表达猪融合IL4/6和抗菌肽重组酵母的构建及对仔猪免疫和生长的影响

为了研发安全有效和增强动物免疫力的新生物制剂,本实验以共表达猪IL-4/6与猪抗菌肽基因和猪IL-2与IL-4/6基因的两种重组毕赤酵母菌进行高密度发酵,并拌入饲料饲喂45日龄仔猪(分组为A1、A2和C组)。实验结果表明,在0~42d内,A1和A2实验组较对照组仔猪体重显著增加(P0.05),CD~(8+)T细胞数量、特异性抗猪瘟和蓝耳病抗体显著增多(P0.05),实验组的TLR-2、4、7、NF-k B(p50)、Bcl-2、CD45和CD~(62)L等免疫相关基因表达水平也明显升高(P0.05)。此外,实验后期,A2组的前述免疫相关基因表达水平明显高于A1组和C组(P0.05)。这些结果证明,A1和A2组免疫生物制剂能较好地促进仔猪的生长,提高其先天和获得性免疫机能,A2制剂的免疫调节生物效应较优,有望进一步研发为新型安全的免疫生物制剂,为动物的疾病防控提供新技术支持。     

共表达猪IL-4/6与抗菌肽融合基因的重组酵母菌的生物活性及其对小鼠免疫增强作用研究

为开发高效安全经济的免疫调节剂,本研究构建了共表达猪IL-4/6和猪抗菌肽融合基因VRP的重组毕赤酵母SG46P。通过猪淋巴细胞增殖试验和抑菌试验检测其发酵上清液的生物学活性和抑菌活性,并用该重组毕赤酵母对30只21日龄雌性ICR小鼠进行灌胃接种。接种后,每周采集小鼠尾部静脉血进行免疫功能分析试验;并在第28 d用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行小鼠腹腔攻毒试验。结果显示:实验组SG46P的发酵上清液较对照组能显著刺激猪淋巴细胞的增殖(p0.05),且该发酵上清液具有明显的抑菌作用(p0.05)。接种重组毕赤酵母SG46P的小鼠的体质量有所增加(p0.05)且其外周血中白细胞数量、血红蛋白含量均显著高于对照组(p0.05);其血清中Ig G、Ig G1和Ig G2a抗体水平均较对照组显著增加(p0.05),其外周血中CD4+T和CD8+T淋巴细胞数量均显著高于对照组(p0.05);TLR4、TLR9、IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6、CD62L、IL-7、IL-23、CAMP和Crp4基因的转录水平均显著高于对照组(p0.05)。攻毒后,接种SG46P的小鼠的生存率显著高于对照组(p0.05)。结果表明:重组毕赤酵母SG46P不仅能够显著提高小鼠免疫基因的转录水平,有效提高动物的先天和获得性免疫水平,还可明显增强小鼠抗感染能力,这为研制高效安全经济的分子免疫调节剂和防治动物传染病开拓了新途径。     

优良牧草饲喂奶牛节粮代粮试验

1 试验目的 建植高产优质人工草地是发展奶牛业的物质基础.青绿饲料供给的好坏直接影响奶牛的新陈代谢和产奶性能的发挥,优质的青绿饲料可为奶牛的生长发育提供70%以上的营养需要.目前已在乌当奶牛场开发非耕地建植人工草地5000亩,年产优质牧草800余万公斤.优良牧草质量好,营养价值高,粗蛋白质含量为14.2%,比常规青饲料高1倍多,在此基础上,实施了大群泌乳牛饲喂优良牧草与饲喂常规青绿饲料比较试验,以期达到节粮代粮,降低成本的目的.     

猪白细胞介素4/6与牛融合抗菌肽共表达重组毕赤酵母的构建及其对小鼠的免疫协同效应

以2A自剪接技术构建猪白细胞介素4/6与牛融合抗菌肽(FBC)共表达重组毕赤酵母,为研究重组酵母对小鼠体内外的免疫协同效应,首先采用猪淋巴细胞增殖试验和抑菌试验研究重组毕赤酵母的体外生物学活性;再以发酵的重组酵母菌液进行小鼠灌胃试验,在试验的28d用致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行腹腔攻毒,每周采血检测小鼠的生长和免疫功能变化。体外试验结果显示,试验组比对照组显著刺激猪淋巴细胞增殖;明显抑制大肠杆菌标准菌、大肠杆菌耐药菌、金黄色葡萄球菌标准菌和金黄色葡萄球菌耐药菌的生长(P0.05)。小鼠灌胃试验结果表明,试验组小鼠外周血的白细胞、Th和Tc细胞含量显著多于对照组;试验组tlrs(tlr-1,4,6,9),il-1,il-2,il-4,il-6,il-7,il-15,il-23和cd62l基因的表达明显高于对照组;试验组血清中的IgG、IgG1和IgG2a的含量比对照组显著增加。此外,试验组小鼠的体质量比对照组明显增加。攻毒后试验组80%的小鼠存活,而对照组小鼠则有明显的炎症及临床症状,最后全部死于感染,这表明试验组的存活率显著高于对照组(P0.05)。白细胞介素4/6与牛融合抗菌肽共表达重组毕赤酵母能够有效提高小鼠免疫功能,为探索研制增强动物免疫机能的安全高效的免疫调节剂提供新途径。     

