上海市规模化奶牛场布鲁氏菌病和牛结核病风险评估分级体系研究

为尽快实现上海崇明奶牛布鲁氏菌病和牛结核病(以下简称"两病")区域净化示范区净化目标,通过建立奶牛场"两病"输入性风险评估和内部风险评估模型,结合奶牛场"两病"流行史,构建了上海市规模化奶牛场"两病"风险评估分级体系;应用该体系将奶牛场划分为高、中、低风险场,为实施分类管理策略奠定基础。运用该体系,对上海市崇明区奶牛场每年开展1次"两病"风险评估分级。经过连续3年的风险分级与管理,崇明区奶牛场的"两病"净化效率得到极大提高,并使崇明奶牛"两病"区域净化示范区顺利通过国家验收,表明该体系符合上海市奶牛"两病"净化工作实际。     

猫冠状病毒S蛋白原核表达及鉴定

猫传染性腹膜炎是由猫冠状病毒(Feline coronavirus,FCoV)引起的慢性致死性疾病,以腹膜炎、大量腹水积聚为主要特征,不同年龄的猫均可感染,但老龄猫和2岁以内的猫发病率较高,纯种猫发病率高于一般品种的家猫,传染率非常高。本研究将猫冠状病毒S基因进行碱基序列优化并合成,亚克隆至PET30a,得到原核表达载体PET30a-NTU-2-S-RBD,进行大量诱导表达并纯化,最终得到的蛋白纯度可达90%,为后续疫苗的制备及诊断方法的建立奠定基础。     

牛结核病诊断方法研究进展

<正>牛结核病(Bovinetuberculosis)是由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)引起的一种人畜共患的慢性消耗性传染病。牛结核病被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物疫病,我国将其列为二类动物疫病。牛结核病的检测方法可归为2大类:一类是细菌学、分子生物学等直接检测法,另一类是免疫学、噬菌体测定等间接检测法。现有的研究结果显示,仅靠单一的检测方法很难筛选出牛群中所有结核感染牛,因此在临床可以综合应用一种以上的检测方法,提高检测的敏感性     

猫杯状病毒分离株VP1基因序列与致病性分析

旨在了解上海地区猫杯状病毒（feline calicivirus,FCV）VP1基因与致病性,采用常规方法分离鉴定出13株FCV,经RT-PCR和测序获得分离株VP1的基因序列,与参考株VP1基因进行同源性和遗传演化分析,对2株分离株进行动物致病性试验。结果显示,13株上海地区分离株VP1基因核苷酸序列相互间相似性为74.3%~99.8%,与参考株核苷酸序列和氨基酸序列相似性也较低,符合FCV易突变的特征;进化树分析表明,上海地区FCV流行株主要来自国内北方地区,少数毒株来自国外地区;通过对宿主临床症状、VP1进化树和VS-FCV特征性氨基酸位点进行分析,筛选出7株FCV强毒株;动物致病性试结果验表明,FCV-SH202101株和FCV-SH202113株可导致感染猫发病和死亡,潜伏期为1~2 d,接种后第3天即可检测到排毒,不同年龄段猫的病程不一致,可导致幼猫5 d后死亡,成年猫病程可持续11~18 d,2株分离株在致病性方面均符合VS-FCV特征。本研究丰富了中国FCV的分子流行病学资料,为VS-FCV毒株的筛选提供了有力的证据,也为FCV疫苗的研究提供了技术支持。     

富硒麦芽对二乙基亚硝胺致SD大鼠肝癌细胞因子和血管生成的影响

雄性SD大鼠193只，体质量100～120g，随机分为5组。Ⅰ～Ⅲ组，日粮中添加富硒麦芽至硒含量分别为0．3、1．0、3．0mg／kg；Ⅳ组为模型组；Ⅴ组为正常对照组，不加硒也不诱癌，日粮中分别添加亚硒酸钠至硒含量达0．1mg／kg。Ⅰ～Ⅳ组，饮水中添加二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine，DEN，100mg／L）诱癌，维持DEN摄入量按体质量每天约10mg／kg，连续16周，然后改饮普通灭菌水至18周末。Ⅴ组始终以普通灭菌水自由饮用。每4周每组取5只鼠眼眶采血；18周末采血、处死所有大鼠。测定血清肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNFα）、白介素-2（interleukin-2，IL-2）、胰岛素样生长因子-Ⅱ（insulin—like growth factor-Ⅱ，IGF-Ⅱ）、一氧化氮（nitricoxide，NO）、一氧化氮合成酶（nitric oxide synthase，NOS）等的含量，并以免疫组化法观察大鼠肝肿瘤组织血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表达。结果发现，某些剂量富硒麦芽能有效地抑制肝癌大鼠TNFα、IGF-Ⅱ、NO和NOS水平的上升，提升血清IL-2水平，抑制肝肿瘤组织中VEGF的表达。结果提示，富硒麦芽能促进肝癌大鼠免疫功能，抑制肿瘤血管生成，从而发挥其抗癌作用。     

富硒麦芽对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌血管生成的影响

试验选择雄性SD大鼠100只，体重100~120 g，随机分成3组。试验Ⅰ组日粮中添加富硒麦芽（SEM）使硒含量达到3.0 mg/kg；试验Ⅱ组为模型组；试验Ⅲ组为阴性对照组，不诱癌不加SEM；试验Ⅱ、Ⅲ日粮中分别添加亚硒酸钠使硒含量达到0.1 mg/kg。试验Ⅰ、Ⅱ组饮水中添加100 mg/L二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine，DEN）诱癌，维持DEN摄入量每天约10 mg/kg体重，连续16周，然后改饮普通灭菌水至18周末。试验Ⅲ组始终以普通灭菌水自由饮用。18周末，处死大鼠。利用免疫组织化学法分析大鼠肝肿瘤微血管密度（microvessel density，MVD）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果表明，SEM组MVD和VEGF表达较模型组显著降低。因此，表明SEM对肝肿瘤血管生成有抑制作用，下调VEGF表达可能是其抑制肿瘤血管生成的主要机理之一。     

