棉籽粕脱毒技术及其在畜禽生产中的应用

棉籽粕中粗蛋白的含量较高,是较好的蛋白饲料资源之一。但棉籽粕中的游离棉酚(FG)等抗营养因子限制了棉籽粕的应用,利用物理、化学、生物等脱毒方式可显著降低棉籽粕中FG含量,提高其饲用价值。文章对棉籽粕的营养特性、常用的脱毒方法及其在畜禽生产中的应用情况进行综述,以期为棉籽粕在畜禽生产中的合理利用提供参考。     

CD31可作为分离纯化猪肝窦内皮细胞的标记分子

血小板-内皮细胞粘附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD31)是内皮细胞表面一种重要的膜分子,常作为特异性标记鉴定内皮细胞.然而,CD31是否可作为纯化猪(Sus scrofa)肝窦内皮细胞(porcine liver sinusoidal endothelial cell,pLSEC)的特异性标记还有待验证.本实验通过CD31流式分选分离纯化pLSEC,观察分离后的pLSEC是否具有标志性的窗孔结构.以α-1,3-半乳糖苷转移酶基因敲除(α-1,3-galactosyltransferase knockout,GTKO)的五指山小型猪为研究材料,采用胶原酶原位肝脏灌注、离体消化,Percoll梯度离心,异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)-CD31标记pLSEC进行流式分选.结果表明,分离得到的pLSEC在倒置显微镜下细胞呈典型的内皮细胞形态,铺路石样排列;通过透射电镜观察到细胞具有窗孔结构,通过环境扫描电镜观察到pLSEC与猪主动脉内皮细胞(porcine arterial endothelial cell,pAEC)细胞表面结构具有明显区别,pLSEC具有特殊的窗孔结构.利用实时荧光定量PCR检测pLSEC、pAEC和猪耳成纤维细胞(porcine ear fibroblast cell,pEFC)的CD31、细胞粘附因子(cell adhesion molecules,CD146)、血友病因子Ⅷ基因(hemophilia factorⅧ,Ⅷ-F)、血管性血友病因子基因(von willebrand factor,vWF)的表达.结果表明,pLSEC的CD31、CD146、Ⅷ-F和vWF表达量显著高于pAEC和pEFC.利用免疫荧光法检测到pLSEC具有摄取细胞膜红色荧光探针(1,1’-dioctadecyl-3,3,3’,3’-tetramethylindocarbocyanine perchlorate,DiI)标记的乙酰化低密度脂蛋白(acetylated low density lipoprotein,Ac-LDL)的内吞功能.总之,利用CD31分离纯化的pLSEC,具有典型窗孔结构和内吞功能,同时高表达CD146、Ⅷ-F和vWF等肝窦内皮细胞的标记分子,为进一步研究异种肝移植的血小板减少症的问题提供了良好的细胞材料.     

葡萄糖和含腺苷分子通过碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)诱导猪脂肪细胞硫氧还蛋白互作蛋白(Txnip)的表达

硫氧还蛋白互作蛋白(Txnip)是一种氧化还原调节蛋白,通过与硫氧还蛋白结合抑制其活性,调节细胞的氧化还原状态,在葡萄糖和脂质稳态中起重要作用。本研究利用从3~7日龄仔猪(Sus scrofa)皮下脂肪组织分离培养的脂肪细胞,应用RNAi沉默碳水化合物反应元件结合蛋白基因(ChREBP)表达,以含0或0.1 mmol/L NAD+的葡萄糖浓度分别为0、5和15 mmol/L的培养液培养,采用实时荧光定量PCR检测Txnip及ChREBP mRNA表达,以探讨葡萄糖和含腺苷分子对猪脂肪细胞Txnip表达的影响及其转录调控途径。结果表明,葡萄糖以浓度依赖方式促进猪脂肪细胞Txnip和ChREBP mRNA表达,无糖条件下NAD+对Txnip mRNA表达没有明显影响,但葡萄糖存在时显著促进其表达。siRNA沉默脂肪细胞ChREBP表达后,葡萄糖对Txnip mRNA表达的促进作用比相同条件下培养的对照细胞有较大幅度降低;以NAD+处理后,Txnip表达在葡萄糖浓度为5和15 mmol/L时分别较对照细胞降低了91%和93%。由此说明,NAD+诱导猪脂肪细胞Txnip转录表达依赖于葡萄糖的参与,ChREBP介导葡萄糖和NAD+对Txnip mRNA表达的诱导作用。研究结果为进一步探讨ChREBP在葡萄糖和脂质稳态中的作用提供了基础。     

