酵母单杂交文库构建及巨峰葡萄VvFT基因启动子上游调控因子筛选

[目的]利用酵母单杂交文库筛选巨峰葡萄VvFT基因启动子上游调控因子,挖掘参与调控葡萄开花时间的因子,为揭示花期转变代谢通路和定向改良葡萄品种提供理论参考.[方法]利用PlantCARE分析预测VvFT基因启动子顺式作用元件,并以VvFT基因启动子为诱饵,利用酵母单杂交文库筛选技术,筛选作用在VvFT基因启动子上游的调控因子.[结果]葡萄VvFT基因启动子区域存在13种启动子顺式作用元件,包括A-box、CAAT-box和TATA-box组成型调控元件;光响应调控元件ATC-motif、Box 4、G-Box和GT1-motif;茉莉酸甲酯(MeJA)响应调控元件CGTCA-motif和TGACG-motif;干旱诱导的MYB结合位点元件MBS;玉米蛋白代谢必需的调控元件O2-site;参与生物钟控制的调控元件circadian;厌氧诱导必需调控元件ARE.以VvFT基因启动子为诱饵,筛选获得34条表达序列标签(EST),其中有21条为未知功能,有13条在植物生长、抗逆防御、信号转导、转录调控、蛋白酶等方面均有已知或预测的功能,包括转录抑制因子ft41、GRF1互作因子ft44、NAP1相关蛋白ft64及ft70分子伴侣DnaJ10.酵母单杂交点对点验证结果表明VvDnaJ10和VvFT基因启动子之间有相互作用.[结论]通过酵母单杂交文库筛选获取13条候选EST,虽然大部分EST功能预测分析结果与VvFT调控开花时间无明显的直接关系,但研究结果为进一步探索VvFT转录或表达水平控制葡萄开花时间的分子机制提供侯选基因.     

3株鸽源新城疫病毒的分子特征及对鸽的致病性

2011―2013年在新城疫流行病学调查中分离到3株鸽源新城疫病毒(SDS,SD01和SD02),为了进一步了解其生物学特性和遗传进化规律,对3株病毒进行了测序和生物活性分析,并对分离株SDS对鸽的致病性进行了评价。结果表明,毒株SDS基因组全长为15192 bp,基因排列方式为3′-NP-P-M-F-HN-L-5′,3个分离株F蛋白裂解位点氨基酸序列均为¹¹²RRQKRF¹¹⁷,具有典型的新城疫强毒的分子特征。系统进化分析表明这3个毒株与基因Ⅵ型NDV毒株聚于一簇,属于ClassⅡ系Ⅵb基因型。3个分离株F蛋白的融合肽和七肽重复区,HN蛋白的抗原中和表位存在多处突变,与单克隆抗体1E5、2F10的反应性也发生改变,表明3个分离株与疫苗株LaSota有明显的抗原差异。SDS攻毒试验结果显示,试验鸽自攻毒后5 d出现明显的临床症状,滴鼻组和肌肉注射组的死亡率分别为60%和70%;病死鸽剖检可见脑膜充血出血,腺胃乳头、腺胃肌胃交界及肠道出血,肝脏肿大,脾有淤血斑。滴鼻组在攻毒后5~14 d于喉头和泄殖腔检出排毒,而肌肉注射组在攻毒后3~14 d于喉头和泄殖腔有排毒。     

基于生存分析模型MMP11基因表达与胃癌放疗敏感性研究

采用TCGA公开的胃癌数据库,随机将371个胃癌数据等分为2份,1份作为测试数据,1份作为验证数据,分析基质金属蛋白酶11(MMP11)基因表达与预后的关系,探讨低表达MMP11与胃癌的放疗敏感性关联度。结果表明:MMP11表达与胃癌患者的总生存无显著差异;无论是测试数据还是验证数据,高表达MMP11胃癌患者在放疗与非放疗组间总生存差异不显著,多因素调整后也无显著差异;而MMP11低表达的胃癌患者,接受放疗比未接受放疗的患者获得显著的生存收益,多因素调整后仍具有显著差异,说明低表达MMP11与胃癌的放疗敏感性存在显著关联,提示MMP11是胃癌精准放疗潜在有效的分子标记物。     

曲阜市古树名木有害生物综合防控技术研究

曲阜为鲁国故都,孔子故里,其文化积淀浓厚,近年随着山东省人民政府的大力开发,旅游业蓬勃发展,其存有的千年古树,珍稀树种为曲阜市增添了独特光彩,是极其珍贵的历史遗产,是绿色文物、活的化石,但随着其他树种的引入与移栽,一些新的有害生物亦随之而来,治理不当必将在一定程度上对古木造成伤害,因此,必须从农业生态系统总体观出发,着眼于该地的生物群落,在不破坏生态平衡的前提下,贯彻落实国家下达的保护政策,对有害生物进行科学治理,利用有害生物与自然界的关系,通过自然界自身的净化功能,因地制宜加入人为治理手段,在经济损失可承受范围内,实现生态、环境、经济效益和谐统一。因此在有害生物治理过程中,以治理单一病虫为对象的防治方法已经具有局限性,必须从全局入手,将一个生态系统中的生物因素均考虑到位。     

'云田彩桂'组织培养研究

通过对'云田彩桂'不同树龄植株采集的外植体进行组织培养技术研究,结果表明:春季采取'云田彩桂'3y的幼嫩枝条作外植体较好,这是因为在幼树当年生枝条中所含的有毒有害物质及酚类化合物较少,能有效降低褐化率和污染率.最适宜的消毒剂及消毒时间为:75％酒精1min,0.1％的氯化汞溶液消毒10min,成活率达46.5％.在增殖阶段为防止无菌苗褐化及提高增殖系数,采用MS+6-BA1.0/L+NAA0.1mg/L+Vc 20mg/L的培养基配方,能有效减少褐化率,并提高增殖系数至2.02.     

PVX病毒载体介导2种马铃薯Y病毒科病毒VPg蛋白表达诱导烟草叶片系统坏死的研究

芜菁花叶病毒（Turnip mosaic virus, TuMV）和槟榔坏死环斑病毒（Areca plam necrotic ringspot virus, ANRSV）是马铃薯Y病毒科（Potyviridae）中分别可诱导十字花科作物和槟榔产生坏死病症的2种不同属病毒。VPg（Viral protein genome linked）作为与马铃薯Y病毒科病毒基因组5′端的结合蛋白,在病毒复制、翻译和运动等侵染过程中发挥重要作用。本研究利用In-Fusion克隆策略分别构建了可表达3′端融合Strep蛋白标签序列的ANRSV和TuMV VPg全长编码基因的马铃薯X病毒（Potato virus X, PVX）载体pPVX-VPg-AR和pPVX-VPg-Tu。通过农杆菌渗透注射接种本生烟（Nicotiana benthamiana）,利用RT-PCR、Strep蛋白标签亲和层析和Western blot等方法证明了PVX病毒载体能够介导VPg-AR和VPg-Tu蛋白在本生烟中系统表达,且发现这2种VPg蛋白的过量表达诱导本生烟叶片产生了不同程度的系统性坏死病症。进一步采用DAB和NBT染色,在产生坏死症状叶片中检测到大量活性氧（reactive oxygen species, ROS）的积累。因此,推测VPg可能是TuMV和ANRSV诱发植物病症产生的一个决定因子,为后续研究这2种病毒诱导症状形成机制奠定了基础。