滇陆猪Nramp1基因多态性对其在组织中表达的影响

[目的]明确自然抵抗相关巨噬细胞蛋白1基因(Nramp1)多态性对其在滇陆猪群体各组织中表达的影响,从分子遗传学角度阐述滇陆猪不同基因型个体对疫病免疫的遗传差异,为其抗病育种选育提供参考依据.[方法]采用PCR对27头滇陆猪Nramp1基因进行扩增,以DNASTAR 5.0进行序列比对分析及多态性(SNP)位点检测;同时利用实时荧光定量PCR检测Nramp1基因在滇陆猪各组织中的相对表达量,并运用SPSS 19.0分析Nramp1基因多态性对其在滇陆猪群体各组织中表达的影响.[结果]在滇陆猪Nramp1基因第5外显子、第5内含子和第6外显子上分别发现SNP1(T→C)、SNP2(A→G)和SNP3(G→A)等3个SNPs位点,都只存在2种基因型,且SNP1位点和SNP3位点在试验猪群体中属于低度多态[多态信息含量(PIC)/杂合度(He)<0.25)],SNP2位点属于中度多态(0.25肝脏>脾脏>心脏;此外,Nramp1基因在不同基因型滇陆猪群体中表现出的组织差异表达也不同,尤其是Nramp1基因在SNP2位点纯合群体肝脏中的相对表达量显著低于在杂合群体肝脏中的相对表达量,说明Nramp1基因多态性变异对其在滇陆猪组织中的表达有显著影响.[结论]Nramp1基因SNP位点变异能影响Nramp1基因在滇陆猪各组织中的表达变化,从而影响机体的免疫应答反应,其中SNP2位点可作为滇陆猪抗病育种的分子标记.     

胎牛血清在猪孤雌囊胚玻璃化冷冻后恢复培养中的作用研究

【目的】研究胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)在猪孤雌囊胚玻璃化冷冻后恢复培养中的作用。【方法】本试验以体外培养第5天的猪孤雌激活囊胚为材料,将新鲜和冷冻囊胚分别在含10% FBS(V/V)的胚胎培养液中继续培养48 h,即分为新鲜组(Fresh)、新鲜+FBS组(Fresh+FBS)、冷冻组(Vitrified)、冷冻+FBS组(Vitrified+FBS)。观察各组囊胚的扩张和孵化能力,检测胚胎的细胞膜损伤、凋亡细胞数目、总细胞数目、胞内活性氧(ROS)水平、线粒体活性以及发育相关基因的表达水平。【结果】与Fresh和Vitrified组相比,Fresh+FBS和Vitrified+FBS组的完全扩张率、孵化率和囊胚细胞总数均显著提高(P＜0.05),细胞膜损伤率和细胞凋亡率均显著降低(P＜0.05)。与Fresh组相比,Vitrified组ROS水平显著升高(P<0.05),Fresh+FBS和Vitrified+FBS组ROS水平均显著降低(P<0.05)。Vitrified+FBS组的线粒体活性显著高于Vitrified组(P<0.05)、显著低于Fresh+FBS组(P<0.05),与Fresh组无显著差异(P＞0.05)。相比于Fresh组,Vitrified组POU结构域与类转录因子1(POU5F1)表达水平显著上升(P＜0.05)、过氧化氢酶(CAT)表达水平显著下降(P＜0.05)。增殖细胞核抗原(PCNA)、DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)、超氧化物歧化酶1(SOD1)、BCL2相关X蛋白(BAX)/BCL2L1的表达水平在Fresh和Vitrified组之间均无显著性差异(P＞0.05)。Fresh+FBS和Vitrified+FBS组中PCNA、SOD1和CAT的表达水平显著高于Fresh和Vitrified组(P<0.05)。【结论】体外培养第5天的新鲜和冷冻猪孤雌囊胚在10% FBS中继续培养,其发育能力及胚胎质量均得到明显改善。     

