猪阴沟肠杆菌16SrRNA甲基化酶耐药基因分析

 【目的】分析猪阴沟肠杆菌GZL41B中4种质粒介导的16SrRNA甲基化酶耐药基因及其水平传播方式;【方法】采用PCR及序列分析方法检测鉴定猪阴沟肠杆菌中16SrRNA甲基化酶耐药基因。以大肠杆菌E.coli Rif+488(耐利福平)为受体菌进行接合试验研究16SrRNA甲基化酶耐药基因的水平传播方式。用微量稀释法测定原菌株及其接合子对18种抗菌药物的敏感性。用PCR及序列测定法分析比较来自同一猪腹泻直肠拭子阴沟肠杆菌GZL41B和大肠杆菌GZL41H的侧翼序列并对172株动物源大肠杆菌中16SrRNA甲基化酶耐药基因流行情况进行调查。【结果】从阴沟杆菌中成功扩增出目的片段,该片段经限制性内切酶HindⅢ酶切后,出现与预期的531 bp和194 bp相符的两段片段,序列测定结果证实该基因为rmtB,GenBank登录号为EF017943。以E.coli Rif+488(耐利福平)为受体菌,成功地获得了接合子,该接合子经鉴定为大肠杆菌。原菌株和接合子对卡那霉素、阿米卡星、妥布霉素、西梭米星、萘替米星、庆大霉素等4,6-二脱氧链霉胺类高度耐药,其MIC均≥256 μg?mL-1。大肠杆菌GZL41H中,rmtB的上游为Tn3转座子的部分序列,下游为肠炎沙门氏菌基因岛SGI1上融合酶编码基因groEL/intI1的部分序列orf1,而来源相同的阴沟肠杆菌GZL41B未扩增到与大肠杆菌GZL41H相同的侧翼序列。172株动物源大肠杆菌中,25株菌(15%)检出rmtB,1株菌(0.6%)检出armA;【结论】16SrRNA甲基化酶耐药基因rmtB首次出现在猪阴沟肠杆菌中,该基因介导猪阴沟肠杆菌对4,6-二脱氧链霉胺类氨基糖苷抗生素的高度耐药,并能通过接合方式在不同种属细菌间进行传播。rmtB在阴沟肠杆菌和大肠杆菌中传播的遗传背景存在差异。动物源大肠杆菌中rmtB广泛流行。     

诺达一号、二号复方中药制剂对人工感染鸡球虫病防治作用观察

鸡球虫病是由艾美耳科艾美耳属的球虫寄生于鸡肠上皮细胞内所引起的一种危害极为严重的全球性寄生虫病,主要侵害10-40日龄的雏鸡。集约化养鸡场成为球虫病爆发的最适宜场所,其发病率30％-100％,死亡率20％-80％,甚至更高,严重威胁着养鸡业的发展。目前,临床上主要依靠抗球虫药物来控制该病的发生,但药物的毒性、动物性食品残留和耐药性等不良反应限制了其应用。中药作为天然药物,在抗鸡球虫病方面有其独特的优点,如价格低廉、来源广、抗药性和药物残留少、对动物体兼有药物性与营养性的双重作用等,成为很多学者研究球虫病防治的一个热点。为探讨“诺达一号”和“诺达二号”复方中药制剂对人工感染鸡球虫病的防治效果,进行了以下试验。     

国家兽药风险评估体系、兽药评价与再评价体系以及兽药残留监控体系建设

对国内外兽药风险评估、评价与再评价以及兽药残留监控的现状进行了综述;探讨了兽药与食品安全的关系,概述了兽药风险评估、评价与再评价以及兽药残留监控的主要内容和方法;提出了开展三个体系建设的主要内容和建议.     

