BA-ELISA快速检测鱼源沙门氏菌的研究

本研究建立了快速检测鱼源沙门氏菌的BA-ELISA工作程序。该程序灵敏度为105个/mL,可经受108个/mL杂菌的干扰,对含有10个以上沙门氏菌的接种标本经21～23h两步增菌后即可检出,可在25～27h内报告结果,比常规分离培养方法缩短3～5d。从6个品种的498尾淡水鱼和7个品种的160尾海水鱼,共采集标本778份,以常规分离培养法检出29份阳性标本,分离率为3.7%。对包括该29份分离阳性标本在内的184份鱼源标本实施BA-ELISA的结果表明,两法的符合率为96.73%,BA-ELISA法的敏感性为100%(29/29),特异性为96.1%(149/155)。独立性检验表明,两法检测结果间有极显著意义的一致性(P<0.01)。血清学分型表明,分离的菌株全部为鼠伤寒沙门氏菌(1,4,5,12:i:1,2)。     

空肠弯曲菌共同抗原单克隆抗体的研制及其在细菌检验中的应用 Ⅱ.杂交瘤细胞株的建立及特性鉴定

应用B-淋巴细胞杂交瘤技术,建立了5株稳定分泌抗空肠弯曲菌共同抗原(CA)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株(4A7,9D6、9C2、11A1、11D4)。在5株杂交瘤分泌的McAb中,有4株(4A7、9D6、11A1、11D4)针对CA中的耐热抗原成分,对其中4A7、9D6两株分泌的McAb进行免疫印迹分析表明,其与CA中大约为7.7×104u的蛋白移行带出现特异反应;一株(9C2)针对CA中的不耐热抗原成分。对杂交瘤细胞的核型分析表明,其染色体数在93-108之间。体外传代4个月,仍保持稳定分泌抗体的特性。这种McAb具有较强的特异性,除与幽门弯曲菌出现弱阳性反应外,与参试的其它31种非弯曲菌属的细菌均为阴性反应。对不同地区、不同来源的516株空肠弯曲菌的鉴定表明,制备的McAb与现有空肠弯曲菌均出现阳性反应,与常规鉴定法的符合率为100％。     

BA—DOT—ELISA方法的建立及其在空肠弯曲菌鉴定上的应用

通过对实验条件的筛选,建立了BA—DOT—ELISA的工作程序。在该程序中,应用抗空肠弯曲菌共同抗原的单克隆抗体,对空肠弯曲菌进行了鉴定。本方法具有较强的特异性。在参试的15种其它细菌中,除与幽门弯曲菌出现弱阳性反应外,与其它细菌均为阴性反应。其敏感性可达1.6×10~5cell/ml。对不同地区、不同来源的148株空弯菌进行鉴定,结果均为阳性反应,与常规鉴定法的结果一致。这为空肠弯曲菌的鉴定提供了一种特异、敏感、快速的方法。 DOT—ELISA是近几年发展起来的一项新技术,具有简便、经济、不需要特殊仪器、结果可长期保存的优点,自八十年代初期问世以来,已得到较广泛的应用。将生物素一亲和素(BA)系统引入酶联免疫吸附试验,提高了ELISA的敏感性,但在DOT—ELISA中的应用效果如何,尚有待探讨。本研究应用抗空肠弯曲菌共同抗原的单克隆抗体和BA系统,建立了BA—DOT—ELISA的工作程序,并应用这种方法对空肠弯曲菌进行快速鉴定,取得了较满意的结果,现简要报告如。     

大肠杆菌K_(88ac)与LT(A~-B~ )抗原基因质粒在猪霍乱沙门氏菌弱毒株中的表达

应用细菌质粒转化技术,将大肠杆菌K_(?)与LT(A~-B~ )抗原基因重组质粒转入猪霍乱沙门氏菌弱毒菌苗株中.对获得的其中8个转化子进行鉴定的结果表明,转化的细菌仍保持沙门氏菌的形态、生化及抗原特性,同时可稳定地表达K(?)和LT-B两种抗原.用微量间接血凝试验、抗甘露糖豚鼠红细胞凝集试验(MRHA)、ELISA等对转化菌表达的K(?)抗原进行了测定,用间接免疫溶血试验对其表达的LT-B抗原进行了测定.结果,这两种抗原在转化的细菌中均可高效表达.电镜下观察,转化的细菌在其表面形成菌毛样结构.这种转化细菌表现出猪霍乱沙门氏菌与产肠毒素性大肠杆菌的两种抗原特性,为这种双价工程菌苗的研制提供了有价值的候选菌株.本研究结果还表明,猪霍乱沙门氏菌弱毒菌苗株可作为基因转化的有效受体菌.     

