猪葡萄球菌感染裸鼠及BALB/c小鼠模型的研究

用一株本室分离鉴定能够引起猪渗出性皮炎的猪葡萄球菌(S.hyicus GZ1)经肌肉注射裸鼠和BALB/C小鼠,意图研究裸鼠和BALB/C小鼠对猪葡萄球菌的易感性及猪葡萄球菌对裸鼠和BALB/C小鼠的致病性。结果表明裸鼠和BALB/C小鼠均可被感染,并表现各自的临床症状。裸鼠在感染后2到3d背部和面部皮肤开始出现大量小的红色囊泡,4到5d后部分囊泡消失,部分形成结痂。一些裸鼠眼睛还会有较多脓性分泌物渗出,感染两周后相继死亡。BALB/C小鼠感染该菌后多表现急性临床症状,感染后2到3d就相继死亡,因此表现不出明显的眼观病变,只有很少一部分小鼠皮肤上会出现炎性渗出,导致该处皮肤脱落。研究表明:BALB/C小鼠比裸鼠对猪葡萄球菌更易感,裸鼠感染后产生清晰可见的临床症状,而BALB/C小鼠在感染后往往还来不及表现明显的临床症状就相继死亡。可见,猪葡萄球菌不仅对猪有致病性,对裸鼠和BALB/C小鼠也都表现出不同程度的致病性。     

广东地区猪群新发塞内卡病毒流行株的分离鉴定及遗传进化分析

【目的】检测广东两猪场新发的鼻镜与蹄冠水疱病病原，获得新发塞内卡病毒（Senecavirus A， SVA）流行株，为后续研究提供材料。【方法】应用 SVA RT-PCR、荧光 PCR 等方法对采集的病料进行初步筛 查，再将水泡皮进行处理接种于 ST 细胞、BHK-21 细胞上，用 SVA 特异性引物对细胞上清液进行扩增，测序 并分析序列，采用蔗糖浓度梯度方法纯化病毒进行电子显微镜形态观察，并对病毒分离株的 TCID50 进行测定。 【结果】 经 SVA RT-PCR 与荧光 PCR 方法初步诊断该猪群为 SVA 感染；细胞接毒培养发现，自第 6 代起， 细胞出现典型 CPE，电镜观察可见 25 nm 左右的病毒颗粒，扩增序列提交 NCBI Blastn 比对鉴定为 SVA；测得 毒株 SVA CH-GDBL1-2016 的 TCID50 为 106.8，毒株 SVA CH-GDBL2-2016 的 TCID50 为 106.7。【结论】SVA CH-GDBL1-2016 和 SVA CH-GDBL2-2016 可为后续塞内卡病毒病的诊断和疫苗研制提供材料基础。     

开沟刀耐磨损性实验研究

为了应对开沟机工作环境复杂情况,针对开沟刀耐磨性的要求,结合生产实际中出现的开沟刀因磨损导致使用寿命低等问题,研究了金属陶瓷涂层在开沟刀上应用的可行性。利用表面工程技术与农业机械生产相结合的研究方法,采用反应氮弧熔覆技术,在开沟刀工作表面熔覆一层高耐磨性的熔覆层。通过台架磨损实验的对比研究,得到了熔覆层耐磨性比常规淬火回火处理的65Mn钢有明显提高,能够增强刀具的使用寿命,提高经济效益,为今后陶瓷涂层的技术在开沟刀生产和修复中的应用提供一定的技术和理论基础。     

塞尼卡病毒A VP1基因遗传进化分析

[目的]研究塞尼卡病毒A VP1基因的遗传变异情况。[方法]通过RT-PCR方法从广东省2个猪场的病料中扩增出塞尼卡病毒A阳性样品,并对其VP1基因进行了基因组扩增和序列分析。[结果]2个塞尼卡病毒A VP1基因与Gen Bank公布的巴西、美国、中国等毒株的同源性为92%99%,与2002年美国分离株SVV-001的同源性分别为92.8%和92.7%,与我国分离株CH-02-2015、CH-03-2015、CH-04-2015的同源性最高达99.1%。通过序列分析发现,毒株VP1基因组存在散在突变点,表明毒株可能存在一定程度的变异。[结论]研究结果可为我国塞尼卡病毒A的深入研究和猪水疱样症状病的鉴别诊断提供参考。     

猪伪狂犬病毒Bartha株与变异株疫苗免疫后中和效价比较试验

通当前由于伪狂犬病毒变异株在全国流行,引起人们对疫苗选择的关注,产生是否换用疫苗的不同看法。为了给生产提供疫苗选择的参考,本研究选用某进口猪伪狂犬病毒(PRV)Bartha株疫苗和某国产PRV变异株疫苗,分别免疫15头仔猪,经2次免疫后第3周采血清,检测血清中和效价,并对结果进行统计分析。结果显示,变异株疫苗免疫后中和效价明显高于该进口Bartha株疫苗。     

猪葡萄球菌ExhB基因在E．coli中的表达及生物学活性分析

以猪葡萄球菌基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增ExhB基因,克隆测序鉴定后,插入质粒pET32a,构建重组表达载体pET32a-ExhB,通过大肠杆菌BL21表达重组融合蛋白,利用Ni亲和层析的方法纯化重组的融合蛋白,并用纯化的蛋白攻毒裸鼠,鉴定其生物学活性.结果显示,扩增出了猪葡萄球菌ExhB基因并纯化出了重组的融合蛋白,SDS-PAGE分析表明,融合蛋白的相对分子质量约为45 000,主要以包涵体形式存在;通过ELISA和琼脂扩散试验表明,所表达的包涵体蛋白可以与用菌体制得的多克隆抗血清发生特异性结合;用复性的蛋白在裸鼠身上攻毒后可以产生皮炎病变.结果表明,成功的表达了ExhB基因的重组融合蛋白,并且鉴定出重组蛋白可与猪葡萄球菌阳性血清发生特异性免疫反应和重组蛋白在裸鼠身上的致病性,为进一步研究猪葡萄球菌的致病机理及建立该菌完备准确的防治和检测方法奠定基础.     

果园修剪枝条处理机工作原理及切削力的研究

切削装置是枝条处理机的重要组成部分。为此,探讨了枝条处理机的工作原理以及切削方向、切片厚度、切削刀尺寸参数等对切削刀切削性能的影响,主要对枝条处理机的切削方向展开研究,为枝条处理机的设计提供了重要的理论依据。     

粤北地区H9N2亚型禽流感和新城疫流行情况调查

为了了解广东省粤北地区家禽H9N2亚型禽流感和新城疫流行状况,采用H9N2 AIV和NDV实时荧光定量PCR方法对2014年-2017年在粤北地区18个采样点采集的6 500份样品进行检测,并将阳性样品进行PCR扩增与分析。结果表示,从6 500份样品中检出H9N2 AIV 44份,NDV 6份,H9N2 AIV和NDV混合感染3份。1月～3月H9N2 AIV检出率最高,H9N2亚型禽流感在粤北地区流行呈逐年下降趋势。新城疫在粤北地区的流行以散发为主没有明显的季节。序列分析显示,3株H9N2 AIV属于我国H9N2 AIV主要流行分支,3株NDV与F48E9强毒株同源性较高,遗传进化关系上属于同一分支。通过对粤北地区H9N2 AIV和NDV的调查分析,明确了H9N2 AIV和NDV的流行变异趋势,可为粤北地区H9N2 AIV和NDV的综合防控提供参考。