猪瘟野毒感染抗体阻断ELISA检测方法的建立与初步评价

以猪瘟野毒E2蛋白为包被抗原、辣根过氧化物酶标记的猪瘟野毒单抗作为酶标抗体,建立检测猪瘟野毒抗体的阻断ELISA方法。猪瘟野毒E2最适包被浓度为0.03μg/mL,待检血清最适稀释度为1∶4,酶标猪瘟野毒单抗稀释度为1∶1 000。用建立的阻断ELISA方法检测369份临床阴性血清,计算阻断率,确定临界值,阻断率>40%为猪瘟野毒抗体阳性,阻断率≤40%为猪瘟野毒抗体阴性。用建立的ELISA方法检测84份血清,其中78份为免疫猪瘟疫苗的血清,6份为猪瘟病毒感染血清。结果显示,78份免疫血清均检测为猪瘟野毒抗体阴性,6份猪瘟感染血清均检测为猪瘟野毒抗体阳性。因此可初步判定该方法可用于鉴别诊断猪瘟病毒自然感染动物和C株疫苗免疫动物的血清抗体,并为临床检测猪瘟野毒抗体提供便捷、快速,精准的检测工具,对猪瘟的临床诊断、预防以及猪瘟净化工作具有非常重要的参考意义。     

传染性法氏囊病的控制策略

我国蛋种鸡企业正处于禽流感刚刚过去、饲料价格上涨、企业发展前景不明朗和人们普遍比较迷茫这一特殊时期,面对这种状况,中国最大的蛋种鸡企业———华都峪口禽业有限公司、在行业使命的前沿,授危难之际,举办了“中国蛋种鸡提升竞争力、应对危机”首届高层技术论坛活动,邀请行业专家作了蛋鸡管理、疾病控制和现代孵化技术等专题报告,本期从技术层面出发,把部分专家的报告内容摘要展示于读者,希望会带来帮助和启发。     

H7N2禽流感病毒分离株血凝素蛋白全基因的序列分析

为进一步分析H7N2禽流感病毒（AIV）分离株血凝素（HA）基因的特性,参照已发表序列设计了1对引物,采用RT-PCR获得了1条约1.7 kb的DNA片段,测序后进行了同源性比较、HA基因系统发育进化树分析和氨基酸编码分析.结果表明,所测的2个分离株的HA基因全长1 664 bp,编码除信号肽以外的HA蛋白的全部544个氨基酸,其中包括HA1的323个氨基酸,HA2的221个氨基酸.2个分离株HA基因核苷酸序列的同源性为99.4%;与GenBank中AIV标准株A/Afri.Star./Eng-Q/983/79（H7N1）的同源性最高,分别为99.4%和99.0%;与美国A/Chicken/NewYork/13142-5/94（H7N2）株同源性很低（仅65.0%）,而与以色列、意大利H7N2 AIV的同源性较高（为96%～97%）;2个分离株在HA基因进化树中均处于H7亚型AIV的欧亚群系分支内.推导氨基酸的序列分析表明,其HA蛋白裂解位点的氨基酸序列为-GR-GLF-,仅包含1个碱性氨基酸（R-）残基,符合低致病力AIV的基因特征.     

牛副流感病毒3型毒株的分离鉴定及基因组遗传变异分析

从新疆地区某牛场出现发热、咳嗽等症状的多例病牛的肺组织中分离得到3株牛副流感病毒3型,分别命名为XJ03、XJ022、XJ023,对其中两株病毒XJ03和XJ023的基因组进行序列测定,测序结果显示,XJ03和XJ023毒株基因组全长分别为15474 bp(Gen Bank登录号为KU198929)和15475 bp,其核苷酸同源性为99.89%。同代表性的牛副流感病毒基因组比对发现,与我国的山东毒株SD0835同源性最高为99.3%,均属C型BPIV。在C型毒株中,与南韩12Q061分离株(C型)同源性最低为97.5%。F、N、HN、L、P、M蛋白基因氨基酸序列分析显示,与SD0835毒株相应序列对比,同源性分别为99.63%、92.15%、99.48%、99.28%、98.50%和100%,部分氨基酸发生了新的变异。试验结果将为今后更好地开展BPIV3防控奠定基础。     