富硒麦芽对肝癌间质微血管密度及癌细胞增殖的影响

将体重为120～150 g的清洁级SD雄性大鼠145 只随机分为4组:对照组(25只)、肝癌模型组(40只)、亚硒酸钠组(40只)和富硒麦芽组(40只).在对照组和模型组大鼠日粮中添加亚硒酸钠至硒含量达到饲养标准(0.1 mg·kg-1),在亚硒酸钠组和富硒麦芽组日粮中分别添加亚硒酸钠和富硒麦芽使硒含量均达到3.0 mg·kg-1.除对照组外,其余各组连续16周饮用含100 mg·L-1的二乙基亚硝胺(DEN)溶液以诱癌,然后改饮自来水至18周末.每组于4、8、12、16和18周时随机挑取5只大鼠断头处死,肝脏切片经增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色后计数肝癌组织中PCNA阳性细胞并计算PCNA指数(PI);取第18周肝脏上的癌结节经第8因子相关抗原(FⅧ-Rag)抗体免疫组化染色后,计数肝癌组织中的新生微血管数目并计算微血管密度(MVD).结果表明:2个补硒组大鼠MVD值及PCNA阳性细胞数显著低于模型组;与亚硒酸钠组相比较,富硒麦芽组大鼠MVD值及PCNA阳性细胞数显著降低.上述结果提示:富硒麦芽较亚硒酸钠更能有效抑制肿瘤组织新生血管形成,从而更有效抑制肿瘤细胞增殖.     

1株猫杯状病毒的分离鉴定及其ORF2序列的遗传演化分析

为了解猫杯状病毒形态特征及遗传演化情况,采用F81细胞从患病宠物猫的鼻拭子样品中分离获得1株猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV),命名为SH1。经电镜观察,病毒粒子呈球形,无囊膜,符合FCV的形态特征。采用RT-PCR方法扩增了该毒株的全基因组,并进行了序列测定和衣壳蛋白基因(ORF2)序列的分析。结果显示:分离株与国内外参考株的ORF2序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为74.1%~79.7%和84.5%~90.9%;ORF2基因的遗传演化分析显示,30株FCV毒株形成两大分支,即基因群Ⅰ和Ⅱ,分离株属于基因群Ⅰ;进一步分析发现,基因群Ⅰ和Ⅱ主要在377、539和557氨基酸位点存在差异,基因群Ⅰ和Ⅱ分别为N、A、G和K、V、S。研究结果为FCV感染的防控提供科学依据。     

富硒麦芽对大鼠肝癌细胞增殖周期及凋亡的影响

以100 mg·L-1二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌16周,同时分别饲喂含硒0.3、1.0、3.0 mg·kg-1富硒麦芽和含硒3.0 mg·kg-1亚硒酸钠饲料,停止诱癌及补硒处理2周后,处死大鼠.利用流式细胞术分析肝细胞增殖周期和细胞凋亡,探讨富硒麦芽对DEN诱发大鼠肝癌细胞周期及细胞凋亡的影响.结果表明: 与模型对照组比较,富硒麦芽组大鼠S期细胞显著减少,细胞增殖指数显著下降,而G0/G1期细胞显著增多,细胞凋亡率显著升高;与亚硒酸钠组比较,相同硒含量富硒麦芽组G0/G1期细胞和细胞凋亡率显著高于亚硒酸钠组,而S和G2/M期细胞显著低于亚硒酸钠组.证明富硒麦芽能干扰大鼠肝癌细胞增殖周期,阻断DNA合成与复制,使癌细胞在G1期堆积,再诱导G1期细胞发生凋亡,提示抑制癌细胞增殖和促进癌细胞凋亡可能是富硒麦芽发挥其抗癌作用的细胞学基础之一.     

富硒麦芽对二乙基亚硝胺所致大鼠肝癌、伴癌综合征及血糖调节相关激素的影响

雄性SD大鼠233只,随机分成6组。组Ⅰ~组Ⅲ为富硒麦芽(SEM)处理组,日粮中添加SEM使硒含量分别为0.3、1.0、3.0 mg.kg-1;组Ⅳ~组Ⅵ,分别为亚硒酸钠(SS)组、模型组、正常对照组,日粮中添加SS至硒含量分别为3.0、0.1、0.1 mg.kg-1。组Ⅰ~组Ⅴ,饮水中添加二乙基亚硝胺(DEN,100 mg.L-1)诱癌,连续16周。18周末采血、处死所有大鼠,观察肝脏形态学、肝癌标志物、肝功能、血糖、血钙及血糖调节相关激素的变化。结果发现,某些剂量的SEM能显著地减少肝癌大鼠肝表面癌结节数目,降低肝癌标志物甲胎球蛋白、谷胱甘肽硫转移酶、γ谷氨酰转肽酶和胰岛素样生长因子Ⅱ的含量,降低丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、总胆红素水平,抑制血糖水平下降和血钙升高,提升胰岛素、胰高血糖素、甲状腺素和三碘甲腺原氨酸等激素水平并改变其相对关系,且作用显著强于SS组。血糖与上述指标间均存在显著相关性。表明:SEM比SS能更有效地抑制DEN所致肝损伤,延缓肝癌进程,保护肝脏;肝癌大鼠低血糖症、高血钙症的发生与多种因素有关。