对E.tenella感染后的免疫保护效果。结果表明:成功构建了重组质粒pcDNA3.0-IL-2-EtMIC-2,且能在293T细胞中表达出融合蛋白;3个免疫组的ACI比阳性对照组分别提高了97.63%,127.02%和129.81%,其中免疫剂量为100,150μg时,ACI均达160以上,具有良好的免疫保护效果。     

河南省猪等孢球虫的分子变异规律研究

[目的]掌握河南省猪等孢球虫的分子变异规律。[方法]从河南省豫东、豫南、豫西、豫北及豫中地区的部分规模化猪场采集粪便样品,进行猪球虫卵囊的分离与纯化;从分离到的8株猪球虫分离株中提取核酸并进行测序,并与猪等孢球虫扩增株基因序列及其他相关原虫基因序列进行比对。[结果]河南省不同地区的8个猪球虫株均为猪等孢球虫,并且没有明显遗传差异。I.suis与其他7种原虫差异较大,不属于同一个生物型,同一种动物所感染的不同种类原虫之间的同源性较低。[结论]该研究结果可为有效预防和控制仔猪球虫病提供科学依据。     

鸡球虫体外培养模型研究进展

鸡球虫病对养鸡业危害十分严重,由于抗球虫药物的使用甚至滥用,鸡球虫的抗药性日趋广泛而严峻。为了研究鸡球虫入侵机制以及快速高通量筛选抗球虫制剂的需要,鸡球虫的体外培养技术从20世纪70年代初至今已历经近50年,研究取得了一定的进展,逐步形成了一整套比较完备的体外培养技术体系。论文主要就鸡球虫的原代细胞培养模型、传代细胞培养模型和鸡胚培养模型在建立和应用方面进行详细阐述,为研究鸡球虫相关工作提供参考。     

如何防控鸡群腹泻

腹泻是鸡群较为常见的肠道疾病。在日常生产中应随时监测鸡群粪便状况,一旦发现腹泻立即查找原因,尽一切办法控制腹泻病的发生。     

巨型艾美耳球虫偏菱形样蛋白EmRP免疫原性分析

在前期研究中,从巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)cDNA文库中筛选到了免疫保护性抗原偏菱形样蛋白EmRP,本研究为揭示该抗原的免疫保护机理,进一步检测了其免疫原性。以E.maxima卵囊cDNA为模板,用RT-PCR技术扩增EmRP,并构建真核表达质粒pVAX1-EmRP,将其经腿部肌肉注射2周龄的雏鸡,3周龄加强免疫。分别于首次免疫后和加强免疫后1周,采集血清,用ELISA方法检测血清特异性IgG水平,用荧光定量PCR方法(qPCR)检测细胞因子水平,用流式细胞术检测CD4^+T淋巴细胞和CD8^+T淋巴细胞的比例,分析EmRP诱导的免疫反应。序列分析表明,EmRP含有偏菱形样蛋白超家族成员保守区域,为非跨膜蛋白,分子量约为28.4 kD。真核表达质粒pVAX1-EmRP免疫鸡后,与对照组相比,鸡体IFN-γ、IL-2、IL-10和IL-17等细胞因子转录水平显著提升;CD8^+和CD4^+ T细胞比例显著提高,而血清特异性IgG水平与对照组差异不显著。结果表明,EmRP诱导的免疫保护作用主要是由其诱导的细胞免疫反应实现的,可以作为研制E.maxima新型疫苗的候选抗原。     

青海贵南某牧场犊牦牛腹泻病原的分子鉴定分析

青海省贵南县某牧场发生犊牦牛腹泻疾病,为快速确诊发病犊牦牛腹泻的致病原因,及时防控和治疗,采集犊牦牛腹泻样品15份,利用形态学方法和分子生物学方法进行鉴定与分析。结果显示:引发该牧场犊牦牛腹泻的病原是隐孢子虫(Cryptosporidium)和邱氏艾美耳球虫(Eimeria zurnii,E.zurnii)、牛艾美耳球虫(Eimeria bovi,E.bovi)、椭圆艾美耳球虫(Eimeria ellipsoidalis,E.ellipsoidalis)的混合感染,测序结果显示,瑞氏隐孢子虫(Cryptosporidium ryanae,C.ryanae)的18S rRNA基因与参考序列中国株CP031554/3/2/1同源性在99%以上,各个种球虫与引用参考序列的同源性均在98%以上。同时,遗传进化树显示:本次检测的C.ryanae与中国株C.ryanae 18S rRNA基因同源性关系近,聚成一大支;三种球虫分别与其相同种聚集在一支上。结果表明,该牧场犊牛腹泻是由隐孢子虫和球虫的混合感染造成的,该研究为犊牛腹泻的病原学研究和流行病学调查提供了参考数据,为寄生虫性病原的对症治疗、对因治疗和辅助支持治疗提供了帮助。     

中草药对兔球虫卵囊体外发育的影响

为探讨白头翁、常山、南瓜子、青蒿、柴胡、绞股蓝、秦皮、石榴皮、板蓝根、黄柏、槟榔、马齿苋等12味中草药水煎剂对兔球虫卵囊孢子化的影响,选用100%、50%、25%不同浓度的单味药物对未孢子化的兔球虫进行体外抑制试验,于第3、5d 分别计数。然后,洗去中药组的药液,加等量2.5%的重铬酸钾溶液,继续培养3天,计算每组卵囊的孢子化率。结果表明,所选用的12种中草药中白头翁、南瓜子、柴胡、绞股蓝的3个浓度均可以明显抑制卵囊的孢子化；而石榴皮、马齿苋、板蓝根仅100%浓度抑制球虫卵囊有一定效果；常山、青蒿、秦皮、黄柏、槟榔抑制球虫卵囊孢子化的作用效果不明显。洗去中药后,只有100%、50%浓度的绞股蓝有部分卵囊没有孢子化,白头翁、南瓜子、柴胡、马齿苋组兔球虫在重铬酸钾环境中仍可继续生长,这说明单味中药对卵囊只能抑制其发育而不能有效杀灭,即脱离开中药环境,兔球虫仍可继续发育。