抗补体-ELISA及其在动物传染病诊断中的应用

应用菊糖和酵母多糖试剂从豚鼠新鲜血清中提取补体C_3,制成菊糖—C_3和酵母多糖—C_3复合物后,以其分别免疫家兔,制备了抗C_3抗血清,经提纯并用HRP标记后,建立了抗补体—ELISA工作程序.通过对8种动物、18个类别的347份血清的检测表明,除抗空肠弯曲菌和獭兔军团菌阳性血清不发生阳性反应外,其余血清均与常规检测法有较好的符合率.     

乳房链球菌对克林霉素耐药基因的定位

采用试管稀释法和纸片法测定9株乳房链球菌对克林霉素的耐药性，通过PCR反应检测克林霉素的耐药性基因，并进行测序比较。发现克林霉素对乳房链球菌的抗菌活力较强，克林霉素耐药基因同时存在于乳房链球菌的染色体和质粒上。     

家畜口蹄疫研究进展

口蹄疫 (Ｆｏｏｔａｎｄｍｏｕｔｈｄｉｓｅａｓｅ ,ＦＭＤ)是由口蹄疫病毒感染引起的偶蹄动物共患的急性、热性、接触性传染病。人亦可感染。世界各国对该病非常重视 ,无论是存在口蹄疫的国家 ,还是已经消灭口蹄疫的国家 ,都动用大量的科研和经济力量控制和防止口蹄疫的发生。国际兽疫局将口蹄疫列为动物Ａ类疾病 ,我国农业部把口蹄疫列为第一类动物疫病中的第一个病[1] 。本病传播途径多、传染性强、为多种动物共患 ,曾多次在世界上发生大流行 ,虽然是一个早已熟知的老病 ,但近几年在亚洲等地再次暴发 ,又出现了一些新情况 ,另外 ,随着分…     

应用McAb·BA-ELISA快速检测动物源空肠弯杆菌的研究

应用抗空肠弯杆菌共同抗原的单克隆抗体,建立了快速检测动物源空肠弯杆菌的 BA-ELISA 程序。此程序可检出每 ml 含5个空肠弯杆菌24小时增菌培养物或每ml 含3.2×10~4个空肠弯杆菌纯培养物,不与金黄色葡萄球菌等16种对照菌及混合菌液发生交叉反应。用其对雉鸡等10种动物456份肛拭粪便标本进行检测,总阳性率为45.5%,与常规分离鉴定法的阳性符合率为99.1%.敏感性为99.2%.特异性为100%。统计学分析表明,所建立的 BA-ELISA 检测程序与常规分离鉴定法间具有极显著的一致性(p<0.01),能使检测时间缩短4～5天.     

强毒小肠结肠耶氏菌生物素标记基因探针的研究

在构建的小肠结肠耶氏菌毒性质粒DNA基因文库pYB1～8与pYP1～6的基础上,筛选出了pYB7和pYP6克隆株.用限制性内切酶Bam HI消化pYB7,Pst消化pYP6,可分离出3.8kb和6.4kb的插入性DNA片段.以这两个基因片段为目的基因,用生物素化dUTP和光敏生物素标记,获得了生物素标记的基因探针.该探针能检出10pg以上的强毒小肠结肠耶氏菌DNA,不与无毒小肠结肠耶氏菌及大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等18种对照菌反应,具有高度的特异性和敏感性.pYB7与pYP6探针对不同血清型及来源的小肠结肠耶氏菌检测,其结果与自凝性试验、依钙试验等结果相符;对小肠结肠耶氏菌强毒株与无毒株检定的准确率为100%.