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1.
禽流感病毒HA基因的分子克隆和测序   总被引:14,自引:0,他引:14  
血凝素(HA)是禽流感病毒诱导机体产生保护性体液免疫反应的主要靶抗原。本研究的目的是克隆HA基因,为以后的表达及基因工程疫苗的研制奠定基础。收获接毒鸡胚的尿囊液,超速离心沉淀病毒,采用异硫氰酸胍法提取病毒RNA,利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增出禽流感病毒(H9N2亚型)血凝素的cDNA。PCR产物加A尾后,用玻璃奶试剂盒回收纯化目的片段,通过T-A连接将加尾PCR产物连接到线状克隆载体pGEM-T easy vector,转化DH5α感受态细胞,在含氨苄青霉素的LB平板上筛选阳性克隆,提取质粒,经酶切鉴定,对目的片段进行测序,结果获得了HA基因全长,约1.7kb,与已知序列进行同源性比较,同源性最高的可达97%,所克隆的基因为禽流感HA基因工程疫苗的研究奠定了基础。  相似文献   
2.
提取实验室保存禽副粘病毒-2标准毒株Yucaipa株和3株分离毒株F4、F6、F8株的RNA,经RT—PCR,获得4株毒株的HN基因,同时测得F基因与HN基因之间的序列。序列分析结果表明,HN基因的ORF全长为1743 nt,编码一个由580个氨基酸组成的蛋白。运用DNAMAN软件分析,4株毒株与GenBank上已发表毒株的HN基因的核苷酸和氨基酸之间的同源性相比,同源率分别为99.89%和99.69%。分析F基因与HN基因间序列发现两基因间序列与副粘病毒科其他病毒的基因间序列相似,含有基因起始信号和终止信号,但不含3个碱基的连接序列。通过序列分析,在分子水平上进一步证实分离于同一批进口七彩文鸟的F4、F6株是抗原性存在差异的两个毒株。毒株间的血清学关系与分子水平的核苷酸序列、氨基酸序列的比较关系一致。  相似文献   
3.
本试验根据已发表的新城疫病毒(NDV)的F基因序列设计特异性引物,对山东地区两株NDV流行株的F基因进行了克隆与序列分析,分别扩增到了A株和B株F蛋白编码区全基因,ORF全长均为1662bp。应用分子生物学软件对A株和B株的核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了分析。两毒株核苷酸序列同源率为87%,都编码553个氨基酸,氨基酸同源率为91%。与部分已发表的毒株相比:A株与~株同源率最高,为98%,B株与JS鹅株同源率最高,为98%。抗原位点、糖基化位点的数量和位置高度保守,半胱氨酸残基数量不同,A株13个,B株12个。分离株都具有3个强疏水区。A株、B株裂解区氨基酸序列符合强毒株特点,二者均为强毒株。从基因分型情况看,A株属于基因Ⅸ,B株属于基因Ⅶ。A株与F48E9株遗传距离最近,B株与JS鹅株遗传距离最近。  相似文献   
4.
伴随着改革开放的不断深入,国外一些大型演艺动物团体的演艺动物来我国演出的机会也逐年增多,然而世界各地各种动物疫情的暴发与流行却接连不断,英国的疯牛病、口蹄疫、美国的西尼罗热、智利的梅迪-维斯纳病、沙特阿拉伯和也门的裂谷热,以及意大利、法国、墨西哥发生的禽流感和新城疫,在日本、韩国、中国台湾、蒙古、俄罗斯、塔吉克斯坦、阿根廷也相继暴发了口蹄疫.  相似文献   
5.
目前对猪胃肠道寄生虫病的综合防治愈来愈受到国内广大集约化养猪场的广泛重视,在要猪场进行寄生虫病调查的基础上,我们为该场提出了胃肠道寄生虫病的综合防治措施,为观察防治效果,1997年4月对该场再次进行了寄生虫调查。根据结果,发现该场胃肠道寄生虫感染情况明显好转。同时,也发现原综合防治措施尚存着不足,在讨论中我们给予了补充和探讨。  相似文献   
6.
通过提取尤凯帕病毒(Yucaipa virus,PMV-2)的RNA,进行RT-PCR,获得了HN基因。序列分析结果表明,HN基因的ORF全长为1743 nt,编码一由580个氨基酸组成的蛋白。HN基因经双酶切后连接入pTYB-2原核表达载体。酶切鉴定筛选阳性克隆,用IPTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳和Western-blotting检测均可见一约110ku的目的条带,说明大肠埃希氏菌表达的HN蛋白能与抗PMV-2阳性血清特异性结合。  相似文献   
7.
本试验根据已发表的新城疫病毒(NDV)的F基因序列设计特异性引物,对山东地区两株NDV流行株的F基因进行了克隆与序列分析,分别扩增到了A株和B株F蛋白编码区全基因,ORF全长均为1662bp。应用分子生物学软件对A株和B株的核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了分析。两毒株核苷酸序列同源率为87%,都编码553个氨基酸,氨基酸同源率为91%。与部分已发表的毒株相比:A株与-株同源率最高,为98%,B株与JS鹅株同源率最高,为98%。分离株都具有3个强疏水区。A株、B株裂解区氨基酸序列符合强毒株特点,二者均为强毒株。从基因分型情况看,A株属于基因Ⅸ,B株属于基因Ⅶ。A株与F48E9株遗传距离最近,B株与JS鹅株遗传距离最近。  相似文献   
8.
Yucaipa病毒于1956年首次分离于美国加利福尼亚州Yucaipa镇,1979年被定型为禽副粘病毒2型(Avain paramyxovirus-2,APMV-2)。该病毒呈世界性分布,野马和进口观赏鸟是主要传播源,全世界已有几十个分离株,分成数个血清型。经过我们多年研究发现Yucaipa病毒在我国鸡群中的感染率普遍存在,给养禽业造成的危害也越来越不容忽视。  相似文献   
9.
肠炎沙门氏菌是食物中毒的一个主要因素 ,自从被证实在世界范围的鸡群中广泛存在以来 ,它的爆发已经给社会带来了巨大经济损失 ,同时也大大增加了养鸡企业的饲养成本。近几年在鸡肉和商品肉鸡群中不断分离出鼠伤寒沙门氏菌DT1 0 4型 ,并发现沙门氏菌的其它血清型。人感染沙门氏菌主要源于鸡肉和鸡蛋 ,其中因食用带菌的鸡肉而引发的病例占 2 0 %。感染沙门氏菌病鸡的大量排泄物也很值得关注。沙门氏菌可通过多种途径如饲养生产环节 ,孵化、运输和传递工具得以大量传播。在英国 ,肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌是法定监督和防治病原 ,这有力地…  相似文献   
10.
将禽副粘病毒2型的标准毒株Yucaipa病毒和国内分离株F4、F6和F8株分别接种SPF鸡胚,收获鸡胚尿囊液;经差速离心和蔗糖密度梯度离心后,分别制备电镜样品和免疫电镜样品;经10g/L醋酸双氧铀负染后电镜观察病毒粒子形态。电镜下病毒粒子大小差别较大,形态呈圆形成椭圆型,直径150-300nm,有结构致密的基质蛋白膜,有的囊膜外可见纤突。免疫电镜样品中毒病明显集中,便于观察。  相似文献   
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