兰州大尾羊解偶联蛋白3(UCP3)基因荧光定量PCR检测方法的研究

试验通过提取兰州大尾羊不同组织中总RNA,反转录获得总cDNA样品,建立了用SYBR荧光定量PCR法检测兰州大尾羊解偶联蛋白(UCP3)基因mRNA在不同组织中的相对表达量的检测方法,并进行批内、批间重复性检验。结果表明:UCP3和GADPH基因标准曲线回归方程分别为CtUCP3=-3.2343x+41.6198和CtGADPH=-3.2851x+38.0344,相关系数(r2)分别为0.9958和0.9986,扩增效率分别为103%和97%;批内、批间重复性测定的变异系数分别为小于1.4%和10%。     

花椰菜尾菜发酵饲料对保育猪生长性能、血清生化指标、小肠组织形态及经济效益的影响

为研究花椰菜尾菜发酵饲料对保育猪生长性能、血清生化指标、小肠组织形态及经济效益的影响。选取42头体重相近（11.40±1.36） kg、体况良好的40日龄保育猪,随机分为两组,每组3个重复,每个重复7头。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂由80%基础饲粮和20%花椰菜尾菜发酵饲料组成的试验饲粮。试验共30 d,其中预试期8 d,正试期22 d。结果表明：与对照组相比,1）试验组保育猪的平均日采食量和平均日增重分别显著提高了16.50%和18.68%（P<0.05）,腹泻率显著降低了74.35%（P<0.05）。2）试验组保育猪十二指肠、空肠、盲肠、结肠和直肠食糜pH值分别显著降低了19.16%、11.59%、14.09%、15.95%和11.23%（P<0.05）。3）试验组血清尿素氮、白蛋白、免疫球蛋白M的含量显著升高了69.84%、5.22%、100%（P<0.05）,血清总胆固醇、谷丙转氨酶的含量分别显著降低了29.43%、60.51%（P<0.05）。4）试验组保育猪的空肠绒毛高度/隐窝深度和回肠绒毛高度分别显著升高了13.64%和11.49%（P<0.05）,空肠隐窝深度显著降低了9.56%（P<0.05）。5）试验组每头猪的增重收益、毛利润分别显著提高了30.84%和44.48%（P<0.05）,饲料成本显著降低了21.58%（P<0.05）。综上所述,饲喂花椰菜尾菜发酵饲料能够降低保育猪的腹泻率,提高保育猪的生长性能,增强其免疫性能,促进肠道发育,提高经济效益。     

不同冻存保护剂对绵羊前体脂肪细胞冻存效果的影响

【目的】探讨绵羊前体脂肪细胞冷冻保存的最佳冻存保护剂种类和浓度。【方法】在含20%胎牛血清的DMEM/F12培养液中分别添加不同浓度的DMSO、EG、PG、G和PVP作为冻存液，对原代培养的绵羊前体脂肪细胞进行冷冻保存后，检测复苏细胞存活率、细胞增殖能力、细胞中脂肪沉积量，测量GPDH活性，并用实时荧光定量PCR检测PPARγ和LPL mRNA的表达水平，最后对复苏细胞进行染色体核型分析。【结果】各种冻存保护液中，10% DMSO和5% DMSO+5% PVP组细胞存活率最高，与对照组相比差异不显著（P＞0.05），其它各试验组复苏细胞存活率均显著低于对照组（P＜0.05）；各试验组中10% DMSO组细胞增殖能力最强，且与对照组相比差异不显著（P＞0.05）；细胞复苏后培养6 d，各试验组脂肪沉积量与对照组之间没有显著差异（P＞0.05），而第11天时，10 % DMSO组脂肪沉积量显著高于其它试验组（P＜0.05），且与对照组相比差异不显著（P＞0.05）；各试验组GPDH活性和LPL、PPARγ mRNA 的表达量与对照组之间没有显著差异（P＞0.05）；染色体核型分析发现，复苏细胞二倍体细胞占主体，与原代细胞没有显著差异（P＞0.05）。【结论】含20% FBS的DMEM/F12培养液中添加10% DMSO或10%PVP、5% DMSO+5% PVP均能有效保存绵羊前体脂肪细胞，但以10% DMSO最佳。     

