重组酶聚合酶等温扩增技术在动物源性成分鉴定中的应用

在打击肉制品掺假走私、维护市场秩序、保护野生动物资源等方面,对动物源性成分鉴定技术的特异性、灵敏性、重复性提出了很高的要求。本文阐述了动物源性成分的检测鉴定技术,有多样性和局限性的特点。归纳了重组酶聚合酶恒等温扩增技术原理与应用,解决了PCR技术在仪器上的局限性,优化了早期恒温扩增技术的缺点。指出重组酶聚合酶恒等温扩增技术为动物源性成分的快速准确鉴定提供了坚实的技术基础,并在动物疫病诊断方面也有很好的应用前景。     

我国陆生动物疫病诊断技术标准化建设现状

动物疫病诊断技术标准体系的建立,对于防控重大动物疫病具有重要意义。目前,我国92%的陆生动物疫病有相应诊断标准,但仍存在覆盖率有待提高、部分标准内容有交叉或重复、标准老龄化等问题。本文提出了对标准进行清理整合,完善动物检疫标准体系建设,由多家实验室实施标准多方验证,加强具有前沿性和自主知识产权的高技术标准研制等建议,以期为标准制定工作提供参考。     

供港冷冻羊肉中金黄色葡萄球菌污染监测

金黄色葡萄球菌是重要的食源性致病菌,为了保证内蒙古供港冷冻羊肉的卫生安全,本研究在一年的时间里,连续对供港的13批出口冷冻羊肉进行了金黄色葡萄球菌的污染监测。采用GB/T4789.10-2003的检测方法,经检测发现全部13批冷冻羊肉均未受到金黄色葡萄球菌污染。     

牛羊布氏杆菌病试管凝集试验水平测试技术思路的探讨

确定了布氏杆菌病(bruceuosis)试管凝集试验水平测试技术思路方案。通过布氏杆菌病试管凝集试验的常规思路与本方案思路进行比较，结果表明对牛羊布氏杆菌进行试管凝集试验水平测试时，本方案在盲样血清和试剂量少及结果判定符合测试要求等条件的限制下，能取得最佳的测试效果。     

内蒙古地方品种绵羊朊蛋白基因多态性分析

对中国内蒙古的乌珠穆沁羊（46）、苏尼特羊（34）和蒙古羊（22）进行朊蛋白基因的克隆和多态性分析。结果表明,发现了8个朊蛋白基因多态性位点,其中M157I、Q220H、R223K为未见报道的朊蛋白基因多态性位点;痒病中度易感的朊蛋白基因ARQ/ARQ占74.5%,具有痒病抗性朊蛋白基因ARR/ARR占7.9%,未检出对痒病高度易感的朊蛋白基因VRQ/VRQ。从基因水平上推论,乌珠穆沁羊携带的羊痒病抗性的ARR/ARR基因频率较高（15.2%）,占ARR/ARR基因型的87.5%,发生羊痒病风险较低。该研究结果在中国活羊的出口贸易和品种选育方面有重要的意义,为出入境动物检疫中羊痒病的风险分析和风险评估提供重要的基础理论资料。     

ELISA在检测动物组织氯霉素残留中的应用

采用酶联免疫吸附实验(Enzyme-linkedImmunosorbentAssayELISA)方法,筛查和定量检测氯霉素(Chloramphenicol)。试样经过乙酸乙酯的萃取和正己烷的净化,在温育过程中,将特异性抗体(兔抗CAP)、酶标记CAP(酶结合物)和CAP标准品或样品,加入预先包被了绵羊抗兔IgG抗体的孔内。特异性的抗体便被固定抗体所结合。与此同时,游离的CAP(存在于标准品或样品)和酶结合CAP便互相竟争CAP抗体结合部位(竞争性酶免检测)。然后温育1h洗涤除去非结合(酶标记)试剂。加入底物,结合的酶结合物可将无色的底物转化为有色产物。加入硫酸,终止底物反应。用装有450nm滤光片的酶标仪进行检测,吸光度值与样品中的CAP浓度成反比。试验结果表明,该方法在0.025～2ng/ml范围内相关系数(R2)大于0.995,检测下限0.02μg/kg,回收率为78.2%。     

绵羊组织中朊病毒受体37kDa/67kDa LRP/LRmRNA转录水平研究

本研究旨在检测绵羊组织中朊病毒受体37kDa/67kDa LRP/LR mRNA水平并探讨其与朊病毒组织嗜性的关系.选用背景相似的6只内蒙绵羊,提取组织RNA.反转录RT-PCR构建cDNA模板;利用本研究前期构建的标准质粒及标准曲线,对组织中该受体mRNA水平进行Real-time(实时)荧光定量PCR检测.结果表明,大脑皮质中的受体表达水平最高(P<0.05),其次为心脏和脑干,中等表达的器官依次为海马、小脑、脾脏、丘脑、肠系膜淋巴结、肝脏和肾脏,表达量最低为肺脏(P<0.05).结果提示,朊病毒受体--37kDa/67kDa LRP/LR在绵羊各组织中的表达量高低与朊病毒的复制程度有一定的相关性,受体LRP/LR表达量较高的区域朊病毒复制水平相对较高.结果提示朊病毒入侵机体后,组织器官PrPsc聚集程度可能与受体37kDa/67kDa LRP/LR表达水平相关.     

口蹄疫在口岸中的检疫及消毒技术

口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒引起的动物烈性传染病,国际动物卫生组织(OIE)列为A类传染病之首.其主要危害牛、猪、羊等偶蹄动物,成年动物感染后病死率一般不超过5%(幼年动物病死率高达50%),可使肉、奶等品质、产量下降.     

应用ELISA快速检测牛羊副结核病

在96孔微板中包被抗原，加入被检血清，经温育后，抗体特异性地与抗原相结合，形成抗原一抗体结合物。洗涤去除未结合的物质，与加入的酶结合物(HRPO)相结合。再洗去未结合的酶结合物，加入底物后显色．加入终止液终止反应。用装有630nm(或620nm、650nm)滤光片的酶标仪进行检测，通过计算S／P值，判定血清中副结核抗体阴、阳性。此方法具有快速、灵敏、准确的特点。