2018年进口奶牛检疫情况分析

随着十多年的超速发展,我国奶牛业已由单一品种的散养方式逐步转变为高产品种的规模化、集约化养殖方式。然而,我国奶牛整体遗传素质不高,多为进口高产奶牛与地方奶牛的低代次改良品种,以致原奶质量参差不齐,严重制约了我国奶业的健康发展。因此,大规模引进高品质的奶牛品种,已成为我国优化奶牛基因、推动畜牧业产业化发展的重要抓手,但同时也为检疫工作带来了挑战。本文通过分析2018年我国进口奶牛数量、来源国、疫病检出、进境口岸及隔离检疫场分布等数据,结合各来源国的疫病防控特点,有针对性地提出检疫要点,为我国全面提升进口奶牛的检疫水平、切实做好奶牛群体遗传改良计划、加快推进畜牧业转型升级提供参考。     

牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定

【目的】为了解牛病毒性腹泻/黏膜病在新疆的流行现状,对疑似该病病料进行地方毒株的分离,并对其进行鉴定。【方法】将采自新疆不同地区疑似牛病毒性腹泻的病料接种MDBK细胞,并盲传2~4代;对分离株进行毒力测定及中和试验,应用RT-PCR方法扩增分离株的5’UTR基因片段并克隆测序分析。【结果】分离到的8株病毒可发生细胞病变,在MDBK细胞上的TCID50为103~106。毒株血清中和实验结果,RT-PCR反应结果,克隆后重组质粒经BamHI、HindIII双酶切鉴定、重组质粒PCR鉴定结果均得到预计扩增片段。重组质粒测序结果与GenBank中已发表的牛病毒性腹泻病毒NADL株序列同源性为82.0%~94.8%。【结论】证实所分离到的病毒为BVDV,命名为B-S-1、B-S-2、B-S-3、B-S-4、B-S-5、B-S-6、B-G-1和B-G-2。     

猪瘟病毒E2(gp55)基因在昆虫细胞中的表达

将除去3'端跨膜区的猪瘟病毒E2基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb,获得重组质粒pFBHT-E2,转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,发生转座作用,经抗性及蓝白斑筛选得到含E2基因的重组载体质粒rBacmid-E2,以脂质体介导的方法将此重组载体质粒转染sf9昆虫细胞,获得重组病毒,命名为rvBac-E2.经SDS-PAGE和Western-blot及ELISA等方法检测,结果表明,此E2基因在昆虫细胞中正确表达,表达的蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应.     

加拿大开展兽医体系效能评估的做法及启示

在“同一健康”倡议下,世界动物卫生组织（WOAH）构建了兽医体系效能（PVS）评估标准框架,通过在全球范围内大力推广PVS评估工作,持续加强各成员兽医机构能力建设,实现全球动物卫生、动物福利及公共卫生状况的整体改善。加拿大是WOAH成员中为数不多的,较早申请完成PVS专家评估并公开发表评估报告的发达国家之一,以卓越的表现充分展示了其世界领先水平的兽医服务能力。加拿大开展PVS评估的经验做法包括：运用WOAH PVS评估标准理念开展内部评估,通过查找、分析与既定目标或国际标准的差距,实现重点职能领域核心能力的定向提升;通过主动申请WOAH专家评估,紧密结合全球发展战略和自身需求,确定优先改进和发展事项。这些做法启示我国：应聚焦核心能力建设,构建科学适用的内部效能评估体系;加强交流协作,建立国家层面的跨部门效能评估协调机制;推动联合共治,在重要口岸城市开展联合效能评估试点工作。本文为我国引进、推广PVS评估系统方法,以效能评估为抓手,分步、有序促进国门生物安全核心能力建设,提升体制机制效能提供了借鉴。     

牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测

采用Svanova公司牛病毒性腹泻病毒血清抗体ELISA抗体检测试剂盒对采自新疆10个不同地区的875份牛血清进行了牛病毒性腹泻病毒血清抗体检测,共检出抗体阳性血清759份,最高阳性率为100％,最低为55.0％,平均为86.7％.检测结果表明该病已在新疆普遍存在,感染没有明确的地域分布规律.根据ELISA检测结果,从...     

新疆地区牛新孢子虫病血清抗体检测及结果分析

为了解新疆地区牛新孢子虫病的流行情况,用ELISA方法对采自新疆6个地区327份的牛血清进行了新孢子虫病的抗体检测,并以第一次检测结果为依据,对20头牛进行了5次连续采样检测,每次间隔30～40天。检测结果表明,该病在新疆不同地区都有不同程度的发生和流行,平均阳性率为24.5%,且在年龄大和流产牛群中阳性率偏高,血清抗体阳性持续时间至少半年以上。     

牛新孢子虫二温式PCR检测方法的建立与应用

根据已发表的犬新孢子虫种属特异性基因片段Nc-5基因序列设计合成一对特异性引物,采用均匀设计方法对引物浓度、Mg2+浓度、dNTP、Taq酶和退火温度进行了优化,建立了检测牛新孢子虫的二温式PCR方法.该方法对牛新孢子虫DNA的检测灵敏度为23.5 fg/反应.应用该方法对50份全血和8份流产胎儿样本进行了检测,有3份...     

牛传染性鼻气管炎病毒内标荧光定量PCR检测方法的建立与应用

根据牛疱疹病毒1型(BHV1)gB基因序列,设计高度保守的引物和荧光探针,并扩增包含有荧光PCR扩增区域的核酸片段,通过凝胶纯化回收,将该片段克隆至pMD18-T载体,经鉴定后获得目标模板。通过碱基重排和引物设计,用搭桥法PCR扩增,获得BHV1荧光定量PCR内标模板。对内标模板的添加量和反应条件进行优化,建立了含有内标物的荧光定量PCR检测体系。该体系可以检测到10个拷贝/PCR反应的重组质粒,对BHV1可检测到0.01TCID50的病毒粒子,灵敏度比常规PCR和病毒分离高10～100倍,与不加内标的荧光PCR检测灵敏度相当。更重要的是,内标模板可以对反应体系进行监测,指示并校正假阴性结果,从而达到提高PCR检测准确率的目的。对临床收集的40份牛精液(其中8份已经鉴定为阳性)和10份牛鼻腔拭子(其中2份已经鉴定为阳性)用该体系进行检测,均得到预期结果。该方法的建立可用来对临床样品中BHV1的快速检测和实验室的质量控制。