芽孢杆菌B13的分离鉴定及其抑菌作用研究

试验旨在发掘有效的抗性菌以替代部分抗生素,并研究其抑菌作用,以大肠杆菌K88、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌为指示菌,采用凝胶打孔法从猪肠道内容物中筛选出一株对3种病原菌均具有抑菌活性的菌株,利用形态特征观察、革兰氏染色、16SrDNA序列同源性比对鉴定菌株,并对其抑菌条件和生长条件进行优化。结果显示,试验筛选到1株对大肠杆菌K88、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均具有较强抑制作用的菌株,经鉴定确定其为芽孢杆菌(Bacillus sp.),并命名为芽孢杆菌B13。此分离菌为革兰氏阳性菌,单生或成对生长。生长试验结果表明,该分离菌在pH为6.0,温度为34℃,以蔗糖为碳源、蛋白胨为氮源时,生长速度最快;在pH为7.0,温度为35℃,以麦芽糖为碳源、蛋白胨为氮源时,抗鼠伤寒沙门氏菌、黄色葡萄球菌和大肠杆菌K88活性最高。本试验通过对芽孢杆菌B13的特性进行研究发现,此菌株具有较好的抑菌效果,在抑菌方面具有良好的开发应用前景。     

复合益生菌对超早期断奶杜藏乳仔猪肠道微生物群落结构的影响

【目的】探究复合益生菌对超早期断奶（7 d）杜藏乳仔猪肠道微生物多样性及物种丰度的影响,以减轻乳仔猪断奶应激,为微生物饲料添加剂的研发提供科学依据。【方法】选取7日龄杜藏乳仔猪30头,随机分为3组,每组10头。对照组（ZM组）随母猪哺乳,试验I组（ZD组）哺喂代乳粉,试验II组（ZY组）哺喂代乳粉+复合益生菌,试验周期21 d。试验结束当天（28日龄）收集乳仔猪粪便,采用Illumina高通量测序分析粪便样品的菌群结构组成。【结果】Illumina高通量测序获得ZM组、ZY组和ZD组杜藏乳仔猪粪便样品共有OTU为327个,ZM组的特有OTU为247个,ZD组的特有OTU为84个,ZY组的特有OTU为96个。在门分类水平上,ZM组杜藏乳仔猪粪便样品中相对丰度最高的菌门为厚壁菌门,ZY组和ZD组为拟杆菌门;ZY组和ZD组的厚壁菌门/拟杆菌门比值分别为0.77和0.92,较ZM组（1.76）分别下降56.25%和47.73%。在属分类水平上,ZD组和ZY组杜藏乳仔猪粪便样品中的优势菌属为普氏菌属_9,ZM组则为乳杆菌属;ZD组杜藏乳仔猪粪便中布劳特氏菌属、肠球菌属和吉氏副拟杆菌属的相对丰度较其他2个处理组显著上升（P<0.05,下同）;而ZY组杜藏乳仔猪粪便中普雷沃氏菌科_NK3B31群、普雷沃氏菌科_UCG-003、厌氧弧菌属、罕见小球菌属、瘤胃菌科_NK4A214群、瘤胃菌科_UCG-005、未明确普雷沃氏菌科及Family_XIII_AD3011_group的相对丰度显著高于ZD组。【结论】在杜藏超早期断奶仔猪代乳粉中添加复合益生菌能有效提高其肠道菌群结构多样性,同时提高与碳水化合物代谢和产短链脂肪酸相关菌群的相对丰度,即复合益生菌具有潜在促进营养物质代谢和抗炎症的功能,可缩短消化道微生物区系由哺乳型向饲料型的转变历程。     

IGFs和MSTN基因表达量与种猪生长性状的相关性研究

【目的】探寻简洁、高效的种猪分子育种方法,检测和分析胰岛素样生长因子基因(IGF-1、IGF-2)和肌生成抑制素基因(MSTN)在大约克公猪、杜洛克公猪和长白公猪耳组织中的相对表达量。【方法】采用荧光定量PCR技术对目的基因在种猪耳组织中的相对表达量进行检测,并运用SPSS软件进行表达量数据分析及其与种猪生长性状的相关性分析。【结果】大约克公猪中IGF-1基因与MSTN基因表达量均显著高于IGF-2基因表达量(P0.05),杜洛克公猪中IGF-1基因与IGF-2基因表达量存在显著相关(P0.05),长白公猪中目的基因表达量两两之间存在显著差异(P0.05);IGF-1基因和MSTN基因在长白猪中相对表达量显著高于大约克猪(P0.05);IGF-1基因在长白公猪耳组织表达量与生长性状(饲料利用率、总耗料、日耗料和生长指数)存在显著相关(P0.05),MSTN基因在耳组织表达量与大约克公猪(体长、胸围、胸深、日增重、总耗料、日耗料和生长指数)、杜洛克公猪(体长、半腿臀围)、长白公猪(生长指数)生长性状呈显著相关(P0.05),联合分析显示目的基因在不同猪种耳组织中表达量与其生长性状均显著相关(P0.05)。【结论】IGF-1、IGF-2和MSTN基因可能在猪生长性状的形成过程中具有协同调控作用,为种猪分子育种提供了理论基础。     

