肉品中莱克多巴胺残留的酶联免疫快速检测方法的建立

用自主制备的莱克多巴胺特异性抗体建立了猪肉样品中莱克多巴胺药物残留的间接竞争酶联免疫检测方法,对该检测体系的灵敏度、准确度、精密度、特异性等性能进行了测定,并将该检测系统与高效液相色谱法(HPLC)进行了对比分析。结果显示:莱克多巴胺药物残留的酶联免疫检测体系的检测范围为1～100 ng,灵敏度为0.12 ng/mL,检测限为1 ng/mL,回收率为80%～100%,与同类药物如盐酸克仑特罗、硫酸特布他林及硫酸克仑特罗的交叉反应率均小于0.01%;采用HPLC方法进行莱克多巴胺药物残留的检测时,其检测范围为10～200μg/mL,检测限为1μg/mL,回收率为83%～100%。该方法与高效液相色谱法相比灵敏度较高,特异性强,检测结果准确度相近,但是在检测结果稳定性方面逊于HPLC方法。     

微生物在农业中的作用

微生物技术是现代生物技术的重要组成部分,它在农业资源开发、环境保护、产业化和结构优化等方面的作用日趋显著,使得农业系统更具生态合理性和功能的良性循环,微生物技术的不断进步及其在农业中广泛和深入的应用必将推动我国生态农业的发展和成熟。     

圆孢芽孢杆菌A95的分离与鉴定

从茶树根际土壤中分离获得一株对多种家蚕病原真菌具有强烈拮抗作用的细菌。经培养特征观察以及生理生化指标测定、16S rDNA碱基序列测定和同源性分析,鉴定该菌株为圆孢芽孢杆菌,定名为Bacillus globisporusA95。该菌株的16S rDNA序列已在GenBank注册(登记号:AY387584)。     

圆孢芽孢杆菌A95抗菌蛋白的分离纯化及性质研究

对圆孢芽孢杆菌(Bacillus globisporus)A95产生的抗菌蛋白进行了分离纯化,并研究了其部分性质。菌株摇瓶发酵液离心后的上清液经硫酸铵40%~60%分级盐析获得粗提物。粗提物溶液经Sephadex G-100柱层析、DEAE-Sepharose Fast F low离子交换层析、Sephadex G-50脱盐纯化获得的抗菌蛋白,通过性质检测、电泳及MALDL-TOF-MS质谱检测,表明为分子量1.464~1.529 kD的一组环肽类抗菌蛋白。该抗菌蛋白对多种家蚕病原真菌具有较好的抗菌活性,参照美国国家临床试验标准化委员会(NCCLS)提出的标准,用微量液基稀释法分别测定了对绿僵菌、白僵菌和黄曲霉的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC)。该抗菌蛋白对热稳定,对胰蛋白酶、蛋白酶K、氯仿有一定的耐受性,对酸部分敏感,对碱稳定。     

植酸酶对肉仔鸡生产性能、免疫功能及肠道微生物的影响

比较在营养水平相同的情况下,使用植酸酶日粮与普通日粮的鸡群在各阶段生产性能、淋巴细胞比率、免疫器官指数及盲肠内容物中大肠杆菌数量的变化。结果显示,添加植酸酶后,试验组较对照组平均日增重提高12%,其中雌性试验组与雌性对照组相比出栏体重增加396 g,平均日增重提高22.6%,差异极显著(P<0.01);植酸酶的使用能够有效降低盲肠大肠杆菌数量,雄性植酸酶组与雄性对照组相比在27,34,41日龄大肠杆菌数量降幅分别达到23%,34%和50%,而雌性植酸酶组与雌性对照组相比除34日龄外平均降幅达到50%。添加植酸酶后肉鸡巨噬细胞吞噬指数、免疫器官指数均出现不同程度下降。     

沙丁胺醇残留的酶联免疫检测方法的建立

用自主制备的沙丁胺醇特异性抗体建立了针对沙丁胺醇残留的间接竞争酶联免疫检测方法,对该检测体系的灵敏度、准确度、精密度、特异性等性能进行了测定,并与高效液相色谱方法进行了对比性分析。结果显示:沙丁胺醇药物残留的间接竞争酶联免疫检测体系的检测范围为1～80ng/mL,灵敏度为0.58ng/mL,检测限为1ng/mL,回收率为70～99%,与盐酸克仑特罗、硫酸特布他林交叉反应率分别为107%、10%,与盐酸莱克多巴胺及肾上腺素的交叉反应率小于0.01%;采用HPLC方法进行沙丁胺醇药物残留的检测时,其检测范围为10μg/mL～200μg/mL,检测限为1μg/mL,回收率为80～95%。该方法与高效液相色谱法相比灵敏度较高,特异性强,检测结果准确度相近,但是在检测结果稳定性方面逊与HPLC方法。     

重组鸡γ干扰素的高密度发酵生产及对肉鸡巨嗜细胞活性影响

研究了培养条件和诱导条件等对工程菌CH1的最终菌体量和表达量的影响,确立最优的高密度发酵条件,还探讨了不同补料流加方式对菌体生长的影响.结果表明,DO-stat流加方式具有显著增加菌体量的作用,发酵液最终菌体密度D600达25.31,湿菌体53.4 g/L,蛋白表达量也达到32.3%,实现了ChIFN-γ的高密度发酵和高表达.初步纯化的鸡γ干扰素以500 U/只的剂量对双A肉鸡口服给药,可以提高机体的巨嗜细胞吞噬活性(P<0.05).本试验为鸡γ干扰素的工业化生产和临床应用提供了依据.     

鸡脾转移因子对肉鸡免疫应答及防病效果的研究

以肉鸡脾为原料，采用超滤法制备鸡脾转移因子（Transferfactor，TF）。单独使用鸡脾TF以及与疫苗联合使用，比较不同剂量、不同使用时间对肉鸡平均日增重、死亡率、淋巴细胞比率、免疫器官指数、巨噬细胞吞噬指数的影响。结果显示，当鸡群处于健康状况时，使用鸡脾TF对试验结果影响不大，但当鸡群处于非健康状态时，使用鸡脾TF可以改善免疫应答指标，明显提高鸡群的抗病力和日增重。疫苗加TF组与单用疫苗组相比，差异不显著（P〉0．05），但在降低死亡率和促进鸡增重以及提高巨噬细胞吞噬功能方面，疫苗组与对照组差异显著（P〈0．05），疫苗加TF组与对照组差异极显著（P〈0．01）。处于亚健康状态的鸡群使用鸡脾TF可提高机体抗病力，可与疫苗免疫同时使用，临床饮水使用的最佳剂量为0．5mL／只。     

3拷贝鸡胸腺素α1基因在大肠杆菌中的融合表达及活性分析

为表达鸡胸腺素α1(Thymosin alpha 1,Tα 1),并对其进行纯化及生物学活性分析,本研究根据大肠杆菌基因密码子偏嗜性对Tα 1基因进行优化,人工合成了Tα1三拷贝融合基因.并将其克隆至原核表达载体pET-30a中,转化至BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达和镍柱纯化,获得融合蛋白.融合蛋白经羟胺切...