禽流感疫苗(H5)免疫程序与抗体水平的分析

禽流感(AI)是由A型流感病毒感染引起的一种禽类传染病,同时也可以传染给人类,有着重要的公共卫生意义。为了有效预防和控制高致病性禽流感的发生和流行,同时也为了确保供港澳活鸡在出栏时,H5亚型禽流感抗体水平达到港澳的要求,根据供港澳麻黄鸡品种一般在90天龄到105天龄出栏的饲养特性,开展禽流感(H5)疫苗免疫程序的研究。对供港澳活鸡饲养场的实际应用,结合实验结果制定麻黄鸡品种的最佳免疫程序,目的是供港活鸡在出栏时既符合港澳政府的检疫要求,又符合高致病禽流感防制的需要。1材料与方法1.1试验用三黄鸡全来自广东省中山市某种鸡场…     

禽流感疫苗对水禽免疫效果观察

广东省是我国供港澳水禽及产品出口的主要养殖和加工基地,如何解决水禽免疫及水禽免疫带毒问题,探索科学的检疫对策以降低检疫风险是我们的工作目标.本课题的研究是基于检疫业务的需要,通过结合实际工作开展对水禽的检疫风险分析.     

供港活猪4种疫病抗体水平监测及免疫效果分析

为掌握广东惠州地区供港活猪主要疫病的免疫状况,我们对供港活猪主要疫病抗体水平作了一次跟踪监测,并对免疫效果进行了分析.2012-2014年,分5次共采取了900头供港猪血清,采用ELISA方法对猪瘟、猪繁殖与呼吸障碍综合征、伪狂犬病、0型口蹄疫的抗体水平进行检测.结果显示,猪瘟抗体免疫合格率在68.9％ ～78.3％之间,口蹄疫在67.2％～82.8％之间,免疫效果不理想;猪繁殖与呼吸障碍综合征抗体免疫合格率在73.9％～ 92.8％之间,伪狂犬病在86.7％ ～ 93.9％之间,免疫效果较理想.     

IBV S1蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

采用RT-PCR方法,以IBVM41毒株的S1基因为模板扩增出了大小为468bp的目的片段(命名为poly156S1),该片断保守性、抗原性较好。将获得的目的基因定向克隆到表达载体pET-32a-c(+)中,获得了重组质粒pET-32a-c(+)-poly156S1。将该重组质粒转入表达菌Origami(DE3)中,用IPTG进行诱导表达,获得了大小约为34KD的重组蛋白poly156S1。Western-blot证实该重组蛋白能与IBV阳性鸡血清发生特异性反应。用纯化好的重组蛋白poly156S1免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行单克隆抗体的制备,成功获得了针对M41S1蛋白的3株单克隆杂交瘤细胞8D2、8D6、10F9,其IgG亚类分别为IgG1、IgG2a、IgG2b,轻链均为κ型。按常规方法对各株单克隆杂交瘤细胞进行了小鼠腹水单抗的制备与纯化,并用以重组蛋白poly156S1为包被抗原的间接ELISA对纯化后的腹水单抗进行了效价测定,及其与重组蛋白poly156S1亲和力的分析。结果表明:腹水单抗8D2、8D6、10F9的ELISA效价分别达到1.78×218,1.37×221,1.31×216;单抗8D6与重组蛋白poly156S1的亲和力最高。Western-blot进一步证实单抗8D6与重组蛋白poly156S1具有良好的反应性。     

猪嗜淋巴疱疹病毒3型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

依据GenBank公布的猪嗜淋巴疱疹病毒3型(porcine lymphotropic herpesviruses 3,PLHV-3)DNA序列,设计特异性引物,优化反应条件,建立荧光定量PCR方法,并对方法的灵敏度、特异性和重复性进行试验。得出方法的线性范围为:8.2×101~8.2×107,灵敏度可达82个拷贝,方法的特异性高,只能检测pMD18-T/PLHV3重组质粒,另外5种对照病原均未检出;方法的重复性好,对不同浓度的pMD18-T/PLHV3重组质粒分别扩增6次,结果重复性好。使用建立的方法检测100份临床样品,同时与普通PCR方法比较,显示荧光定量PCR检出率比普通PCR高,具有较高的灵敏度和准确性。结果表明:建立的荧光定量PCR可用于PLHV-3的临床快速诊断。     

