环介导恒温扩增技术在动物病原检测中的应用

环介导恒温扩增技术(LAMP)是一种新型核酸扩增技术,是依赖于靶目标上6个区域的4条引物和一种具有链置换活性的DNA聚合酶Bst的作用,在60 ℃～65 ℃恒温条件下1 h之内即可完成的基因扩增技术.该技术虽然起步较晚,但发展迅速,目前在很多领域的研究和应用已经取得很大进展.论文从技术原理、引物设计、反应机制和特点等方面了介绍了环介导恒温扩增技术,并就该技术在动物细菌性病原微生物、病毒和寄生虫检测中的应用做了介绍.     

在前临床期检测金仓鼠羊痒病淋巴结中病理型朊蛋白PrP（Sc）

12只雌性5周龄金仓鼠腹腔注射50μL羊痒病（SCRAPIE）263K株10%的脑组织匀浆。在临床前期,感染后第2、4、6、8、10、12周和临床末期第20周,金仓鼠被分别处死,取大脑、淋巴组织、脾脏、肾脏、肝脏、心脏和肌肉等组织,进行蛋白质免疫印迹杂交实验检测朊病毒病理型朊蛋白PrPSc。研究结果显示在临床前期,通过改进后的纯化技术,我们能够检测出淋巴组织和脾脏组织中的PrPSc,但是在肾脏、肝脏、心脏和肌肉等组织中仍然没有检测到PrPSc。     

牛朊蛋白和酵母朊毒体结构域融合蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

利用DNA重组技术将酵母Ure2p朊蛋白结构域(UPD)基因插入牛朊蛋白(BPrP)表达质粒pET-PrP中,构建原核表达载体pET-PrP-UPD.阳性质粒转化宿主菌BL21 (DE3),在IPTG诱导下获得高效表达.Westernblot检测表明表达的重组蛋白与单克隆抗体6H4呈现特异性反应,且纯化的PrP-UPD融合蛋白在体外具有聚集成淀粉样纤维、抵抗蛋白酶K消化等朊毒体的结构特点.利用纯化的PrP-UPD免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经克隆和筛选,获得3株稳定分泌抗重组PrP单抗的杂交瘤细胞,分别命名为1G3、3A4、4D1,其中1G3分泌的单抗能识别细胞型牛朊蛋白,其Ig亚类为IgG2b,腹水ELISA效价为1×105,Western blot表明该单抗具有较强的特异性.     

非典型牛海绵状脑病研究进展

非典型牛海绵状脑病为新发现的一种朊病毒病,通常发生于老牛,与典型牛海绵状脑病在病理表型、分子表型和生物表型方面不同。本文结合已发表的文献,对非典型牛海绵状脑病的发现、病原特性、流行病学、检测、发病机理、动物模型研究和实验感染等方面的最新研究进展进行了概述,以期增强人们对该病的认识,并为我国防控该病提供借鉴。     

我国地方品种牛PrPc基因序列多态性分析

牛海绵状脑病(BSE)俗称疯牛病,自1985年首次在英国发现以来,其研究就受到世界各国的高度重视[1]。BSE病原是一种朊病毒,与羊痒病(Scraipe)、人新型变异型克雅氏症(vC JD)、鹿慢性消耗性疾病(CW D)相同,是一种神经退化性疾病,引起患病动物的意识障碍和运动功能衰退直至死亡[1~3]     

疯牛病感染因子的检测

研究目的是对北京某公司研制的一种牛血源性生物制品进行疯牛病感染因子的检测。通过对供体牛及其产地牛进行疯牛病流行病学调查及免疫细胞化学、Western blot和组织病理学检测，确认这些供体牛没有感染疯牛病，以其血液作为原料研制的生物制品没有携带疯牛病病原的危险，本研究也为在我国进一步建立牛源性药品、生物制品中疯牛病感染因子的检测和评估提供了科学资料。     

口蹄疫和水疱性口炎检测方法研究进展

口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)与水疱性口炎(Vesicular stomatitis,VS)在临床症状上十分相似,无法通过临床诊断进行区分,因此用实验室方法对两种疾病进行鉴别诊断和病毒分型就变得十分重要。此外,动物可能由于易感性较低或者获得部分免疫导致无症状或症状不明显,因此需要建立多种检测方法以对临床病例进行确诊,鉴别感染后康复动物以及无明显临床症状的病例。     

动物感染性病实验室诊断方法的确认

准确诊断是及时防治动物感染性疾病最基本的要求,而能否得出准确的诊断结果,所使用的诊断方法本身是否经过确认,关系到诊断结果是否具有法律效力的问题。在国际贸易中,只有采用经过国际间实验室确认     

一种新的禽白血病-骨髓细胞瘤病

80年代末,英国开普敦动物保健研究所D·N·Payne及其同事首次从肉种鸡群中分离出一种新型的禽白血病病毒。由于这种病毒的囊膜特性不同于已知感染鸡的禽白血病病毒的5种亚型(A～E),也不同于其他禽类体内发现的禽白血病病毒的4种亚型(F～Z),因而定名为禽白血病病毒J亚型(Av...     

饲料中牛羊源性成分PCR方法定性检测能力验证计划的实施和结果研究

"饲料中牛羊源性成分PCR方法定性检测"是由国家认证认可监督管理委员会(CNCA)组织的A类能力验证计划.通过对本次能力验证计划的实施和对结果的分析研究,了解了国内饲料中牛羊源性成分PCR检测领域的整体水平以及各实验室在检测中存在的差异.