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1.
为进一步证明猪瘟活疫苗(传代细胞源)在猪场实际使用的免疫效力,本试验将中试生产的5批疫苗在广东的广州、韶关地区各选一个猪场进行临床应用试验。按照20日龄首免,60日龄二免的免疫程序,并分别于二免后第28天和第90天从5批疫苗免疫猪中各抽取5头,连同条件相同的对照猪各5头,在广东永顺生物制药股份有限公司负压动物舍进行猪瘟强毒攻击,观察发病死亡情况,评估猪瘟活疫苗(传代细胞源)在猪场实际应用的免疫保护效果。试验结果显示,5批疫苗免疫猪均能有效抵抗猪瘟强毒的攻击,既无死亡,也无猪瘟临床症状。表明在临床条件下应用猪瘟活疫苗(传代细胞源)免疫猪能产生很好的免疫保护力。 相似文献
2.
3.
4.
RNA可视化原位杂交技术对感染细胞中猪瘟病毒RNA定位与分布 总被引:2,自引:2,他引:0
【目的】为研究CSFV RNA在体外感染细胞中的分布及定位,建立了一种准确、敏感的RNA可视化原位杂交技术。【方法】本研究通过比对Gen Bank中公布的CSFV、BVDV和BDV全序列,避开BVDV和BDV的同源区,设计了CSFV RNA及内参基因β-actin的特异探针。以CSFV中等致病力毒株(He BHH1/95)为参考毒株,在PK15细胞中培养病毒,加入RNA可视化原位杂交的特异探针和相应试剂,采用荧光共聚焦显微镜进行成像观察。通过综合分析观测结果、荧光强度、重复性等因素,采用正交试验优化了对原位杂交过程中具有重要影响的蛋白酶K浓度和甲醛固定时间,建立了CSFV RNA可视化原位杂交技术,并与FAT方法比较该技术灵敏度;用我国目前流行的CSFV 1.1、2.1、2.2、2.3基因亚型及BVDV、PPV、PRV和PCV-2病毒进行特异性试验。最终,以CSFV强致病力毒株(SM)接种PK15细胞,病毒感染后0.5、1、3、6、8、10、14、18、24、36、48、72、96h(hours post inoculation,hpi)取样,每个时间点2个重复,采用CSFV RNA可视化原位杂交技术进行检测。为佐证病毒蛋白在细胞中的定位及分布,同时采用FAT方法对SM株E2蛋白在PK15细胞中的表达情况进行动态研究。【结果】采用该技术在荧光共聚焦显微镜下可观察到CSFV RNA在细胞中的定位;当蛋白酶K浓度为1:1 000、甲醛固定时间为30min时为最优反应条件;灵敏度试验表明该技术对病毒的检测极限为10-8/200μL,比FAT高3.5个数量级;特异性试验结果显示该探针能与CSFV 1.1、2.1、2.2、2.3亚型结合,与BVDV、PPV、PCV-2、PRV无交叉反应。采用该技术对CSFV RNA感染后在靶细胞中的定位与分布研究结果显示:0.5hpi在胞核和胞浆均能检测到RNA,0.5—6hpi RNA主要分布于胞核内并在核内富集;10hpi胞浆内RNA逐渐增多,胞核内RNA逐渐减少,24hpi RNA主要集中在胞浆内细胞核周围;36hpi核外RNA大量聚集增多,72hpi达到峰值;96hpi RNA总量有所下降。而FAT结果显示:8hpi在少数细胞的胞浆内检测到病毒E2蛋白,10—24hpi蛋白表达数量一直较少;36hpi蛋白表达量不断增多,72hpi达到最大值;96hpi荧光信号由强变弱。病毒蛋白在细胞浆内的聚集数量与细胞浆中RNA含量成正相关。【结论】首次建立了CSFV RNA可视化原位杂交检测技术,并对CSFV强致病力毒株在细胞中的RNA定位分布进行了研究,发现病毒RNA吸附和进入靶细胞的时间早于0.5hpi,观察到CSFV RNA有在细胞核内的生活史。 相似文献
5.
为了更好地了解禽源沙门菌对四环素的耐药性及耐药基因分布,从不同来源的家禽样品中分离沙门菌,调查其对四环素的耐药性以及耐药菌株中8种四环素耐药基因[tet(A)、tet(B)、tet(C)、tet(W)、tet(M)、tet(D)、tet(K)和tet(L)]的携带情况.结果表明,18.8%的沙门菌分离株对四环素耐药,健康成鸡分离株对四环素的耐药性明显高于雏鸡、死胚或病禽分离株;四环素耐药株中tet(A)、tet(B)和tet(M)基因的携带比例分别为73.1%、11.5%和3.8%,说明沙门菌对四环素的耐药机制以tet(A)和tet(B)基因介导的主动外排为主.本研究首次在对四环素耐药的沙门菌中检测到tet(M)基因,说明tet(M)基因在沙门菌对四环素的耐药性方面也具有潜在的作用. 相似文献
6.
