猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

为体外表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）糖基化囊膜蛋白GP5,以及制备其多克隆抗体,以PRRSV PC疫苗株RNA为模板,应用RT-PCR扩增GP5基因,并克隆至原核表达载体pET-32a（+）,构建重组表达载体pET-32a-GP5。经过酶切和测序鉴定后,将阳性重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,加入IPTG低温诱导表达。使用亲和层析法纯化PRRSV GP5蛋白。然后将纯化的蛋白免疫北京大耳白兔制备多克隆抗体,并进行酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光分析（IFA）。结果显示,表达的PRRSV GP5原核蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,相对分子质量大约30 kDa;制备的GP5蛋白多克隆抗体ELISA效价可达1:64 000;IFA检测显示,制备的多克隆抗体能够识别PRRSV。重组PRRSV GP5蛋白及其多克隆抗体的成功制备为PRRSV血清学检测方法的建立提供了良好的生物学材料。     

某3000头母猪场伪狂犬病成功转阴的案例及启示

自2011年新流行的猪伪狂犬病(Pseudorabies,PR)变异毒株暴发以来,PR给我国的养猪业带来了巨大的经济损失,是中国养猪业的主要传染病,猪场伪狂犬病野毒感染现象较为严重。阳性率>10%的母猪群全部做淘汰处理会严重影响猪场的正常生产经营,为保证猪场的均衡生产,该案例通过实验室检测确定猪群的感染时间点,及时淘汰阳性公猪,制定科学的免疫程序,采取严格的生物安全管理和强化生产管理,在PR阳性猪场培育出阴性的后备母猪和肥育猪,有效提高了猪群的生产成绩和获得了较好的生产效益。     

江苏省猪伪狂犬病流行病学调查及两种疫苗免疫效果评估

为了掌控江苏地区规模化猪场伪狂犬病野毒的感染情况及其流行性趋势,比较变异株猪伪狂犬病疫苗(C株)和Bartha-K61疫苗的免疫防控效果。于2017年5月份至2019年1月份对江苏地区59个规模场进行采样,通过间接ELISA方法检测猪群中的gE抗体来鉴定猪群是否被伪狂犬病野毒感染。另外,在一猪伪狂犬病阳性的规模猪场进行变异株猪伪狂犬病疫苗(C株)和Bartha-K61疫苗的防控效果的实验,通过检测猪伪狂犬病gE,gB抗体及中和抗体来判定猪群的猪伪狂犬病抗体保护水平。显示4 608份检测血样中,gE阳性1 681份,阳性率36%,母猪群gE阳性率46%,育肥猪群gE阳性率28%,59个猪场中育肥阶段gE阳性的猪场22个,占比37%。在其中一个商品猪群gE抗体100%阳性猪场进行2组猪伪狂犬病疫苗的实验,通过实验2组商品猪gE抗体18周龄至出栏前均为阴性,同时检测发现变异株疫苗(C株)对经典株和变异株的中和抗体效价均高于Bartha-K61疫苗。结果表明,江苏地区猪伪狂犬病感染压力较大,另外C株疫苗相对于进口的Bartha-K61株疫苗在本场的免疫效果更佳。     

口蹄疫疫苗免疫程序大数据监测分析

随着养殖业的快速发展,疾病防控备受广大养殖者的关注。对于口蹄疫病毒来讲,现阶段还没有一种有效的治疗药,只能通过疫苗接种提高易感动物的免疫力来控制口蹄疫的发生。对于养猪者来讲,一定要正确认识疫苗的作用,使用疫苗的种类不是越多越好,同一种疫苗的免疫次数不是越频繁越好,免疫的剂量也不是越大越好。在疫苗使用方面,一定要正确认识和了解疫苗、正确评估口蹄疫母源抗体的衰减情况、确定仔猪最佳免疫接种时间、科学合理地制定免疫程序,筛选出与本场相适应的疫苗类型进行免疫接种,这样才能起到事半功倍的效果。     

