噬菌体生物扩增法检测犬结核病

2006年4月12日,四川省崇州市张某将两只贵宾犬(价值80余万元)送四川农业大学兽医院就诊。病犬在成都某宠物医院按照肺炎医治16天,但效果不佳,且症状加剧。在我院经实验室检测,最后确诊为犬结核病。其中一条犬因病情严重,来我     

蔗田地面栽培蘑菇技术

甘蔗生长中后期正值秋冬季,气温由高到低,符合蘑菇菌丝生长需高温,子实体形成需低温的规律,加上甘蔗已封行成林,类似森林的“小气候”环境,适宜蘑菇生长。利用蔗田地面行间种植蘑菇,每亩蔗地可产鲜菇750公斤以上。室外地面栽培蘑菇,不建菇房,不搭架,成本低,病虫少,产菇多,效益高,易推广。下面以蔗林地面种植蘑菇为例,介绍其关键技术。一、播种 (一)播种前的准备:1.灭鼠:播前一周,在种菇蔗地应用毒饵灭鼠2～3次。2.做床:理好种菇地四周排水沟,清除蔗行杂草,剥去蔗株下部0.5米高脚叶,顺放于蔗沟中,铲少量沟两边土做床,床宽0.35米左右,每间隔一行做两行菇床,留一     

检测结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6分泌蛋白双抗体夹心ELISA的建立

用重组蛋白CFP10-ESAT-6免疫新西兰大白兔,通过ELISA方法检测抗体效价水平;高效价抗体用DEAE-32阴离子交换柱纯化后,一部分抗体为包被所用,另一部分抗体用辣根过氧化物酶标记后,作为检测用.建立双抗体夹心法,进行了初步鉴定,确定该方法的可行性.结果表明:抗CFP10-ESAT-6多克隆抗体的效价在1:16 000稀释后D150值基本都达到1.0左右,在纯化、酶标记后,分别以1 : 5 000为包被工作浓度,1:3 000为酶标工作浓度时,能较高特异性检测结核杆菌培养上清分泌的CFP10-ESAT-6抗原.     

阜新沙棘林虫害种类调查与防控措施

辽宁大部分地区的沙棘、林龄老化,虫害危害严重,文章通过对沙棘害虫的发生情况调查,危害辽宁沙棘的主要害虫有沙棘木蠹蛾、柳蝙蛾、春尺蠖、苹小卷叶蛾.沙棘蚜虫等,经过近10 a防治,基本摸清危害规律、提出防控措施.遏制了沙棘虫害发生危害。     

应用双重PCR技术快速鉴定结核与非结核分枝杆菌

本研究建立1种双重PCR技术,用于区分鉴定结核与非结核分枝杆菌.在最佳扩增反应条件下.检测引物P1、P2和P3、P4扩增结核分枝杆菌的特异性及敏感性,并对19株结核分枝杆菌和9株非结核分枝杆菌临床分离株进行扩增鉴定.结果表明,引物P1、P2能扩增所试13株结核和非结核分枝杆菌,P3、P4仅扩增结核分枝杆菌复合群菌种,两对引物同时扩增3种非分枝杆菌均为阴性.两对引物双重PCR检测结核分枝杆菌DNA的敏感性分别为100pg/μl和10pg/μl.检测28株临床分离株,结核分枝杆菌可扩增出368bp和225bp 2条带,非结核分枝杆菌仅扩增出一条361bp～383bp带.因此,该双重PCR技术的建立为结核及非结核分枝杆菌的快速鉴定提供了1个可供选择的手段.     

阜新杨树检疫性有害生物风险评估及防控对策

阜新地区危害杨树的林业检疫性有害生物分布5种、国内林业检疫性危害杨树的有杨干象Cryptorrhynchus lapathiLinnaeus、枣大球蚧Eulecanium gigantean(Shinji)和冠瘿病Agrobacterium tumefaciens(Smith and Townsend)Conn.;省补充林业检疫性有害生物2种,即白杨透翅蛾Parathrene tabaniformis Rotteaberg、青杨天牛Saperda excrescens Butler。     

结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6融合基因的表达及其多克隆抗体的制备

以结核分枝杆菌标准株H37Rv的基因组DNA为模板，经重叠PCR扩增获得CFP10-ESAT-6融合基因片段，克隆于pET21a表达载体中，获得了重组质粒pET21a—CFP10—ESAT—6，将其转化大肠杆菌BL21细胞，经IPTG诱导表达，得到了25ku的目的蛋白。表达产物经纯化和定量分析后免疫新西兰大白兔，收集兔血清进行抗体ELISA检测。结果显示，成功构建了CFP10-ESAT-6融合基因的原核表达质粒，获得了CFP10-ESAT-6融合蛋白，以此蛋白免疫动物可产生高效价的抗体。     

检测牛分枝杆菌的噬菌体生物扩增法的建立及初步应用

建立噬菌体生物扩增法(PhaB)检测牛分枝杆菌,将建立的方法用于22株牛分枝杆菌临床分离株及20种常见非结核分枝杆菌(NTM)及5种非分枝杆菌,同时对203头疑患牛结核病奶牛的奶样进行检测,其结果与皮内变态试验、涂片法、罗氏培养进行比较。结果表明,噬菌体工作浓度为1×109PFU/mL、37℃感染2 h为最佳检测条件;杀毒剂浓度为100 mmol/L,室温作用10 min即可完全杀灭受试噬菌体;加热灭活的细菌和指示细菌不被噬菌体感染;牛分枝杆菌、耻垢分枝杆菌和22株牛分枝杆菌临床分离株检测结果均为阳性,16种NTM和5种非分枝杆菌为阴性,4种NTM(偶然、胞内、金色、草分枝杆菌)在高浓度时(>105CFU/mL)检测结果为阳性;该法可检测出60~120 CFU/mL牛分枝杆菌;批内、批间变异系数均小于15%,重复性良好;203头检测奶牛中,PhaB法、涂片法、皮内变态试验和罗氏培养结果分别有14头(6.9%)、17头(8.4%)、21头(10.3%)和12头(6.0%)为阳性,PhaB法与其他3种方法比较,阳性准确性、特异性都在96%以上,敏感性在71%~100%。该法检测牛分枝杆菌具有快速、简便、灵敏、特异性高等特点。