浙西高海拔山地四季豆高效栽培技术

淳安县地处浙西山区,高海拔山地较多。近年来,为充分利用我县丰富的山地资源和高山夏季凉爽、昼夜温差大的特殊气候条件,我们在海拔500m以上的山地大力发展种植高山四季豆、小尖椒等蔬菜。在每年7～9月夏秋蔬菜供应淡季,为市场提供鲜嫩、优质四季豆等高山蔬菜,丰富了市场蔬菜品种,并取得了较好的经济效益,现已成为淳安发展山     

崇明白山羊主要血液生理指标的测定与分析

为促进崇明白山羊实验动物化应用和临床诊断提供数据,本研究采用全自动血细胞分析仪,对上海市崇明地区不同性别和生理状态的185只健康崇明白山羊19项主要血液生理指标进行测定。结果显示：后备母羊,妊娠母羊,哺乳母羊,成年母羊,成年公羊,断奶小母羊,断奶小公羊,哺乳小羊之间嗜酸性粒细胞计数(EO)指标差异显著(P<0.05),中性粒细胞计数(NEUT),嗜碱性粒细胞计数(BASO),嗜碱性粒细胞百分比(BASO%)3项指标差异不显著(P>0.05),其他15项指标差异均极显著(P<0.01)。说明不同性别和生理状态的崇明白山羊部分血液学指标波动范围有一定的差异。     

崇明白山羊血清生化指标的检测与分析

在相同饲养条件下,采用颈静脉采血方法研究了不同性别和生理阶段健康崇明白山羊的血清生化指标。结果表明:妊娠母羊的ALB、DBIL和UREA值最高,与其他6组羊差异显著;妊娠母羊的CHE和TP值最高,与成年母羊无显著差异,与其他5组羊差异显著;妊娠母羊的ALP最低,与哺乳母羊无显著差异,与其他5组羊差异显著;成年公羊、成年母羊和妊娠母羊的GGT、HBDH、LDH和Ca值较高,与其他4组羊差异显著;成年公羊的AST和ALT值最高,与成年母羊和妊娠母羊无显著差异,与其他4组羊差异显著;公羊的CK值高于母羊,且成年公羊与其他6组羊均无显著差异;成年母羊的AMY值最高,与成年公羊和妊娠母羊无显著差异,与其他4组羊差异显著;后备母羊的GLU值最低,与断奶小母羊和哺乳母羊无显著差异,与其他4组羊差异显著;后备母羊的CHOL值最低,与成年公羊和哺乳母羊无显著差异,与其他4组羊差异显著;成年公羊的TG值最高,与其他6组羊差异显著;后备母羊的Mg值最低,与其他6组羊差异显著;后备母羊的Fe和P值最低,与哺乳母羊无显著差异,与其他5组羊差异显著。该研究可为崇明白山羊饲养管理和疾病诊断提供参考。     

体细胞核移植技术生产猪植酸酶转基因胚胎的研究

为获得具有植酸酶腮腺特异性表达的猪转基因克隆胚胎,本研究使用植酸酶腮腺特异性表达的DNA质粒(包含腮腺分泌蛋白(parotid secretary protein,PSP)启动子与终止子序列、Neo筛选基因、绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因和高比活的植酸酶appA基因),采用脂质体转染和基因素418(G418)药物抗性筛选的方法获取稳转细胞系,并利用体细胞核移植技术获得植酸酶转基因胚胎。结果表明,本研究构建的DNA质粒可用于细胞筛选,且质粒越小,细胞的转染效率越高,14.89 kb的YM6552仅获得了7.1%的转染率,EGFP质粒则获得了43.4%的转染效率。在单克隆形成上,较小的pYN3600也获得了更高的单克隆形成数(25个),其中表达EGFP的单克隆有14个,植酸酶PCR阳性集落有11个,高于YM6552的单克隆数(19、8和6)。转基因细胞构建重构胚胎后,所有的胚胎均能表达绿色荧光蛋白,虽其体外发育能力有所下降,但差异不显著(P>0.05)。综上所述,本研究所采用的植酸酶质粒、细胞筛选方法和核移植技术可生产植酸酶重构胚。     

电激活前亚胺环己酮预处理对猪孤雌激活胚发育的影响

本研究的目的是检测电激活前亚胺环己酮(CHX)预处理对猪体外成熟卵母细胞孤雌激活及随后胚胎发育的影响。试验结果表明:去卵丘卵母细胞最佳电激活参数为120 V/mm,40μs,1DC。卵母细胞在含CHX(10mg/mL)的NCSU-23中处理10min获得的囊胚率最高,显著高于处理0、30、40min组。电激活前,用CHX预处理较短时间可提高体外成熟卵母细胞孤雌激活胚的发育能力。     

