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马鼻肺炎双重荧光定量PCR检测 方法的建立与应用 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】建立快速、准确检测马疱疹病毒 1 型(EHV1)和 4 型(EHV4)的双重荧光定量 PCR 检
测方法。【方法】以 EHV1、EHV4 的全基因组序列为基础,针对糖蛋白 B(gB)基因的保守序列,分别设计
EHV1 与 EHV4 特异性引物和探针,筛选引物,优化反应条件,分型检测马疱疹病毒(EHV1、EHV4)。【结果】
检测到 EHV1、EHV4、EIV、EAV、EVJ 和 EIAV 标准毒株,EHV1、EHV4 为阳性结果,其余病毒为阴性结果;
EHV1、EHV4 DNA 模板的最低检出限为 1.47×102 copies/μL;检测 64 份临床样本,阳性检出率为 14.06%,病
毒分离证实 100% 符合。【结论】双重荧光定量 PCR 检测方法可直接应用于检测并区分 EHV1、EHV4, 并可在
短时间内获得对 EHV1/EHV4 特异性及敏感性的检测结果。 相似文献
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流行性乙型脑炎是一种重要的人兽共患病毒病,成年动物和人往往呈隐性感染的带毒状态。为保障供港澳生猪的生产和卫生安全,本文以血净抑制试验调查了供港澳猪场人和猪的乙型脑炎血清抗体水平。结果各场猪群抗体阳性率分别达到57%、2.5%、39%、22%和93%。其中母猪群阳性率最高为87,%仔猪41%。各猪群平均抗体水平为1:38、1:15、1:39、1:20和1:107。同时,这些猪场的饲养人员均有乙型脑炎病毒感染,抗体阳性率分别为20%、11%、3.5%和24,%抗体水平为1:22、1:109、1:16。结果提出排除一些猪场已对猪只和人员进行乙脑疫苗接种的因素,在猪场中以善通存氏乙脑流行。加强乙型脑炎免疫接种的覆盖率,猪群采用细小-乙脑二联疫苗接种,人类特别是儿童要100%免疫接种乙脑疫苗,才能避免人猪间乙脑的相互传播。 相似文献
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利用重组抗原建立间接酶联免疫吸附试验检测猪传染性胃肠炎血清抗体 总被引:7,自引:0,他引:7
随着分子生物学的发展 ,重组抗原用于疾病的血清学诊断的报道越来越多 [3 ] 。周仲芳等报道了采用杆状病毒表达系统生产的TGE病毒纤突蛋白 ( S)建立了一种竞争ELISA检测猪 TGE血清抗体 ,获得了较为理想的特异性和准确性。本文报道了采用同样的重组抗原建立了一种间接 ELISA用于TGE血清抗体的检测 ,同时由于在结果判定中采用终点滴度技术 ( End- titer) ,使得检测结果的判定更直观和迅速。1 材料与方法1.1 EL ISA操作方法 本研究中的抗原制备和包被方法见周仲芳等 ( 1997)的报道。ELISA板经抗原包被后可立即使用 ,也可保存… 相似文献
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利用蔗糖密度梯度超速离心浓缩纯化vero细胞培养SA14-14-2株猪乙脑病毒灭活抗原,进行胶体金点样和配比优化,制备GICA试纸条.结果最优浓缩样品配比构成是PBS 1.32 mL、灭活病毒液24 mL、30%蔗糖2.6 mL、55%蔗糖6.6 mL;用于胶体金偶联的抗原浓度约2.80 mg/mL.试纸条能明显区别阴阳性血清,阳性血清稀释1∶256能显示条带,优化后灵敏度达到1∶1024.与猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、Ⅱ型圆环病毒病阳性血清不发生交叉反应.用于检测2群免疫母猪抗体阳性率分别为86%和100%,说明疫苗免疫效果较好;检测未经免疫肉猪出现阳性结果,分别达到38%和24%,说明存在病毒隐形感染. 相似文献
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应用荧光RT-PCR技术检测口蹄疫病毒 总被引:4,自引:0,他引:4
1 材料与方法1.1 试剂 裂解液 ,DEPC水、carrier RNA、RT-PCR反应液 ,RT- PCR酶颗粒 (Beads)、Taq酶。均由深圳匹基生物工程股份有限公司提供。1. 2 引物设计 上游引物 :5′- TCCACTAGC-GAGTGTTAGTAGC- 3′;下游引物 :5′- GCCTGT-CACCAGTGTTTGAGTA- 3′。1.3 试验材料 进口冻肉、冻猪脚、冻猪耳等。1.4 仪器 荧光 PCR仪 ,L ight cycler(Roche公司生产 )。1.5 操作方法1.5 .1 样本处理 (1)取 n个 1.5 ml灭菌离心管 (n=样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照 ) ,作好标记。 (2 )在各离心管中加入 6 0… 相似文献
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蓝舌病 (Bluetongue,BLU)是由呼肠弧病毒科环状病毒属蓝舌病病毒引起的羊等反刍动物的严重传染病。该病传播快 ,发病率和死亡率都较高 ,因而对畜牧业的发展有着极大的影响 ,进出境动物检疫中将其列为一类传染病。蓝舌病血清抗体的检验方法通常较简便 ,如琼脂扩散 (AGID)、补体结合试验(CFT)及竟争性酶联免疫吸附试验 (C- ELISA)等 ,然而对其病毒的直接检测 ,通常比较复杂 ,并要较长时间 ,一般很难在 45天规定的隔离检疫期内完成任务 ,不符合口岸动物检疫工作快速、准确、简便的基本要求。为了改变这种状况 ,我们采用了一种新程序 ,引… 相似文献
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