水貂阿留申病毒地方强毒株ADV-LN的分离鉴定

本研究采用对流免疫电泳方法(CIEP)检测辽宁水貂养殖场疑似水貂阿留申病毒(aleutian mink disease virus,ADV)水貂血清抗体,采集抗体阳性水貂的肝脏、脾脏、肾脏和肠系膜淋巴结组织,电镜观察存在细小病毒样颗粒。组织液研磨无菌处理后,接种CRFK细胞,盲传6代,取病毒细胞分离液用PCR方法检测,呈ADV阳性。将病毒分离液纯化后接种健康水貂,隔离观察,接种后3 d即出现食欲减退,贫血,被毛无光泽,后期出现拒食、狂饮、死亡,个别水貂出现神经症状,表现抽搐、痉挛、步态蹒跚、共济失调,证明分离获得的病毒为ADV强毒株,命名为ADV-LN株。     

阿留申病毒强致病性毒株非结构蛋白基因的克隆及序列分析

根据Genbank公布的全基因序列设计两对引物,利用PCR扩增技术,得到阿留申病毒非结构蛋白基因ADV-LN1、ADV-LN2,将其克隆至pMD18-T载体中进行序列测定,并与其它国内外毒株的非结构蛋白进行序列比较和分析。序列分析表明,同国外毒株相比核苷酸序列同源率NS1为87.8%～99.1%,NS2为87.7%～98.5%,NS3为85.4%～99.2%;氨基酸序列同源率NS1为82.5%～98.0%,NS2为81.6%～96.5%,NS3为78.2%～98.9%;与国内毒株相比核苷酸序列同源率NS1为91.5%～93.8%,NS2为93.0%～94.7%,NS3为93.5%～96.6%;氨基酸序列同源率NS1为87.4%～89.9%,NS2为87.7%～90.4%,NS3为88.5%～94.3%。系统进化树分析表明:国内流行毒株之间与欧美毒株之间,差异逐渐缩小,遗传变异趋势更加复杂。     

波尔山羊链球菌病的诊治

郑州东开发区某羊场饲养波尔山羊438只,其中成羊226只,羔羊212只,于2003年9月下旬发病,成羊发病26只,死亡5只,羔羊发病38只,死亡12只,经诊断为链球菌病,报道如下:1临床症状病羊病初体温升高到41℃以上,精神萎靡,垂头,弓背,呆立,不愿走动。食欲减退或废绝,反刍停止。眼结膜充血,流泪,随后出现浆液性分泌物。鼻腔流出浆液性脓性鼻汁。咽喉肿胀,咽背和颌下淋巴结肿大,呼吸困难,流涎,咳嗽,粪便有时带黏液或血液。最后衰竭倒地,多数窒息死亡,病程2～3天。2剖检变化剖检新死亡的病羊两只,可见各个脏器广泛性出血,淋巴结肿大、出血。鼻、咽喉和气管…     

水貂阿留申病病毒分子生物学研究进展

水貂阿留申病病毒是一种在水貂中广泛存在的重要病原体.该病毒属阿留申病毒属,主要编码4种蛋白(结构蛋白VP1、VP2和非结构蛋白NS1、NS2).VP1蛋白在协助病毒产生感染性方面起着重要作用;VP2蛋白是该病毒的主要免疫原性抗原,能体外中和病毒;NS1和NS2对病毒在宿主细胞中的复制起重要的调节作用.该病毒的分子生物学诊断技术主要有核酸杂交技术、PCR和基因芯片检测技术.     

水貂阿留申病毒结构蛋白和非结构蛋白研究进展

水貂阿留神病毒是一种在水貂中广泛存在的重要病原体。该病毒属阿留申病毒属,主要编码4种蛋白(VP1、VP2、NS1、NS2)。VP1蛋白在协助病毒产生感染性方面起着重要作用;VP2蛋白是该病毒的主要免疫原性抗原,能体外中和病毒;NS1和NS2对病毒在宿主细胞中的复制起重要的调节作用。为此,综述了国内外关于水貂阿留申病毒结构蛋白和非结构蛋白的研究情况,以期为该病的进一步研究提供参考。     

酶标兔抗鸡IgG的制备

无菌采健康鸡心脏血 ,辛酸—硫酸铵法提取血清IgG ,SephadexG2 5柱层析 ,SDS -PAGE电泳检测IgG纯度 ,分光光度计测定含量 ,透析袋浓缩。与福氏完全佐剂和不完全佐剂乳化后 ,免疫 4只雄性健康家兔 ,1 0d心脏采血。用同样方法纯化兔IgG。过碘酸钠氧化法标记辣根过氧物酶 ,即得酶标兔抗鸡IgG。     

貂阿留申病病毒结构蛋白VP1基因分子特征分析

目的研究貂阿留申病病毒(ADV)结构蛋白VP1基因分子空间结构特征,探讨貂阿留申病病毒致病机制。方法根据Genbank公布的全基因序列设计三对引物,PCR扩增并克隆到pMD-18T载体,阳性重组质粒鉴定、测序验证,拼接后进行生物信息学分析。结果获得了全长2064bpVP1基因,编码688个氨基酸;与细小病毒属中PPV-Nanjing200801相似性最大(51.2%);遗传进化树显示该基因编码蛋白与细小病毒属VP1亲缘关系最近。该蛋白是一种保守不含信号肽的外膜蛋白,具有7个潜在的N-糖基化位点和34个磷酸化位点。二级结构分析显示无规则卷曲含量最高,达68.75%,α螺旋、β折叠分别为16.42%和14.83%;同源建模比对,构建了具有较高合理性和可靠性的三维空间结构。结论预测抗原表位主要位于肽链第254~265、96~112、317~348、514~523、629~645位区段,可为今后开展基因工程疫苗研究奠定基础。     

表达猪圆环病毒2型Rep蛋白的重组杆状病毒的构建与鉴定

猪圆环病毒2型(PCV2)是近年来新发现的引起断奶仔猪多系统衰弱综合征的主要病原,含有两个主要的阅读框ORF1和ORF2,分别编码复制相关蛋白(Rep)和核衣壳蛋白(Cap)。为了探究ORF1基因结构及其与功能的关系,本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统将PCV2的ORF1基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBacTMDual中,获得重组转移载体pFBD-ORF1,再将其转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,经蓝白菌落筛选获得含有ORF1基因的重组穿梭载体rBacmid-ORF1,经脂质体介导转染昆虫细胞sf9,获得重组杆状病毒rAc-Rep,SDS-PAGE和Western-blotting分析可见大小约为36ku的特异性条带,表明rAc-Rep在sf9中成功表达了PCV2Rep蛋白。