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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的表达和重组蛋白的纯化及免疫学活性分析 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]在基因工程菌中实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的高效表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其免疫学活性及应用价值。[方法]将已构建好的重组表达载体pET-ORF7转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG在最适条件下诱导表达,其表达产物用SDS-PAGE和Western Blot进行检测。应用Ni-NTAHis.Bind Resin层析柱在变性条件下纯化表达产物,通过梯度透析进行复性。采用Western Blot及间接ELISA法检测复性后重组蛋白的免疫学活性。[结果]重组质粒pET-ORF7在大肠杆菌中以融合形式成功表达,融合表达产物主要以包涵体形式存在。SDS-PAGE检测所表达的重组蛋白分子量为33 kD左右,与预期大小相符。Band-scan软件对表达蛋白分析发现,表达产物约占菌体蛋白的50%。Western Blot及间接ELISA法显示复性后的重组蛋白与PRRSV阳性血清有特异性结合反应,表明其具有良好的免疫学活性。[结论]该试验将为进一步研制PRRSV单克隆抗体及诊断试剂盒奠定基础。 相似文献
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根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF6基因序列,设计合成一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORF6基因(M基因)。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF6重组质粒转化DH5a宿主菌后,经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆测序鉴定并对插入的ORF6基因序列进行分析。结果表明,ORF6基因的原核表达载体构建成功。ORF6基因推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为96.0%~100%,与LV株的同源性为79.9%,系统进化树表明该PRRSV属于美洲型。将构建成功的重组质粒pET-ORF6转化BL21,诱导后经SDS-PAGE和Western-blot分析表明:克隆在HIS标签的膜基质蛋白基因与HIS获得了高效表达,表达的融合蛋白HIS-M分子量约为39kDa,并且有免疫学反应活性。 相似文献
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继发性IDD常无特征性临床症状和病理变化,临床上仅表现猪禽发育不良、抵抗力低下、对特定疫苗无免疫反应,易反复感染、多重感染且治疗效果不佳,但其威胁是存在着机会性感染而引起严重后果。猪禽继发性IDD的原因非常复杂,包括感染性因素和非感染性因素,其中感染、淋巴组织来源的恶性肿瘤、细胞毒药物、某些抗茵药物及应激则是重要因素。而感染尤其是病毒性感染又是最重要、最常见、最严重的因素。专家指出,一些病毒感染猪或禽后,虽然有些耐过不死,但却对免疫系统造成了程度不同的损伤,引起暂时性或永久性的免疫缺陷。病毒对肌体的免疫损伤主要表现在干扰免疫系统对抗原的提呈;抑制自然杀伤细胞(NK)的功能及吞噬细胞吞噬功能和灭菌能力;通过干扰淋巴因子的生成、淋巴介导信号和淋巴因子效应功能而抑制淋巴因子的作用,通过干扰抗体反应功能和补体反应功能而逃避体液免疫反应对其作用,从而使接种疫苗效果甚微或无效,导致免疫防疫无法实现,例如患猪因免疫缺陷可继发其他疾病,猪瘟的继发感染是造成乳猪和保育猪高死亡率的主要原因;继发Ⅱ型环状病毒感染是造成保育后期猪至生长前期猪(7周龄~13周龄)死亡率升高的原因。Ⅱ型环状病毒也是中大猪呼吸道疾病综合征的重要病原之一;猪副嗜血杆菌的继发感染,是造成10周龄以前的小猪死亡率升高最重要的细菌性致病因子,而猪副嗜血杆菌的严重感染又成为蓝耳病存在的“指示病”。进而加重病情,使死亡率明显上升,因此,猪继发性IDD可造成养殖企业(户)损失惨重。及时、准确首诊和防制猪、禽病毒性传染病,以防止继发性免疫缺陷病已显得十分重要。
本文中就猪、禽继发性免疫缺陷病(IDD)降低猪禽免疫功能,抑制特定疫? 相似文献
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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的表达和重组蛋白的纯化及免疫学活性分析 总被引:9,自引:1,他引:8
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为不分节段、聚腺苷酸化、有囊膜的单股正链RNA病毒。其基因组长约15kb,含有8个开放的阅读框架(ORFs)。PRRSV基因组的顺序依次为:5’-ORFla-ORFlb-ORF(2—6).ORFT-3’。鲁韦韦等分析表明,PRRSV的ORF7基因保守性较好,变异较小。此外,ORF7编码的核衣壳蛋白(N蛋白)具有良好的免疫原性及反应原性,机体产生的PRRSV抗体主要是针对N蛋白的。因此,N蛋白常可作为诊断抗原来检测PRRSV。 相似文献
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<正> 近几年来,商品瘦肉猪发展较快,各地相继引进外来瘦肉型种公猪与当地母猪进行杂交改良,获得显著的社会效益和经济效益。我县自84年开始,分批引进了杜洛克、大约克、长白、汉普夏等外来瘦肉型种公猪,经三年的饲养使用,发现杜洛克品种的公猪睾丸肿大,经诊断属于猪遗传性自身免疫病,性染色单体(二倍体减少)造成,现将病例报道如下: 相似文献
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近年来,我们北京平谷区紧紧围绕首都林业“三大体系”建设,进一步整合林业资源,不断加快绿化造林步伐,取得了可喜的成绩。 相似文献
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发病情况
某鹌鹑养殖户饲养的18000只鹌鹑于15日龄采食急剧下降,排白色水样稀便,并伴有少量血丝,养殖户怀疑是肠炎和球虫病混合感染,投喂氟哌酸和地克珠利治疗,用药2天病情未见好转,死亡增多,次日来站就诊。 相似文献
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