狂犬病病毒抗体纳米荧光检测试纸条的临床应用

为评价狂犬病病毒抗体纳米荧光试纸条的性能,使用该试纸条,对A、B、C 3组不同免疫阶段犬血清进行抗体检测,并对122份临床犬血清,同时使用试纸条、SYNBIOTICS试剂盒、北京世纪元亨ELISA试剂盒进行抗体检测。结果显示:未免疫狂犬病疫苗的A组,抗体水平极低;免疫1个月后的B组,抗体水平迅速升高;免疫2个月后的C组,抗体水平出现回落。试纸条与SYNBIOTICS试剂盒的阳性符合率为92%,阴性符合率为91.67%,总符合率为90.17%;与北京世纪元亨试剂盒的阳性符合率为96.16%,阴性符合率为97.15%,总符合率为96.73%。结果表明,试纸条可以真实反映不同免疫阶段的狂犬病病毒抗体变化,与国内外商品试剂盒符合率高,可应用于狂犬病疫苗免疫后的临床效果评估,指导临床建立合理的免疫策略。     

猪瘟抗体监测及免疫效果分析

 对 9个规模化养猪场 15 18份血清进行了猪瘟免疫抗体检测。 7日龄、2 0日龄和 4 0日龄仔猪无免疫保护力 (血凝抗体效价低于 1∶16 ,下同 )的比例分别为 0、4 .8%和 19.7% ;而抗体效价≥ 1∶12 8的比例分别为 87.8%、74 .6 %和 35 .2 %。乳前免疫后 2 0、30、4 0、5 0和 6 0日龄无免疫保护力仔猪的比例分别为 18.4 %、8.4 %、9.8%、10 .0 %和 15 .4 % ,而抗体效价≥ 1∶8的比例分别由 4 0日龄的 4 1.4 %降至 5 0日龄的 15 .0 %和 6 0日龄的 3.8%。所测 398份 2 5日龄仔猪母源抗体效价均≥1 16 ,但抗体效价≥ 1 12 8的比例由 2 0日龄的 92 .8%降至 2 5日龄的 6 2 .5 %。提示猪群中存在不同比例的免疫不合格和低抗体水平的猪 ,可能是猪场发生猪瘟的主要原因     

爱比菌素浇泼剂配方的研究

 爱比菌素（abamectin）是一类新型的抗寄生虫药。本文以1，2-丙二醇、乙酸乙酯、乙醇、二甲基亚砜、氮酮和水等按不同比例配制成10个不同的爱比菌素浇泼剂，并用体外透皮率测定法筛选出了爱比菌素浇泼剂之最佳配方。该配方由适量的乙酸乙酯、丙二醇和氮酮组成，含0.5%爱比菌素，其离体小鼠皮肤透皮率为14.09ng·h#+（-1）·mm#+（-2）。     

规模化养殖场猪伪狂犬病的诊断

正猪伪狂犬病常引起妊娠母猪流产、产死胎、木乃伊胎以及新生仔猪的呼吸道损伤和神经症状。仔猪的发病率最高可达100%,给我国养猪业造成了巨大的损失。1发病情况及临床症状天津某猪场有基础母猪600头,2014年1月份开始出现流产,在20天的时间里有48头母猪出现流产或产死胎。此外,还有3头母猪早产(107天),母猪体温38.3℃~38.7℃,没有其他异常表现。新生仔猪有少数出现拉稀、侧卧、四肢划动、吐白沫等症状,2~3天内死亡。对发病仔猪剖检发现肺有严重的出血性坏死,脾、肾也有瘀血和坏死。     

牛γ干扰素在CHO细胞中的表达和鉴定

为获得高活性的牛γ干扰素(BoIFN-γ),依据GenBank中已发表的BoIFN-γ基因序列(M29867)进行人工合成,应用PCR方法扩增该基因,将其插入pIRESneo构建真核表达质粒,转染到CHO细胞中,用SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白的表达,并用牛γ干扰素检测试剂盒鉴定其反应原性.结果:成功的构建了pIRES-BoIFN-γ真核表达载体,实现了其在CHO细胞上的表达.表达产物经γ-干扰素检测试剂盒检测具有良好的反应原性,为研究BoIFN-γ结构与生物学功能以及建立牛结核BoIFN-γ检测法奠定了基础.