国内外兽药发展趋势和新兽药研发思路

一 企业生产规模 2007年国外市场兽药销售总额为179亿美元,增长了4．7％,2007年我国兽药企业总产值为195．97亿元,销售收入185．08亿元,实现利税23．54亿元。     

国内外兽药研发动向与未来的思考

本人查阅了近年来的最新资料,对未来兽药的发展趋势提出个人的一些认识和思考,供动物保健品业界的同道们参考。1国外动物保健品的研发、市场趋势和特点1.1最近五年来的研发和市场趋势1.1.1全球保健品市场总额的趋势     

16S rRNA甲基化酶rmtB在猪肠道菌中的传播方式分析

为研究16S rRNA甲基化酶rmtB在猪肠道菌中的传播方式,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分别对来源于A、B猪场的48株rmtB阳性大肠埃希氏菌进行基因分型;用膜接合试验研究rmtB基因的水平传播方式;用微量稀释法对rmtB阳性菌及其接合子进行药敏试验。有45株rmtB阳性大肠埃希氏菌(45/48)能进行PFGE分型,可分为28种不同的PFGE基因型。其中来源于A猪场的20株菌可分为12种基因型,来源于B猪场的25株菌可分为16种基因型;46株rmtB阳性菌可以通过接合试验将rmtB基因及其介导的耐药性传递给受体菌E.coliC600和E.coli488 Rifr,接合频率从4.6×10-13~3.0×10-6不等,接合子对卡那霉素、阿米卡星、妥布霉素、西梭米星、萘替米星、庆大霉素6种二脱氧链霉胺类抗生素均高度耐药(MIC≥512μg/mL)。结果表明,rmtB基因位于接合性质粒上,该基因在两猪场的大肠埃希氏菌中既存在克隆传播,又存在水平传播,以水平传播为主。     

鸡马杜霉素急性中毒及其脂质过氧化关系的研究

本文在实验条件下人工诱发鸡马杜霉素急性中毒，观察中毒症状及病理变化，测定受损靶器官的脂质过氧化物的含量及相关酶的活性，以及肝细胞色素Ｐ－４５０的含量。实验结果表明：鸡马杜霉素急性中毒的主要临床症状是腹泻、腿无力或麻痹；肉眼病变是全身性充血、淤血及少数组织出血；显微镜检病变是肝脏、心肌及腿肌出血与变性；肝脏的脂质过氧化物的含量及过氧化氢酶的活性显著增加；肝Ｐ－４５０的含量显著增加；但是心肌与腿肌的脂     

噻孢霉素钠在猪体内的代谢动力学分析

本研究对噻孢霉素钠在猪体内的代谢动力学特征进行了分析。7头猪平均体重41.86公斤,按每公斤体重静脉注射噻孢霉素钠15mg。采用HPLC方法测定血药浓度,流动相一甲醇∶醋酸∶0.005M磷酸氢二钾(25∶0.2∶74.8);流速5ml/min;紫外检测器波长254nm。用开放二室模型计算动力学参数,T_(1/(2β))为10.88分钟,Vd为23.27ml/kg,Cl_B为1.5289ml/kg·min。本文还对不同测定方法所得的半衰期有较大差异作了讨论。     

体外耐氟喹诺酮类鸡毒霉形体gyrA基因的突变特征分析

按常规方法提取了鸡毒霉形体参考株S6-10、疫苗株F14-8及在氟喹诺酮类药物压力下筛选出来的耐药株的基因组DNA，扩增了各菌株DNA旋转酶gyrA基因片段，并进行了克隆、测序，利用DNAsis软件对测序结果进行分析。结果表明，S6-10和F14-8在恩诺沙星或环丙沙星压力下均筛选出不同程度的耐药茵，而且恩诺沙星致鸡毒霉形体发生耐药性突变的几率高于环丙沙星，S6-10株耐药突变频率高于F14-8；S6-10筛选出来的耐药菌株发生突变的位置在DNA旋转酶GyrA亚基的第83位(相对于大肠埃希氏茵GyrA亚基中的位置，以下同)和第87位上，取代模式分别为Ser→Ile、Glu→Gln，另外1株高水平耐药株(Se10，MIC≥128)在第103位也发生了氨基酸取代(Ile→Val)；F14-8筛选出来的耐药菌株只在DNA旋转酶GyrA亚基的第87位发生了突变(Glu→Gly／Gln)。     

相同耐药谱的11株大肠杆菌的脉冲场电泳分型研究

为了了解同一猪场不同来源具相同耐药谱的11株大肠杆菌之间的同源性,以探讨其耐药流行机制,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对同一猪场不同来源具相同耐药谱的大肠杆菌做染色体DNA分型.结果发现分别来自小猪和环境的2株大肠杆菌通过PFGE分型,属于同一个亚型.初步认为不同来源的大肠杆菌来自不同克隆系,同时在动物环境之间可能存在着耐药性的克隆传播.结果表明,PFGE可作为耐药性流行病学调查的一种研究方法.