孤雌激活猪囊胚玻璃化冷冻后氧化应激水平研究

本实验以孤雌激活猪扩张囊胚为对象,旨在研究胚胎玻璃化冷冻后的氧化应激水平。选择体外培养至第5天的扩张囊胚采用Cryotop法玻璃化冷冻保存,解冻后恢复培养48 h,分析囊胚扩张率、囊胚细胞数、胞内活性氧(ROS)、超氧化物阴离子(O~(2-))和谷胱甘肽(GSH)的水平及抗氧化酶相关基因(SOD1、SOD2、CAT、GPX4)的mRNA表达量。结果表明:相比于新鲜囊胚,冷冻囊胚在24 h和48 h的囊胚扩张率明显下降(P0.05),但囊胚细胞数无显著性变化(P0.05);冷冻囊胚内ROS和O~(2-)水平均显著高于新鲜囊胚(P0.05),GSH含量显著低于新鲜囊胚(P0.05);玻璃化冷冻导致囊胚内SOD2 mRNA表达水平升高、CAT和GPX4 mRNA表达水平降低,但不影响SOD1的mRNA表达水平。综上可见,玻璃化冷冻加重孤雌激活猪囊胚的氧化应激水平,表现为ROS和O~(2-)水平升高,GSH含量下降,部分抗氧化酶相关基因mRNA的表达水平异常。     

迪庆藏猪ADFP基因多态性及其组织表达特征

【目的】从分子遗传学角度分析不同基因型迪庆藏猪群体不同组织中ADFP基因的表达差异,为迪庆藏猪的选育工作提供参考依据。【方法】利用PCR扩增测序方法对113头迪庆藏猪ADFP基因进行扩增测序,利用DNA-STAR 5.0对序列进行比对分析及多态性位点（SNPs）检测;同时利用实时荧光定量PCR方法对迪庆藏猪不同组织中ADFP基因相对表达量进行检测,并运用SPSS 20.0分析ADFP基因多态性对迪庆藏猪群体不同组织中ADFP基因表达水平的影响。【结果】在迪庆藏猪ADFP基因外显子6上发现3个SNPs,分别为SNP1（C→T）、SNP2（C→T）和SNP3（T→ C）,其中SNP1和SNP2位点属于低度多态（PIC/He<0.25）,SNP3位点属于中度多态（0.25He<0.5）。迪庆藏猪不同组织中ADFP基因相对表达量存在显著差异（P<0.05,下同）,皮下脂肪中相对表达量最高,其次为肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、腿肌和背肌,心脏中相对表达量最少;另外,ADFP基因SNPs不同基因型迪庆藏猪群体中各组织的相对表达量也存在显著差异,尤其在SNP2位点杂合基因型群体肾脏中相对表达量显著高于纯合基因型群体肾脏中相对表达量,表明ADFP基因SNPs变异对迪庆藏猪组织中ADFP基因表达具有影响。【结论】ADFP基因SNPs变异对迪庆藏猪组织中ADFP基因会产生差异表达,进而影响机体脂肪沉积,ADFP基因可作为迪庆藏猪肌内脂肪沉积的候选基因。     

迪庆藏猪ADFP基因第一外显子多态性位点遗传分析

研究通过测序技术对迪庆藏猪脂肪分化蛋白基因(ADFP)部分启动子区域和外显子1进行了多态位点遗传分析.结果发现,迪庆藏猪在ADFP基因启动子区域存在2个SNPs,外显子1上存在6个SNPs;各SNPs均处于Hardy-Weinberg平衡,多态信息含量和杂合度均小于0.5.研究了解了迪庆藏猪ADFP基因的变异情况及群体...     

迪庆藏猪Nramp1基因第二内含子和第二外显子多态性位点遗传分析

以迪庆藏猪为研究对象,通过测序技术对Nramp1基因内含子2和外显子2进行多态性位点遗传分析。结果发现:迪庆藏猪在Nramp1基因内含子2上存在6个SNP位点,在外显子2上存在1个SNP;各SNPs均处于Hardy-Weinberg平衡,多态信息含量和杂合度均小于0.5。通过该研究了解了迪庆藏猪Nramp1基因的变异情况及群体遗传特征,为下一步开展抗病毒基因的遗传育种奠定了理论基础。