蓝舌病单克隆抗体的研制

作者应用淋巴细胞杂交瘤技术,将小鼠骨髓瘤细胞SP_2(?)0—Ag14与提纯篮舌病10型病毒免疫的小鼠脾细胞进行杂交,制备能分泌抗蓝舌病病毒的单克隆细胞株225个,经三次克隆化,选择了35株杂交瘤细胞制备腹水,用间接ELISA和间接免疫荧光与蓝舌病病毒排谱反应表明,获得单抗中有12株具有群特异性。用蓝舌病病毒1、2、3、4、5、6、8、10、15和17型高免血清作阻断ELISA试验,单克隆抗体7D_8和2D_12有很明显阻断作用,可望用于检测临床样品。     

应用Dot—ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

用差速离心结合琼脂糖凝胶层析纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）制备抗原免疫兔,获得高效价的多克隆免疫血清,提纯ＩｇＧ后用辣根过氧化物酶标记,建立了检测ＩＢＶ的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）方法。对影响本方法因素的研究表明,当酶标抗体作１：１００稀释、工作时间为３７℃、６０ｍｉｎ时结果最理想;对待检组织用氯仿处理、对硝酸纤维素膜用０．３％Ｈ２Ｏ２处理３０ｍｉｎ可有效地消除组织内过氧化物酶的影响。该方法具有较强的特异性和敏感性,对病毒的最低检出量为０．０１２４ｍｇ／ｍＬ。本法不仅可检测到纯化ＩＢＶ,而且可直接用于检测鸡胚尿囊液或病变组织（如气管、肾）中的病毒;对临床上疑似ＩＢＶ感染的病鸡的阳性检出率达７８．６％,而病毒分离率仅达６０％,两者符合率为９０％。试验结果表明,Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ可作为ＩＢＶ早期诊断的方法,具有简单、快速、样品用量少等优点。