LC-MS/MS测定猪尿中的黄曲霉毒素M1

建立LC-MS/MS检测猪尿中黄曲霉毒素M1的含量。猪尿样用超纯水稀释定容,充分漩涡振荡后经免疫亲和层析柱净化,甲醇洗脱,微孔滤膜过滤,经液相色谱分离,电喷雾离子源离子化,多反应离子监测(MRM)方式检测。外标法定量。采用0.1%甲酸:乙腈+甲醇溶液(1+1)为流动相,梯度洗脱。0.3mL/min的流速。在0.01μg/kg～0.50μg/kg范围内具有良好的线性关系,最低检测限为0.01μg/kg,回收率在70%～95%之间。此法操作简便、快速、灵敏、准确、样品处理简便易行,适用于测定猪尿中的黄曲霉毒素M1。     

家禽啄癖的病因分析和防治

啄癖是家禽一种异常的嗜好。患啄癖的家禽啄食羽毛、肌肉、蛋品和其他异物。鸡群发生啄癖后会降低商品肉禽的级别,增加蛋品的损耗和家禽的死亡率,在经济上造成较大的损失。1.发病情况2001年10月至12月期间,惠州地区某商品鸡养殖场的鸡群发生了较为严重的啄癖。全场鸡只存栏量15万多只,共18栏。饲养方式是平养,鸡舍一半水泥地板,一半用栅木架搭棚,离地面40厘米。据统计,在两个月里共有1700多只(不计鸡只感染了传染病后,因啄癖加速其死亡的个数在内)鸡死亡,鸡群中发生不同程度啄癖的鸡只达11000多只,多发生在25～40日龄和60～75日龄两个阶段。…     

浅谈畜禽场苍蝇的防治

随着我国畜牧业的发展,集约化畜禽养殖生产场的不断增多,特别是一些较小型的个体养殖生产场,由于不注重畜禽排泄物的无害化处理,再加上有的养殖场又离居民区较近,畜禽场对周围环境的污染程度日趋严重,导致有害生物的孳生,其中苍蝇就成了一个非常严重的问题。一到春、夏季,苍蝇就开始在畜禽场被污染的地方孳长,对生产区的畜禽及附近生活区的工作人员造成威胁。一、苍蝇的习性1.苍蝇是完全变态的昆虫,它的生活史可分为卵、幼虫(3个龄期)、前蛹、蛹、成虫几个时期。苍蝇的寿命虽然只有1个月左右,但其繁殖力之强,却很惊人。据统计,一只雌蝇可产…     

猪博卡病毒的基因分型

为了解猪博卡病毒(PBoV)的遗传进化规律,研究可行的PBoV基因分型方法,本研究利用Gen Bank中登录的29条PBoV和2条本实验室测得的全基因组序列信息,采用生物信息学软件进行基因组序列分析。结果显示,分别以NS1基因、NP1基因和VP1基因编码氨基酸构建的系统进化树,PBoV均被划分为3个基因群,但三种氨基酸序列绘制的进化树存在差异;基因群内各病毒株的氨基酸序列同源性较高,而各基因群之间病毒株的氨基酸序列同源性非常低,基因组结构差异较大。     

浅析家禽免疫失效的原因

免疫接种是禽病综合预防措施中的重要一环 ,也是预防传染病的重要措施。但在生产实践中 ,接种疫苗后未能获得满意的兔疫效果则时有发生 ,原因可能是多方面的 ,现归纳如下 :1疫苗质量疫苗质量不符合标准 ,如病毒或细菌的含量不足、冻干或密封不佳、油乳剂疫苗水分层、氢氧化铝佐剂颗粒过粗等。疫苗在运输或保管过程中因温度过高或反复冻融而疫苗效价降低或甚至失效 ,油佐剂疫苗被冻结或疫苗已超过有效期等。2疫苗选择疫病诊断不准确 ,造成使用的疫苗与发生的疾病不对应 ,例如 ,鸡群患了传染性喉气管炎却使用新城疫疫苗等。再就是弱毒活疫苗或…