3株猪Ⅱ型圆环病毒的分离及基因组序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为了解混合感染中猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)毒株的遗传变异特性,本研究对2009年与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染的病料中分离的3株PCV2通过PCR、免疫荧光等进行初步鉴定,并扩增病毒全基因组,用DNAStar对序列进行拼接和分析。结果表明:分离得到的HUN-09株(GQ449670)、HUB-09株(GQ449671)和SD-09株(GQ449669)3个PCV2毒株其全基因组长度均为1768bp,与国内外参考毒株核苷酸序列同源性为95%~99.7%,3个分离株之间的核苷酸序列同源性为97.6%~98.5%,与PCV1分离株核苷酸序列同源性为69%~70%。进化分析表明,本研究2009年分离的3株PCV2属于基因型PCV-2a。 相似文献
7.
根据GenBank公布的24株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株和5株PRRSV经典毒株的保守区基因序列,使用PrimerExpress 3.0软件设计并合成实时荧光定量PCR(Real-timeFluorescent Quantitative PCR,Real-time FQ-PCR)用引物和探针,建立了Real-time FQ-PCR检测方法以鉴别检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒。用建立的检测方法对已定量的10倍倍比稀释的质粒pGET-258为标准品进行检测,并与常规PCR进行比较。结果显示,该Real-time FQ-PCR方法敏感度可达1.5个拷贝,比常规PCR敏感度高100倍,且批内和批间重复性检测结果的变异系数均小于2%。用该方法与常规PCR方法及病毒分离方法对18份临床样品进行对比检测,显示该方法灵敏度高、成本低,并且能够对样品中病毒进行定量,为高致病性猪繁殖与呼吸综合征的快速鉴别诊断提供了有效的技术手段。 相似文献
8.
以试管培养基中连续继代 36 次的鸡败血霉形体 F36 定为疫苗制造的起始代次,将其在人工培养基中再传 4、6、8、10、14 代(简称 F40、 F42、 F44、 F46、 F50),分别制成疫苗,各接种 8 日龄和 30 日龄雏鸡,作免疫原性和病原性测定,观察 F株的稳定性。病原性测定结果表明,各代次疫苗以 2~3 倍的免疫剂量接种感染,不引起鸡的呼吸道症状和气囊炎,对鸡不致病;免疫原性测定结果表明,用各代次疫苗接种鸡都能产生良好的免疫力,能有效地抵抗强毒 R 株的攻击,保护气囊不受损伤。 相似文献
9.
如何预防和控制鸡毒支原体引起的慢性呼吸道疾病 总被引:2,自引:0,他引:2
宁宜宝 《河南畜牧兽医(综合版)》2000,21(4):4-5
鸡毒支原体感染也称鸡慢性呼吸道病(CRD) ,在火鸡则称传染性窦炎 ,是由病原鸡毒支原体引起的一类疾病。临床上以呼吸症状为主 ,表现为咳嗽 ,流鼻涕 ,严重时呼吸困难或张口呼吸 ,可清楚地听到湿性罗音。病程长 ,发展慢。剖检可见到鼻道、气管卡他性渗出物和严重的气囊炎。发病率高 ,造成幼雏的淘汰率上升和成年母鸡的产蛋率下降 ,死亡率低。是造成养鸡业严重经济损失的疾病之一。本病在50年代就在一些国家引起重视 ,由于该病对养鸡业造成重大经济损失 ,美国农业部1952年成立调查委员会专门对本病进行调查研究 ,经过10年的工作 ,… 相似文献
10.
甲病毒属于披膜病毒科,是一类有包膜的单股正链RNA病毒。近些年来,国内外有关甲病毒载体的研究非常活跃,其已被用于疫苗研究、基因治疗以及分子生物学等研究领域。基于甲病毒载体的构造原理,将其分为三类,分别为复制完全型载体、复制缺陷型载体和DNA/RNA载体。就这三类载体的改造过程进行了探讨,并对这三类载体的特点及其应用研究进展等方面进行了阐述,以期为开发出更安全、更有效的甲病毒载体提供参考。 相似文献