五个地方绵羊品种FAS基因3'-UTR区单核苷酸多态性研究

[目的]探究脂肪酸合成酶(FAS)基因3'端非翻译区(3'-U7R)在绵羊地方品种中的遗传多态性,为进一步揭示地方绵羊品种间遗传分化、开展肉质性状的关联分析和表达调控等研究提供依据.[方法]采用PCR-SSCP和DNA测序技术对兰州大尾羊(38只)、滩羊(58只)、甘加羊(40只)、欧拉羊(30只)和乔科羊(39只)五个地方绵羊品种205只个体的脂肪酸合成酶(FAS)基因3'-UTR进行单核苷酸多态性(SNPs)检测和遗传多态性分析.[结果]在这五个地方绵羊品种的FAS基因3'-UTR区中,有951位点和1005位点2个多态位点;两位点分别存在AA、Aa、aa和EE、Ee、ee各三种基因型,而aa和ee基因型未检测到;AA和EE基因型频率高于Aa和Ee基因型频率,基因型AA和EE为优势基因型;A和E两个等位基因频率高于a和e等位基因频率,为优势等位基因,适合性检验表明,这5个地方绵羊品种在951位点和1005位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态.独立性检验表明:在951位点,兰州大尾羊与滩羊、欧拉羊、甘加羊和乔科羊之间表现为差异显著(0.010.05);在1005位点兰州大尾羊、滩羊、欧拉羊、甘加羊和乔科羊品种之间均表现为差异不显著(P>0.05).测序结果表明,951位点在FAS基因在其转录产物Mrna的951位所对应处有一处C→T突变;1005位点在FAS基因在其转录产物Mrna的1005位所对应处有一处A→G突变.FAS基因Mrna二级结构预测结果显示:951位点的突变能导致其二级结构发生了明显的改变,而1005突变不会改变其二级结构.[结论]五个地方绵羊品种在FAS基因3'-UTR区有951位点(C→T)和1005位点(A→G)两个SNPs,2位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态;基因型频率分布的独立性检验结果表明,在951位点,兰州大尾羊与滩羊、欧拉羊、甘加羊和乔科羊之间表现为差异显著(0.010.05);在1005位点兰州大尾羊、滩羊、欧拉羊、甘加羊和乔科羊品种之间均表现为差异不显著(P>0.05).     

兰州大尾羊尾部脂肪细胞发育性变化研究

为了研究兰州大尾羊尾部脂肪组织的发育变化,运用显微成像处理系统中的Measure distance功能,测定样品的脂肪细胞形态学参数.结果表明,兰州大尾羊尾部脂肪细胞大小随生长发育呈现持续增加的趋势.说明兰州大尾羊尾部脂肪的沉积以脂肪细胞增大为主要方式.     

平凉红牛遗传资源及选育策略

本文综述了平凉红牛遗传资源的形成过程,保护与利用现状及存在的问题,提出了“先保再用”的保护利用策略,即：先申请认定为地方品种,列入国家地方品种保护目录,划定保护区先保护,固定前期选育成果;再系统规划开展平凉红牛遗传资源本品种选育和以此为育种素材的新品种选育,以期为“保护好平凉红牛地方品种,早日育成新品种”提供参考。