猪圆环病毒2型、3型流行病学调查及防控措施

猪圆环病毒(PCV)为圆环病毒科圆环病毒属成员是目前已知最小的哺乳动物病毒。目前已确认PCV有4种基因型PCV1、PCV2、PCV3、PCV4。PCV1不能引起猪发病,PCV2不仅可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征,且还与猪皮炎与肾病综合征(PDNS)、猪先天性震颤、母猪繁殖障碍、猪增生性和坏死性肺炎等疾病密切相关。通过流行病学调查发现PCV3感染多见于具有PDNS、繁殖障碍症状猪群,导致猪只心脏和多器官炎症。我国湖北、广东等多个省市猪群中也检测出PCV3。近年来,波兰和韩国相继报道存在PCV3感染猪群。作为一种被新发现的病原体,PCV3对猪致病性,现有商品化PCV2疫苗对其免疫效力等有待进一步研究,PCV3现已成为猪圆环病毒家族的又一重要新成员而引起大家重视。     

免疫塞内卡病毒灭活疫苗后豚鼠、家兔与猪的血清中和抗体相关性研究

为研究免疫塞内卡病毒(SVA)灭活疫苗后豚鼠、家兔与猪血清中和抗体的相关性,分别用0.25、0.5、1.0、2.0 mL的SVA灭活疫苗接种豚鼠和家兔,同时以2.0 mL的SVA灭活疫苗接种猪,分别于免疫前以及免疫后第7天、第14天、第21天、第28天采血液,测定各动物血清中SVA中和抗体,利用Microsoft Excel软件对所得结果进行整理并分析豚鼠与猪血清SVA中和抗体、家兔与猪血清SVA中和抗体之间的线性关系,进一步采用IBM SPSS Statistics 19软件对线性关系的显著性进行分析。结果显示,豚鼠和家兔均可产生SVA中和抗体,且免疫剂量越大,免疫动物产生的SVA中和抗体滴度越高。猪免疫后产生了SVA中和抗体,监测期内随着时间的延长,SVA中和抗体水平逐渐升高。当家兔和豚鼠免疫剂量为1.0 mL时,二者产生的SVA中和抗体与猪SVA中和抗体呈正相关,相关性分别为0.990和0.998,相关性极显著。研究表明,采用1.0 mL的剂量免疫豚鼠或家兔,能间接反应SVA灭活疫苗在猪体的SVA中和抗体水平。     

新城疫病毒同源重组现象的解析

近年来有报道显示NDV有些重组子代病毒基因组序列来自于多种基因型并发生多次基因重组现象,但学界对此存在争议。扬州大学的研究人员对此现象进行了分析验证,认为重组现象很可能是由于测序样品中含有不同基因型的NDV或是在测序过程中引入了实验室污染导致。     

鹅细小病毒检测技术的研究进展（续完）

上期回顾：随着现代生物学技术的发展,越来越多的新型诊断技术不断出现,也为更快速、敏感和特异性地诊断鹅细小病毒（Goose Parvovirus,GPV）感染奠定了基础,上文介绍了琼脂糖凝胶沉淀试验、免疫酶琼脂扩散试验、病毒中和试验、酶联免疫吸附试验、免疫荧光诊断法、反向间接血凝试验、精子凝集试验、胶乳凝集试验等8项血清学诊断技术。     

牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白的原核表达及其免疫原性

为研制检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的试剂盒,对IBRV gD蛋白主要功能域的表达及免疫原性进行研究。根据NCBI数据库录入的1型牛疱疹病毒(bovine herpesvirus type 1)gD蛋白序列(Gen Bank登录号为NC_001847)设计引物,用PCR扩增gD基因类免疫球蛋白结构域,构建原核表达载体pET32a–Δg D,转化大肠杆菌Rosseta(DE3)感受态细胞,并诱导重组蛋白表达。经SDS–PAGE分析,获得了相对分子质量约43 000的目的蛋白,该蛋白的相对分子质量与gD融合蛋白的理论相对分子质量一致。经镍柱纯化后,重组蛋白的质量浓度为2.5 mg/m L,纯度约为95%,Western Blot及ELISA鉴定结果显示该重组蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,可用于IBRV抗体检测试剂盒的开发。