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表达新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒的筛选 总被引:1,自引:0,他引:1
将转移载体P11SF和PN11SF分别与282E4株鸡痘病毒(282E4 strain fowlpox virus,282E4FPV)和大空斑株鸡疽病毒(large plaque strain fowlpox virus,LP FPV)共转染鸡胚成纤维细胞,通过蓝斑筛选,得到4株重组鸡痘病毒rFPV282E4-SFA、rFPVLP,-SFA、rFPV282E4-SFB和rFPVLP-SFB,通过PCR和间接免疫荧光鉴定均为阳性,另外将各重组病毒分别传20代,测其遗传稳定性,结果显示均具有良好的稳定性。对SPF鸡进行免疫效力试验,攻毒后均100%保护,而对于商品鸡,保护率分别为64%、60%、52%和88%。 相似文献
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鸡痘病毒通用高效表达载体的构建及其初步应用 总被引:4,自引:0,他引:4
利用分子克隆技术对本室构建的高效鸡痘病毒表达载体 p1 1 S进行改造 ,在其人工合成禽痘病毒 ( FPV)强启动子 Ps的下游引入含 7个单一酶切位点的多克隆位点 ( MCS) ,构建了便于外源基因插入的通用性更强的高效单表达载体 p N1 1 S。然后将 FPV早晚期启动子 PE/ L 及其启动的鹅源新城疫病毒 NDV ZJ1株的 F基因一并插入 p N1 1 S中 ,使PE/ L 与 Ps反向串联 ,从而构建出 1个含 NDV ZJ1株 F基因的重组 FPV高效双表达载体 p N1 1 SEF,其 MCS可以用于插入其他外源基因。在此基础上 ,将 NDV ZJ1株的 HN基因插入 p N1 1 SEF的 Ps启动子下游的 MCS中 ,构建了共表达 NDV ZJ1株 F和 HN基因的重组 FPV双表达载体 p N1 1 SEFHN。将 p H1 1 SEFHN质粒 DNA与 FPV2 82 E4株共转染 CEF,得到共表达 NDV ZJ1株和 HN基因的重组 FPV,间接免疫荧光实验初步证明外源基因得到了较好的表达。表明所构建的通用高效 FPV表达载体有利于高效基因工程活载体疫苗的研制 ,具有广阔的应用前景 相似文献
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动物福利壁垒对中国动物及其产品与相关服务国际贸易的影响与对策建议 总被引:2,自引:0,他引:2
作者剖析了动物福利贸易壁垒成因、特征和对国际贸易的影响,指出了中国动物福利存在的问题及与发达国家的差距,评估了动物福利政策对中国动物、动物产品及相关服务出口贸易的影响。提出了构建既适合中国国情又与国际接轨的出入境动物福利保障体系的框架建议:①应积极推动中国动物福利法立法进程;②要切实提高中国动物福利保障水平;③应先行强化出入境动物福利立法;④应在进出口动物福利立法中引入企业推动模式;⑤要充分利用WTO机制应对国外动物福利壁垒;⑥要建立健全动物福利贸易壁垒预警机制;⑦要应用危害分析与关键控制点原理管理动物福利;⑧要逐步建立农场动物福利认证制度。 相似文献
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H9亚型禽流感病毒间接免疫荧光检测方法的建立与比较 总被引:1,自引:0,他引:1
将禽流感病毒(AIV)接种犬肾上皮细胞(MDCK),24h后以鸡抗禽流感抗体和兔抗鸡荧光抗体进行间接免疫荧光试验(IFA),结果于细胞核、细胞质内观察到特异性的荧光。利用96孔细胞板培养MDCK细胞,以间接免疫荧光作为判定指标对禽流感病毒进行毒力测定,并与禽流感病毒通用荧光反转录-聚合酶链反应(荧光RT-PCR)检测方法进行比较。结果表明间接IFA、荧光RT-PCR对同一样品检测的最高稀释度分别为10-5.25TCID50和10-6,Ct<30,两种方法对禽流感病毒的检测敏感性均很高。但由于荧光RT-PCR仅对抽提的RNA进行检测,而间接IFA是对禽流感活病毒进行检测,因此在临床样品检测和动物产品检疫中间接IFA更具准确性和实用性。 相似文献
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为了研究猴B病毒(BV)抗体的快速检测方法,试验以采用基因工程技术制备BV的BV32基因原核表达产物重组BV32蛋白作为抗原诊断试剂,建立免疫梳(IC)方法用于特异性检测试验猴血清中抗BV的抗体IgG。结果表明:最佳抗原包被量为0.01 mg/m L;制备好的免疫梳均能够特异性检测到相应的猴B病毒阳性血清而不与其他病毒血清间发生交叉反应;能够敏感地检测到1∶400倍稀释的BV阳性血清;同一样品重复检测3次,变异系数(CV)均小于10%;利用该检测方法对40份猴血清样品进行检测,与ELISA法检测结果一致率为98%,Kappa系数为0.997。说明免疫梳检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。 相似文献