牛分枝杆菌外膜蛋白基因ompA的原核表达及免疫活性分析

为验证牛分枝杆菌外膜蛋白A是否具有免疫活性,以牛分枝杆菌Vallee Ⅲ株基因组DNA为模板扩增牛分枝杆菌外膜蛋白基因ompA,采用DNA重组技术将此基因片段连于表达载体pGEX6p-1,构建重组质粒pGEX6p-1-ompA,并将其转化到大肠杆菌中BL21(DE3)中,IPTG诱导(终浓度为0.1mmol/L),表达产物进行SDS-PAGE分析.用glutathione sepharose 4B纯化蛋白和Western blot分析该蛋白的免疫学活性.结果表明:pGEX6p-1-ompA以可溶形式表达,蛋白分子量大小为60 kDa,与预计大小相符,纯化的蛋白具有良好的免疫学活性.     

猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型信号标签诱导突变体库的构建

本研究以自杀性质粒pUT携带含有信号标签的Mini-Tn5转座子对猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌进行转座诱变,构建了带有12对特异性信号标签的Mini-Tn5转座子的pUT自杀质粒,转化到供体菌E.coliβ2155后,利用双亲本滤膜杂交法与受体猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌(APP1)进行接合转移,构建并优化了接合转移体系.利用抗性和营养缺陷培养平板筛选得到接合突变体,通过抗性通用引物与12个特异标签引物和胸膜肺炎放线杆菌毒素IV(ApxIV)鉴定引物分别对这些突变体进行了PCR鉴定和测序验证.结果表明,经过加入标签的MinI-Tn5转座子可以通过接合转移的方式从供体菌E.COliβ2155中插入到APP1基因组当中,并成功构建了12个含有特异信号标签的重组质粒,获得了APP1的12个转座突变体库,经筛选鉴定后得到561个突变株.这为研究APP1的功能基因和筛选特定突变株提供了必要的基础.     

禽分枝杆菌副结核亚种重组蛋白r22-ag85B的表达及纯化

为表达并纯化禽分枝杆菌副结核亚种主要抗原基因的串联重组蛋白r22-ag85B,期望研制出一种新型副结核病疫苗,以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增了22KD基因和ag85B基因。采用重叠延伸剪接PCR技术（SOE-PCR）获得了融合基因22-agS5B,将基因连接于表达载体pET32a（＋）,构建了重组质粒pET22-ag85B。将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）中,以IPTG（终浓度1mmol／L）诱导后对表达产物进行Western blot检测。检测结果显示,成功表达并纯化了重组蛋白r22-ag85B,其分子质量约为65ku。Western blot检测表明此蛋白具有良好的免疫学活性。禽分枝杆菌副结核亚种22-ag85B重组蛋白的成功表达及纯化为副结核病疫苗的研究工作奠定了基础。     

三株乳酸杆菌的分离鉴定与益生特性研究

本研究通过分离鉴定猪肠道内乳酸杆菌并对其益生特性进行比较分析,旨在为乳酸杆菌在仔猪饲粮中的应用提供科学依据。试验选取健康猪粪便,利用选择性培养基进行厌氧培养和单克隆纯化,共获得三株乳酸杆菌,通过生化鉴定、16Sr RNA基因序列测定和同源性分析,确定分离菌株分别为植物乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌;采用牛津杯法、活菌计数法和细胞试验等研究三株乳酸杆菌体外抑菌活性、黏附性及竞争性黏附猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)的益生特性。结果表明:与对照组相比,三株乳酸杆菌培养上清液的抑菌圈直径(P0.01)和抑菌效果(P0.01)差异均极显著,并且以植物乳杆菌培养上清液的抗菌效果为最佳;三株乳酸杆菌均可黏附于IPEC-J2细胞,并且以植物乳杆菌黏附IPEC-J2的菌数为最多;与对照组相比,三株乳酸杆菌对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞均具有抑制作用(P0.01),并且以植物乳杆菌抑制黏附的效果最好。     

