副溶血弧菌检测技术的研究进展

副溶血弧菌引发食物中毒的规模呈明显的上升趋势,目前已超过沙门氏菌食物中毒,跃居首位。因此需要从多方面加强检测,以防止该菌对食品造成的大面积污染,保证人的身体健康。为此本文全面介绍了副溶血弧菌的各种检测方法,包括:传统方法,免疫学方法,分子生物学技术,传感器技术等,为副溶血弧菌的检测提供理论依据。     

猪瘟病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立和初步应用

根据GenBank已发表的HCV 5’NTR核苷酸序列设计一对特异性引物,扩增位置在整个基因的221～377位,片段长度为167bp。提取由厦门出入境检验检疫局技术中心动物实验室保存的HCV细胞毒的RNA,并反转录成cDNA,以此cDNA为模板建立了SYBR Green I实时定量PCR检测猪瘟病毒的方法,并用该方法检测送检的临床疑似病料。结果表明：本研究建立的HCV-SYBR Green I PCR特异性强,与FMDV、PCV2、PRRSV、PPV、PRV等常见猪病毒病病原没有交叉反应;灵敏度高,可以检测到5．3×10^2的病毒拷贝数;操作简单,耗时短,只需3h即可完成整个试验过程,可初步用于临床检测。     

MALDI-TOF-MS用于微生物鉴定的影响因素分析

影响MALDI-TOF-MS微生物鉴定的因素有很多。本研究主要从微生物培养基、培养状态、菌体前处理、上样量等方面进行MALDI-TOF-MS操作技术和方法的探讨。研究结果显示:进行MALDI-TOF-MS细菌鉴定,培养时间在4～24 h之间为佳;尽量选择无色、不含盐的液体培养基;0.1μL菌液是最低鉴定菌量;上样量对结果无影响;对于菌体前处理,除按照标准化前处理程序操作外,也可将菌体加dd H2O制成混悬液进行点靶鉴定,这样更加简便。本研究有助于减少MALDI-TOF-MS操作盲目性,提高鉴定质量,利于操作的规范化和简便化。     

猪场常用消毒剂对沙门氏菌等细菌的作用效果试验

为了解目前猪场常用消毒剂对猪场常见肠道致病菌的杀菌作用,开展了5种猪场常用消毒剂(特碘、复合醛、消特灵、氢氧化纳和高锰酸钾)杀灭5种猪场常见肠道致病菌(沙门氏菌、大肠杆菌、奇异变形杆菌、弗氏枸橼酸杆菌和绿脓杆菌)最低浓度(M BC)的试验,依次为1∶600~1∶800,1∶1000~1∶2500,1∶30000~1∶40000,0.01%~0.03%,0.0008%~0.004%。观察温度对各种消毒剂作用沙门氏菌M BC的影响,结果表明,温度越高,特碘的M BC也越高,复合醛则越低,而其他3种影响不大;固定各种消毒剂浓度所能杀灭的最高沙门氏菌浓度,均能达到106个.m l-1以上,两种消毒剂配合使用效果不一。同时还检测了终止和不终止消毒剂作用对杀菌效果的影响不大,并对猪场用药提出几点建议。     

台湾输入甲鱼中检出O1群霍乱弧菌

将甲鱼体表涂抹物在碱性蛋白胨水中进行增菌培养,分离单菌落后分别用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)、血清学方法及PCR进行鉴定,结果从台湾输入大陆的甲鱼中检出O1群稻叶型霍乱弧菌一株,不含ctx基因和toxR基因。为此,应加强水产品尤其是甲鱼的监测工作,防止霍乱弧菌在不同地区间的传播和流行。     

赤羽病SYBR Green I实时荧光PCR方法的建立和应用

本研究根据赤羽病毒（AKAV）的S基因序列设计合成了引物, RT-PCR扩增得到目的基因片段并克隆到PGM-T载体得到质粒标准品。通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了SYBR Green I荧光定量PCR检测AKAV的方法。该方法的检测敏感性达到926拷贝/25μL,并具有较好的重复性和特异性。本试验方法的建立对于加强进出口牛AKAV的检验检疫具有十分重要的意义。     

纳米胶体金免疫标记技术在牛病检测中的研究和应用

作者综述了以胶体金免疫渗滤法和胶体金免疫层析法为代表的纳米胶体金免疫标记技术近年来在牛病检测方面的研究和应用进展,并分析和预测其应用前景,为该技术在牛病临床检测领域的进一步研究与应用提供参考。     

副溶血弧菌和溶藻弧菌双重PCR检测方法的建立与初步应用

为建立同时快速检测海产品中的副溶血弧菌(VP)和溶藻弧菌(VA)的双重PCR方法,本研究根据VP和VA的toxR基因序列设计针对这两种细菌的两对特异性引物,建立能够快速同时检测这两种细菌的双重PCR方法,并对该反应体系的特异性和灵敏度进行检测。结果显示纯培养细菌VP和VA的检测灵敏度分别为2.32×103cfu/mL和2.56×103cfu/mL,临床病料检测灵敏度分别为2 cfu和3 cfu;与枸橼酸杆菌、沙门氏菌、美人鱼弧菌、霍乱弧菌、麦氏弧菌无交叉反应。研究表明本实验方法操作简便快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好,并且经济实惠,值得推广应用。     

纳米金PCR技术检测副溶血弧菌方法的建立与初步应用

纳米金PCR是在普通PCR基础上发展起来的新技术,它能够明显提高普通PCR的灵敏度和特异性。根据副溶血弧菌(VP)的toxR基因序列,应用primer6.0设计一对特异性引物,建立了纳米金PCR方法,并对该方法的最佳反应条件、循环数、特异性和灵敏度进行测定。采用2.0%琼脂糖电泳进行检测,结果表明能扩增得到与试验设计相符的208bp(VP)的特异性条带;与溶藻弧菌、霍乱弧菌、麦氏弧菌、沙门氏菌、枸橼酸杆菌没有交叉反应;纯培养细菌检测灵敏度为3cfu/反应体系。与普通PCR法进行比较,该方法检测灵敏度比普通PCR高10倍。经临床检测,从150份带鱼、鱿鱼和鱼粉中检出5份阳性样品,与常规细菌分离鉴定方法符合率100%。该试验方法的建立对于加强进出口水产品中VP的检验检疫具有十分重要的意义。