猪胚胎冷冻研究概况及提高冷冻效率的若干方法

猪胚胎冷冻保存技术的发展为家畜品种资源的保存及濒临动物的保护提供了新的技术途径。本文比较系统和完善的概述了近年来猪胚胎冷冻保存方法和提高冷冻效率的若干方法,探讨了现存的问题和对技术改进的展望。     

H19和IGF2R基因在体细胞克隆猪各组织中的甲基化状态

为了探求新生克隆猪可能的死亡原因以及是否存在不完全的DNA甲基化重编程,本试验运用亚硫酸氢盐测序法分别检测了H19基因和IGF2R基因差异甲基化区（DMR）在新生死亡克隆猪和同期正常猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中的甲基化状态。结果发现,H19基因DMR在克隆猪肺脏中表现为超甲基化,极显著高于正常猪（95．20％VS46．80％P〈0．01）,且10个测序克隆中存在2处连续的全甲基化CpG位点（4-9位、12-S17位）,而在其他组织中甲基化差异不显著（P〉0．05）;IGF2R基因DMR在肝脏中处于超甲基化状态,显著高于正常猪（80．00％V839．41％P〈0．05）,而在肺脏中为去甲基化状态,板显著低于正常猪（14．71％VS66．47％P〈0．01）,在其他组织差异不显著（P〉0．05）。结果说明,在死亡克隆猪中,H19基因DMR在肺脏和IGF2R基因在肝脏与肺脏中存在不完全的DNA甲基化重编程,这可能是导致克隆动物死亡的因素之一。     

猪体细胞克隆技术的优化

摘要: 用体细胞核移植方法生产的克隆猪诞生至今已经8年,虽然同胚胎细胞核移植相比,体细胞核移植技术难度大,成功率低（1~2%）,但近年来用体细胞核移植技术克隆猪有了较深入的研究,在体细胞核移植基本机理和关键技术上取得了一定的进展。本文结合本实验室近年来的相关研究工作,综述了用核移植方法生产体细胞克隆猪的技术关键和难点及应用情况,并对提高猪体细胞核移植效率的策略进行了分析。     

养猪生产中后代性别的预选——发展现状和应用前景

动物精子的性别可通过流式精子分选仪和DNA标识进行鉴定,而利用鉴定性别的精子(即性控精子)并借助人工授精技术或其它授精技术产生的后代,在过去5年中估计已多达30000个(其中大多数是母牛)。有关文献资料证明,能有效地区分X精子和Y精子的唯一标记物是精子染色体中的DNA。众所周知,目前世界各地采用的方法是Beltsville精子分选技术,该技术根据X精子群和Y精子群中DNA相对含量上的差异,用荧光染液(Hoechst33342染液)标记精子,随后利用流式细胞仪分选经荧光标记的精子,从而达到分离精子的目的。目前,X精子或Y精子正常的生产速度是每小时1500万个,该项技术已在家畜、实验动物和动物园动物中应用,如果将该技术应用在人上,在预选后代性别比例上可达90%～95%的成功率。因动物品种不同,性控精子在动物体内的授精部位也不相同。常规的人工授精技术、宫内授精技术、输卵管内授精技术、用于胚胎移植的体外受精(in-vitro fertilization,IVF)技术或子宫角深部授精技术均能有效地使动物怀孕,至于利用哪种技术进行性控精子的精则取决于动物品种。尽管所有动物都能获得高纯度的分选精子,但是在实际生产中利用低剂量精子还难以让母猪怀孕。子宫角深部授精技术每次授精0.5～1.00亿个性控精子已能产生可喜的效果:利用特制的输精管,输入常规人工授精所需精子量的五十分之一的性控精子,足以使动物怀孕。性控精子通过常规的授精技术能够被猪成功利用前,还需重新设计输精管,同时输精的次数和每次授精时精子数量也需作进一步的研究。分选精子的低温保存技术已被牛人工授精普遍采用。尽管已能利用冷冻的性别分选精子生产小猪,但是性别分选精子经冷冻和解冻处理后在常规生产中的应用还未达到最理想的效果。本文将讨论猪精子性别分选的最新研究成果及其发展趋势,并重点探讨将性别分选技术应用于养猪生产中必须对其进行必要的技术开发。