一起猪链球菌病的诊治

我省某县的个别中等规模猪场饲养的断奶仔猪于2006年12月相继发生一种以高热、跛行和神经症状为特征，致死率很高的急性败血性传染病。与此同时，周边的几个猪场也发生类似发病症状的传染病，给养殖户带来了巨大的经济损失。病死猪送我校传染病诊断中心经流行病学调查，结合临床症状及病理剖检、实验诊断确诊为猪链球菌病。现将有关情况报告如下。     

光照对蛋鸡的影响及对策

光照对蛋鸡来讲是很重要的环境条件之一。实践证明，光照的时间与强度、光线的颜色与波长、光照刺激的起始时间、黑暗期的间断都会在蛋鸡生长发育、繁殖等方面产生重要的影响包括蛋鸡的体成熟、增重、性成熟、开产时间、产蛋率，以及精液的产生与交配活动等方面。人工光照的广泛应用，克服了蛋鸡繁殖生理机能季节性限制，使其遗传潜力能最大限度地发挥出来，增加了蛋鸡的经济效益。一、光照对蛋鸡作用机制一般认为禽类有两个光感受器，一个为视网膜感受器，另一个为视网膜外感受器。后者可能位于下丘脑的深层。光线刺激下丘脑，使之产生和…     

美国七彩山鸡暴发曲霉菌病的诊疗

西峡县某山鸡饲养户饲养美国七彩山鸡800只,1998年6月12日发病,时为8日龄,2天内死亡213只,死亡率26．7％。病鸡主要表现为喘和呼吸困难,剖检死亡山鸡,在肺和气囊内可见到黄白色干酪样结节。根据临床症状。流行病学特点、病理变化及实验室检查,诊断为山鸡曲霉菌病,现报告如下：正临床表现病初精神沉郁,食欲下降,喜卧,对外界反应淡漠。病程稍长的,表现呼吸困难,张口伸颈,可听到气管罗音,食欲消失,饮欲增,咳嗽,打喷嚏,后期伴有黄灰色下痢。病鸡离群独处,闭目昏睡,羽毛粗乱,有的吞咽困难,一般在出现症状后3天内死亡,死…     

大肠杆菌“菌影”的制备

通过PCR扩增噬菌体PhiX174的裂解基因E,将该基因连接到含有PR/cI启动阻遏系统的pBV220载体中,从而使裂解基因E和启动阻遏系统λPL/PR-cI857串联成为温度敏感的裂解盒,构建溶菌质粒pBV-E。采用CaCl2法将其转入大肠杆菌BL21(DE3),含有裂解质粒的大肠杆菌在28℃条件下生长到对数生长期,然后升温到42℃诱导其溶解,制成了大肠杆菌菌影。电镜观察发现菌影形态完整,内容物全部被释放到胞外。     

利用Red重组系统敲除大肠杆菌菌株ClpP基因方法的研究

为了研究ClpP基因的功能,试验利用Red系统的重组功能,通过PCR扩增出两端与大肠杆菌菌株CIpP基因上、下游序列同源,中间为氯霉素抗性基因cat的DNA片段,电击转化含质粒pKD46的大肠杆菌菌株D H091,筛选替换CIpP基因的阳性转化子,再导入质粒pCP20去除氯霉素抗性基因.结果表明:成功敲除大肠杆菌菌株C...     

美国七彩山鸡曲霉菌病的诊治

西峡县某山鸡饲养专业户,饲养美国七彩山鸡800只,1998年6月12日发病,时为8日龄,2ｄ内死亡213只,病鸡主要表现为气喘和呼吸困难,剖检已死山鸡,在肺和气囊见黄白色干酪样结节。根据临床症状、流行病学特点、病理变化及实验室检查,确诊为山鸡曲霉菌病,现报告如下。1　临床症状病初精神沉郁,食欲下降,喜卧,对外界反应淡漠。病程稍长的,表现呼吸困难,张口伸颈,可听到气管罗音,食欲消失,渴欲增加,咳嗽、打喷嚏,后期伴有黄灰色下痢。病鸡离群独处,闭目昏睡,羽毛粗乱。有的吞咽困难,一般出现症状后2ｄ内死亡,死亡率达26.7%。2　病理变化肺、气囊壁上…