犬瘟热的微生物学诊断研究

对临床诊断为犬瘟热的１４例病犬，取其脑组织，运用细胞培养、合胞体检查、包涵体检查、免疫荧光试验、电镜观察等５种检测方法，就犬瘟热的微生物学诊断进行了系统的研究。结果表明，犬脑组织块与猫胚（ＦＥ）细胞或非洲绿猴肾（Ｖｅｒｏ）细胞共同培养，盲传的培养物出现不稳定的细胞病变，通过对不同代次的培养物检查包涵体，并作超薄切片或负染，电镜观察犬瘟热病毒（ＣＤＶ）粒子，证实分离到ＣＤＶ野毒。病犬脑组织切片经ＨＥ染色检查包涵体及用ＣＤＶ荧光抗体直接法检测脑抹片及接种犬脑的细胞培养物，均获得一定的阳性结果。建立的改良离子捕获电镜法，用于检测犬脑匀浆和犬脑接种细胞培养物，与离子捕获电镜法、免疫电镜法及直接电镜法相比，效果更为理想。１４例临床诊断为犬瘟热的病犬，综合运用上述微生物学手段检测，结果为１２例阳性，２例疑似。     

犬瘟热病毒及新近发现的相关病毒

犬瘟热病毒（CDV）与新近发现的海豹瘟病毒1型（PDV－1）和海豹瘟病毒2型（PDV一2）这三种病毒均属于副粘病毒科麻疹病毒属的成员．病原特性极为相似。人们发现犬瘟热病毒至少已有两个世纪（Jenner，1809），而PDV－1，PDV－2则是近些年才报道的。1988年丹麦和西北欧的海豹群暴发了传染病，引起港湾海豹（PhocaVitulina）及发海豹的大批死亡”’，据研究确是其病原为PDV－1。次年，海豹瘟又在前苏联的贝加尔湖流行起来，病原为PDV一2。这两种类型的海豹瘟临床症状及病理变化极象犬瘟热，海豹感染后体内也出现CDV中和抗体。这三种…     

猪传染性胃肠炎病毒反向遗传研究进展

从猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的分子生物学特性、TGEV的反向遗传系统的建立及其在TGEV研究中的应用等角度对国外TGEV反向遗传研究进展作一综述。TGEV全长基因组反向遗传系统的成功建立,极大推动了TGEV的复制机制、基因功能及作为疫苗开发的表达载体的研究。     

猪IL-15 cDNA真核表达载体的构建、表达及其免疫佐剂效应

参考GenBank发表猪IL-15mRNA序列设计引物,用RT-PCR方法扩增猪IL-15cDNA,并克隆到pMD18-T载体中,通过PCR、酶切和测序验证克隆正确,再亚克隆到真核表达载体pcDNA-3.1（＋）上,得到重组质粒pcD-NA-pIL-15。在脂质体介导下,重组质粒pcDNA-pIL-15转染AD-293细胞。以鼠抗猪IL-15为一抗,用间接免疫荧光分析表明猪IL-15基因均在AD-293细胞中成功进行了瞬时表达。小鼠免疫试验表明,pcDNA-pIL-15作为免疫佐剂,能够有效提高小鼠的脾T细胞增殖,加强pcDNA-ORF2（PCV2）质粒免疫过程中的特异性中和抗体的产生,为进一步研制猪IL-15基因佐剂疫苗及进行临床实验奠定基础。     

猪瘟病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

本研究设计了4条针对猪瘟病毒6个位点的特异性引物,建立了一种灵敏、特异、快速的猪瘟病毒体外等温扩增(RT-LAMP)检测方法,所建立的方法能够特异地检测出猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的存在,检测PRV、PRRSV、PCV-2等病毒均为阴性;灵敏度高,所建立的CSFV-RT-LAMP方法灵敏度为10-5,总RNA的检测阈值约为1pg;反应快速,整个扩增反应可在1h内完成;操作简单,不需要PCR仪等复杂的仪器,结果可经肉眼观察及电泳检测。本试验为猪瘟的现场快速检测提供更加简便、快速的方法,可以满足基层检疫的需要。     

鸭白细胞介素-2基因在毕赤酵母中的表达

根据GenBank中登录的鸭IL-2基因序列设计并合成了1对特异性引物,以经ConA诱导的广州鸭外周血淋巴细胞提取的总RNA为模板,用RT—PCR方法扩增出长度为360bp的目的基因片段,并将该基因克隆到pMD18-T载体上。酶切鉴定、PCR鉴定及序列测定结果表明,获得了鸭IL-2成熟蛋白基因的完整克隆。测序结果表明,该成熟蛋白基因由360个核苷酸组成,共编码119个氨基酸。克隆的鸭IL-2基因与GenBank上序列号为AY173028及AF294322的鸭IL-2基因的同源性高达99．4％。将目的基因克隆至真核表达载体pPICZαC上,构建了重组质粒pPICZαC—DuIL-2。酵母转化子经甲醇诱导发酵分泌表达了鸭IL-2基因。SDS-PAGE分析证实,鸭IL-2基因在毕市酵母（Pichiapastoris）中表达成功,表达的重组蛋白的分子质量约为14．3ku。     

猪呼吸道冠状病毒研究进展

综述了猪呼吸道冠状病毒(PRCV)的病原学意义、分子生物学特性、与传染性胃肠炎病毒TGEV的鉴别诊断、PRCV对TGEV的免疫保护作用等四个方面的研究进展。     

表达牛分枝杆菌MPB83基因重组腺病毒的构建

以牛分枝杆茵Vallee III株基因组DNA为模板,应用PCR扩增获得MPB83基因,克隆后.亚克隆至腺病毒穿梭栽体pShuttle-CMV中,构建的重组穿梭质粒pShuttle-CMV-MPB83经Pme I酶切,转化含腺病毒骨架质粒pAdeasy-I的BJ5183-AD-1感受态细胞,经同源重组获得复制缺陷型重组腺病毒载体pAd-CMV-MPB83.Pac I酶切线性化该质粒,转染AD-293细胞进行病毒包装,转染细胞10 d后出现细胞病变(CPE).PCR、RT-PCR、western blot检测到重组病毒含MPB83基因并成功表达.     

鸭白细胞介素-2基因克隆、原核表达及生物学活性检测

根据GenBank发表的鸭白细胞介素-2(IL-2)基因序列设计并合成了特异性引物,以经ConA诱导的广州白鸭外周血淋巴细胞提取的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出长度为360 bp的目的基因片段. 将该基因克隆到pMD18-T simple vector上,经酶切、PCR鉴定及序列测定,结果表明获得了鸭IL-2成熟蛋白基因的完整克隆. 构建的表达质粒pET-IL-2经BamHI、XhoⅠ双酶切鉴定构建正确;经SDS-PAGE分析,在约33 000处出现新的蛋白条带,Western-blotting分析表明,融合蛋白能够被抗His单克隆抗体识别,体外活性检测表明,重组蛋白具有促进淋巴细胞增殖的活性.     

牛结核病疫苗的最新研究进展

牛结核病是由牛分支杆菌所引起牛的一种慢性消耗性疾病,并可传染人类.实施牛结核病免疫接种是大多数国家控制结核菌流行的重要措施.在过去十年中,大量的候选疫苗用于牛的测试,但效果不一.卡介苗(BCG)与DNA疫苗、蛋白质分子疫苗等联合运用显示了相当好的前景,研制能鉴别诊断牛分枝菌感染和BCG免疫的试剂盒已成为其发展趋势.