犬α干扰素的克隆、表达及纯化

根据DDBJ/GenBank基因库中已登录的犬α干扰素序列,设计了含SphⅠ和HindⅢ酶切位点的一对引物,采取聚合酶链式反应(PCR)技术以犬基因组DNA为模板进行了CaIFN-α的成熟肽基因的克隆,扩增产物与克隆载体pGEM-T Easy Vector连接后转入大肠杆菌JM109,经PCR鉴定和EcoRⅠ酶切鉴定,初步证实为CaIFN-α,用SphⅠ和HindⅢ双酶切重组质粒,将目的片段与表达载体pQE30连接,然后转入大肠杆菌JM109,经PCR鉴定、SphⅠ和HindⅢ双酶切鉴定、序列测定证实已经成功克隆了CaIFN-α,构建了重组表达质粒PQE30/CaIFN-α。将重组表达菌液培养至OD600为0.5时加入IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析CaIFN-α在大肠杆菌中得到了表达,表达的目的蛋白以包涵体形式存在,表达量约占细菌总量的20%左右。将诱导表达的菌液经超声裂解、变性、复性、透析后,得较纯的CaIFN-α蛋白。本研究为以后CaIFN-α的活性及临床应用研究奠定了基础。     

鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及其二价灭活疫苗的研制

从云南昆明、山东青岛死亡率高的鸭场的病死鸭中各分离到一株细菌,分别命名为YB080510株和YB080512株.细菌鉴定和血清定型结果表明:YB080510株、YB080512株分别为血清Ⅰ型和血清Ⅱ型鸭疫里默氏杆菌,为国内目前主要流行型菌株,与其他鸭疫里默氏杆菌流行株的同源性为99.2％ ～ 100％;分离菌的致病性试验结果表明:两株鸭疫里默氏杆菌均为强致病菌,活菌量为1×109 CFU的YB080510株、2×108 CFU的YB080512株均可使1月龄健康樱桃谷鸭全部致死.以此YB080510株、YB080512株鸭疫里默氏杆菌制备二价灭活疫苗,每型菌含量为9×109CFU/mL,将此疫苗用5日龄樱桃谷鸭分别进行安全性和效力试验,结果显示疫苗安全、有效,攻毒保护率可达90％ ～ 100％(9/10 ～ 10/10).     

鸡传染性鼻炎双价灭活疫苗的安全性和免疫效力试验

鸡传染性鼻炎(Infection Coryza,IC)是由副鸡嗜血杆菌(Haemophilus paragallinarum,Hpg)引起鸡的一种快速传播的上呼吸道疾病,育成鸡和产蛋鸡均可发病,可造成育成鸡生长停止,淘汰率增加,产蛋鸡产蛋量减少,从而给养鸡业带来重大经济损失.笔者先后从青岛地区及山东、江苏、河北等省市送检的发病鸡中分离到副鸡嗜血杆菌数十株,所有菌株都经过鉴定,部分菌株进行过定型,多数为A型,少数为C型.为了控制本病的流行和减少养鸡户的经济损失,应用当地分离株研制了鸡传染性鼻炎氢氧化铝胶佐剂双价(A、C型)灭活疫苗和油乳剂灭活疫苗,两种疫苗都获得了满意的免疫效果.     

我国局部猪胸膜肺炎流行调查和血清型分析

为了解我国猪传染性胸膜肺炎的流行情况及其病原胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus Pleurnopneumoniae,简称APP)的主要血清型,1990年~2014年我们对我国23省市不同养猪场进行了流行病学调查。调查结果表明,该病在我国23个省市均有发生,先后从山东、深圳、上海、河北、江苏、河南等省、市的临床病例和送检病料中分离到APP病原62株。其中已鉴定、定型的菌株59株,所涉及的型株为1型4株、2型11株、3型3株、5型18株、7型19株、8型1株、未定型3株。根据我们对全国流行病学调查和病原分离鉴定各型分离株的多少及其毒力的强弱比较分析,本病危害我国养猪业发展的主要血清型为7型、5型和1型。     

鸭疫里默氏杆菌分离鉴定及药敏试验

从云南、山东16个鸭场有典型浆膜炎临床症状的病(死)鸭中分离到14株细菌,经形态、培养特性、生化特性、PCR等生物学特性鉴定,上述菌株均为鸭疫里默氏杆菌,型鉴定试验表明其中2株为RA-1型、4株为RA-2型,药敏试验表明山东分离株对头孢氨苄、痢特灵、链霉素、庆大霉素较敏感,云南分离株对氨苄青霉素、痢特灵、头孢氨苄较敏感。动物致病性试验显示RA-1、RA-1型分离菌株均可使健康鸭发病或死亡。     

鸭疫里默氏杆菌荧光定量PCR检测方法的建立

根据鸭疫里默氏杆菌16SrRNA基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了该菌的荧光定量PCR检测方法。利用该方法分别对自然和人工感染病例不同脏器的细菌进行定量检测,并对临床疑似阳性病例进行诊断。试验证明,该方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强的特点;在自然感染和人工感染的鸭病例中,脑组织和心脏的细菌含量最高。该检测方法能够很好地应用于鸭疫里默氏杆菌的快速检测。     

鸭疫里默氏杆菌PCR检测方法的建立

本研究根据鸭疫里默氏杆菌16S rRNA基因的保守序列设计一对特异性引物,建立了鸭疫里默氏杆菌的PCR检测方法。结果表明,此方法具有敏感性高、特异性好等优点,从而为鸭疫里默氏杆菌的诊断提供了有效的工具。     

一例由绿脓杆菌引起的水貂出血性肺炎的诊治

水貂出血性肺炎又称假单胞菌病或绿脓杆菌病,是由假单胞菌科假单胞菌属中的铜绿假单胞菌(又称绿脓杆菌)引起的一种急性传染病。以肺出血、肺水肿、呼吸困难,部分水貂突然死亡,并从口鼻中流出血样泡沫等为特征,是严重威胁养貂业的重要疾病之一。1953,年Knox首先在丹麦报道了该病,1982年,Gessord从貂体内首先分离出病菌。该病在瑞典、     

上海市猪源大肠杆菌耐药性监测

目的了解上海市猪场大肠杆菌耐药情况及耐药规律。方法按照常规方法分离培养细菌,应用HX-21细菌鉴定/药敏分析仪以及API20E鉴定系统进行了鉴定细菌,采用HX-21细菌鉴定/药敏分析仪测定了大肠杆菌对24种抗菌药耐药情况。结论本地区猪源大肠杆菌耐药性严重,其中对阿米卡星、多黏菌素敏感率高,对氨苄西林、卡那霉素、四环素、甲氧苄啶耐药性较高,耐药谱复杂,多重耐药性、交叉耐药性严重。     

猪胸膜肺炎放线杆菌LY株的分离、鉴定和定型

2011年4月,从山东省莱阳市某猪场疑似猪传染性胸膜肺炎发病猪肺中分离到致病菌1株（LY株）。经形态、培养特性、生化特性、PCR等鉴定,LY株为猪胸膜肺炎放线杆菌。应用多糖抗原进行血清学定型试验,鉴定结果为APP2型。