修饰壳聚糖包裹的猪IL-2和IL-4/6共表达对小鼠免疫效应的影响

为了进一步研究多种白细胞介素共同作用时发挥的生物学效应,本试验构建了共表达猪白细胞介素2和猪融合白细胞介素4/6基因的重组质粒,利用修饰壳聚糖进行分子包裹制备纳米颗粒,肌注小鼠,然后定时称重小鼠,并采血,检测CD4、CD8分子含量和细胞因子的表达水平,利用ELISA检测抗体水平。结果表明,共表达的猪IL-2和IL-4/6可有效促进猪淋巴母细胞的增殖,上调IL-2和IL-4基因的表达水平,增加Th和Tc细胞数量,也使体重有所增加。     

融合抗菌MAPWA和PGBD-2抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒体外增殖效应的研究

为探索融合抗菌肽MAPWA和PGBD-2在体外的抗病毒作用,特开展以下研究:用融合抗菌肽MAPWA和PGBD-2与Marc-145细胞和PRRSV共培养,以实时定量RT-PCR技术检洲Marc-145细胞中及培养液的PRRSV含量.结果发现:PRRSV感染Marc-145细胞96 h,实验组的RT-PCR检测数量均≤1.7,而阳性对照组的RT-PCR检测数量达到3.38.实验组数值显著低于阳性对照组.说明融合抗菌肽MAPWA和PGBD-2能够显著减少PRRSV在Marc-145细胞的复制量;证明融合抗菌肽MAPWA和PGBD-2具有明显的抗病毒效应,能显著地抑制病毒复制,减少其在靶细胞中的含量.提示:融合抗菌肽MAPWA和PGBD-2分子具有显著抑制PRRSV在靶细胞内复制的作用,为开发抗病毒新型生物饲料添加剂提供了重要的参考.     

藤蕹的栽培技术

藤蕹也叫水蕹 ,是空心菜的一种 ,属旋花科一年生蔓性蔬菜 ,食用部分为嫩茎叶 ,在高温多湿及肥料充足的条件下 ,生长特别肥嫩 ,具有繁殖能力强 ,供应市场时间长 ,产量高等特点 ,在抚州市从 5月份开始上市 ,一直可采摘到 9、1 0月份 ,深受抚州人民喜爱。根据作者调查 ,此种藤蕹属抚州特产 ,其它南方城市如福州、杭州、广州、南昌等地只有子蕹即用种子播种繁殖的空心菜 ,没有藤蕹。藤蕹与子蕹相比 ,更鲜嫩 ,一般抚州老百姓都不吃子蕹 ,而藤蕹几乎天天要吃 ,百吃不厌。据说有位抚州人在北京开了一个农贸公司 ,用保护地在北京种了许多水蕹 ,北京…     

融合抗菌肽MAPWA和PGBD-2对后备母猪PCV-2和PRRSV感染影响的初步观察

0前言 近年广泛流行的免疫抑制病,如猪呼吸与繁殖综合症（PRRS）和猪圆环病毒病（PCV－2）等对我国养猪业造成了极严重损害,猪群生产性能下降,母猪流产增多。特别是产房及保育仔猪大量发病及死亡,损失极为惨重。2008年及2010年下半年猪肉价格攀升,国内CPI指数不断提升,目前已被公认与猪只疫病暴发,死亡过多,供应失调...     

藏猪和长白猪对口蹄疫疫苗免疫应答特性的比较

本试验旨在比较藏猪和长白猪接种口蹄疫O型灭活疫苗后免疫应答特性的差异。分别用猪口蹄疫O型灭活疫苗免疫接种8日龄藏猪和长白猪,在免疫前和免疫后的6、8、12和16周分别采集抗凝血,采用血常规计数血液中免疫细胞的变化情况,ELISA法测定血清中抗猪口蹄疫O型病毒特异性抗体的含量,定量RT-PCR检测与免疫应答调控相关基因的表达水平。结果显示:藏猪的体液免疫应答水平和Th等免疫细胞数量显著高于长白猪,且TLR7、CCR7、CD62L和CD4基因的表达水平也明显升高,而长白猪IL-10的表达水平显著高于藏猪。     

β-内啡肽基因在小鼠体内表达的生物效应研究

本研究采用壳聚糖及其改性分子离子交联法包裹制备β-内啡肽基因重组质粒纳米颗粒,然后肌肉注射小鼠,另设口服重组酵母菌组,研究β-内啡肽基因在小鼠体内表达的生物效应。结果发现:肌注质粒与口服酵母菌均可促进小鼠生长,增加小鼠体重;外周血中CD4~+T、CD8~+T细胞数量以及小鼠血清Ig G含量均显著提高(P0.05),免疫相关基因的相对表达量也都显著提高(P0.05);试验组小鼠血清中的β-内啡肽含量较对照组明显增加(P0.05)。表明β-内啡肽基因重组质粒壳聚糖纳米颗粒能有效调节小鼠免疫反应,增强机体抗应激的能力。