用RT—PCR技术检测蓝乱病病毒的研究

蓝舌病病毒非结构蛋白ＮＳ１基因在各型中具有高同源性，可作为群特异检测的依据。采用ＮＳ１基因中２１０ｂｐ的区段作为ＰＣＲ扩增模板，经逆转录酶合成第一股ｃＤＮＡ后，再进行ＰＣＲ扩增。结果对ＢＴＶ可扩增出特异片段，而鹿流行性出血病病毒和茨城病病毒则不出现扩增。     

应用PCR技术检测伪狂犬病病毒

试验针对伪狂犬病病毒基因的特点,设计一对引物,对伪狂犬病病毒的DNA和细胞毒直接煮沸产物进行PCR扩增,30个循环后,经电泳分离,紫外灯下可见到一条明显的DNA带,其大小为262 bp。     

应用~(32)P标记核酸探针检测牛传染性鼻气管炎病毒的研究初报

本文在我国首次报道应用核酸探针检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)。经培养、纯化IBRV,抽提IBRV全基因组DNA,用缺口翻译法标记上~(32)P,在硝酸纤维膜上进行打点杂交。试验结果表明,采用~(32)P标记的核酸探针,可检测出10Pg的IBRV—DNA,能明显区别IBRV感染细胞和未感染的正常细胞,具有相当高的灵敏度和特异性,同Dorman报道的结果相似。 应用核酸探针检测病毒核酸的技术,近年来有了突破性的进展,有的国外学者称之为第四代检测技术。其基本原理是利用放射性同位素标记的DNA或RNA(即核酸探针)与固定在硝基纤维素膜上或玻片上的单链核酸进行杂交,经过放射自显影,在X光片或感光乳胶中可看到特定的核酸片段的踪迹。由于这一技术具有灵敏度高,特异性强的优点,在医学临床诊断中已显示出它的优越性,文献报道日趋见多。在动物病毒研究方面已见到了用核酸探针检测蓝舌病,牛传染性鼻气管炎鸡马立克病,猪伪狂犬病、犬瘟热、传染性喉气管炎等病毒感染的报道。 Dorman,M,A在1985年首先报道了利用生物素标记的IBRV—DNA的HindⅢ酶切片段可检测出10pg(10~(-11)g)IBRV—DNA。随后,Dunn,D.C和Pacciarini,L以及Brunner,D也相继作了报道。我们用~(32)P标记的IBRV—DNA全基因组做为核酸探针,进行了一系列的研究,初步结果表明,我们     

用生物素标记核酸探针检测牛传染性鼻气管炎病毒的研究

本文报道了应用生物素标记核酸探针检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的研究。将纯化的IBR病毒全基因组,用缺口翻译方法把生物素——尿苷三磷酸(Biotin—dUTP)掺入双链IBRV—DNA上作为探针,与点在硝酸纤维膜上的样品进行打点杂交,然后在链霉亲和素——碱性磷酸酶中孵育,用氮蓝四唑和5—溴—4—氯—3—吲哚磷酸作用,阳性反应呈现紫色斑点。通过检测样品中IBRV—DNA同源序列,以确定是否存在IBRV。结果表明:应用生物素核酸探针可检出10pg的IBRV—DNA,具有灵敏、快速、无放射性污染、探针保存时间长等优点,为IBRVI临床检测提供了一个有力的手段。     

用PCR技术检测牛胎儿弯曲杆菌

在国内首次用PCR技术检测牛胎儿弯曲杆菌(Campylobacterfetus),试验结果表明,灭菌生理盐水中的胎儿弯曲杆菌胎儿亚种或性病亚种均可检出;而空肠弯曲杆菌、葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌等均为阴性。本法特异性和灵敏度很高,甚至可检出样品中的一个菌体。应用前景良好。     

用RT—PCR技术检测蓝舌病病毒的研究

蓝舌病病毒非结构蛋白NS_1基因在各型中具有高同源性,可作为群特异性检测的依据。采用NS_1基因中210bp的区段作为PCR扩增模板,经逆转录酶合成第一股cDNA后,再进行PCR扩增。结果对BTV可扩增出特异片段,而鹿流行性出血病病毒和茨城病病毒则不出现扩增。